维普hpw. htp/www.cqvip.com 安徽农业科学200129(1553 Jowarnal of Authu Agnenlnral iene- 草鱼出血病的快速诊断方法的研究 王永杰戚少燕陈宇管远亮李艳和安农业科学产研究折合肥2331 摘要草鱼出血病是草鱼的主要流疗病,友病快死亡率高草鱼出血病表面症状与等相仙规鱼病诊带来一 定困难究主要从定量定性,特异性结3个值度时此病进行快速含断 关键词草鱼肠孤病毒出快速诊 草角出血病是由呼肠弧柄毒引起的一种急性传索mm电液Tih.以250压4b电冰,染色参照 物主要当年和一足龄的草形成危害,这种发鹤提供的方法 快.死亡高严重危害草鱼种的生产草角出血病的病2试验结果 症主要表现为鱼体部分充血根据充血部位不同,病症可2.1自然感染发病草鱼种与正常草鱼种血液红细胞数 分为不同类型,如肌肉充血件,红鳞红鳃盖型肠炎型 草鱼血液中红细胞数在正常情况下均值为2.35 在鱼病诊治工作中常用肉眼判别以肠道出血为主的出血10个ml,出血病潜伏期为2.11个ml,发病初期大 病与炎,另外严重缺氧和中毒也可能出现类似情况约为1.8、10个ml,发中后期为13×10ml 这都给诊断工作带来一定困、就目前生物制品,实验2.2SLDH同工酶电泳 手段而言,很难用免疫荧光技术、酶标技R技术等 l常草鱼种同工应谓型是5条带,相活 进行快速诊断、为适应生产需要,笔者总结和提出一性dh<sh<h病毒存潜 快速准确的诊断方法 伏期和发展期SLDH间腰相活性含量紊乱,并H在部 1材料与方法 分病鱼的SLDH同丁靠阴极位置明显多出一条区带 1.1实验鱼 2.3免疫电泳 人感与自然感染的草角龄鱼种均自安徽省 对草角种免疫你清进行免电析,发现在出血 农科院水产研究所 病满队期、发展都出现较为清晰的免疫沉淀降线(尽管 1.2血液收集和制备 制 个体间有一定差而在正常角种能发现, 刀切心以卡介苗注射器直接插入旧心3讨论 取血血浆制备时以1肝素作抗凝剂,采血时不用针 草鱼出血病的病状,主要表现为的体部分充血,常笼 头血样在4冰箱中放30min后.以3000rmi离15统地归之于体表脑循环系统病们以血液研究结果分 min,血清放置保存备用 析,血液中血球数下降,反映出,肾器官受损害造成 1.3血液分析,免疫电 佰体生理能严重头,使毛细血管张能血作用减 红细胞计算用n计算框在显微镜下计算弱病鱼SLH同上海活性含出现亲原因可能是病 川草鱼病毒性出血病的组织制成悬液做抗原,标准含毒侵袭肾组织,使生理功能失调,而产生严重血和肾功 出血病抗体的血清作抗体:免疫电泳用pH为8.6的巴能夫调、免疫沉降线的差异,证明鱼类血中各种蛋门 比安缓冲液将琼脂粉按质量分数1%加热溶解后,在每块质的量受多种外因素的影响,个体异大 75nmx25ma载玻片上注入3溶解的琼脂、电泳槽4参考文献 中用同一缓冲溶液加样后在4℃条件下以每块玻片7m4】吴鹤龄,遗传学实验方法与技术[M.北京:科学出版 的恒定电流电泳9min,反应48-72h冉生理盐水洗社,1985 涤3次.置37℃干燥至胶片状 江育宁常见病毒实验技术M]北京:科学出版社, 1.4乳酸脱氢酶同工酶电与染色 194 样品制备:取出活鱼肝脏.低温下用蒸馏水漂洗血3中国科学院水生生物研究所草鱼出血病病原的研究 污匀桨离心30min取上清液,转速12000rmin.电、]、水生生物学集刊,1986(3):237-272. 采用垂直板聚内烯胺胶电泳分离同工酶凝胶厚度1.04朱心芙草鱼出血病的生态防治技术研究J].鱼病简 讯1986,():76-79. 注安徽省五科技攻项目 5林光华鲫鱼血液的研究J].动物学报,1999,25(2) 作者简:王杰16-1.男,安省肥两县人,理研究员,从事鱼 210-2 19 病 收稀a期:3-07-24 (责任编辑:孙红忠责任校对:孙红忠
篑澈农业科 学．~A)01．29(4)：553 JIH】m of_^11h… ^胛 culluml 。iee．ces 草 鱼 出血 病 的快 速 诊 断方 法 的研 究 王永杰 戚少燕 陈 宇 管远亮 李艳扣 ．安 肯农业科 茳 产研究所．肥230(13 摘要 草鱼出血病是草鱼的王要流行病．发病快、死亡率高 草鱼出血稿表 面症状与晒 是等相娄似 ．培 规鱼婀诤斯带 来一 定 困难 奉 宄主要 ^L定 量 、定性 特 异性鲒夸 3A 角度对此 病进 行快速诊 美键词 草鱼；呼肺弧病毒 出血病：陡运诊断 草龟 出血病是 由呼肠 弧痫毒 引起 的 ·种 急 肚传 染 呙．主耍刈 当年和一 足龄的草钷形成危害 ．．这种牺 发病 快 ，死亡牢高 ．严重危害草鱼种 的牛产 革氲m _仉病的病 症主要表现为鱼体部分充血 ．根据充 血部他不 同．病症可 分为小同类 型 ．如 肌 肉充 血性 、红鳍 红鳃 盖， ．肠 炎型： 鱼病诊治 f1rt,常用肉眼判别 以肠道出血为主的出iflL 炳与脑炎 ．另外严 重缺氧 干"中毒也 可 能出现 类似情 况 这都给诊断 1：作带 来一定 难。就 目前 生物制 品 、实验 手段 而 ．很难l『1{免疫 荧光技术 、酶标技 术 H技术 等 进行快速诊断 为适应l，1产需要 ．笔者总结和提 出一套 快速准确的渗断方法 1 材料与方法 11 实验 鱼 人T感染 与自然感染的草龟 l龄鱼种均 来 自安徽省 农科院水产研究所 1．2 血液收集和制备 』{j刀切开闸心脏 ．以 介 注射器直接插 入 阿心 脏 取曲l。血浆制 备时 以 I％肝 素作抗凝 剂 ，采血 时不用针 头 ．血样在 4℃冰箱 l}]放 30rain后 ，以 3t300r／rain离心 I5 rain．m湍放置 4。c保存备用 13 血液分析 ，免疫电泳 红细胞计算 ，用 nb 计算 框，在显微镜下计算 。 【I』 鱼精毒排 出血病 的组织 制成悬液做抗原 ，用标准含 出血病抗体的血清作抗体 。免疫 电泳用 口H为 86的 巴 比妥缓冲液将琼脂粉按质量分数 1％加热溶解后 ，在每块 75I~1[／1x25【【un载玻片上注八 3nd溶解的琼脂。电泳槽 … 一缓冲溶液加样后在 4'E条件下 “每块玻片 7 r 的叵定电流电泳 90mil1．反应 48～72h．再{1生理盐水洗 涤 3次 ．置 37℃ f燥至腋片状 1．4 乳酸脱氧酶 同工酶电泳与染色 样品制备 ：取 出活 鱼肝脏 ，低温下 用蒸馏 水漂洗 血 污．匀浆离心 30thin取上清液 ，转速 t2000r／mln一电泳 ， 采用乖直板 聚 丙烯 胺胶 电泳 分离 同工 酶 ，凝胶 厚度 10 注 ：普 微 省“九 五 科 技 攻 关 项 目 作 者 简 王 永 (1968— 1．男 ． 徽 省肥 西县 凡 ．助 理 研 究 员 ．肮 事 鱼 雨 研 范 收 箱 日期 ：2∞ J．0724 一砌 ．电泳澉为 ~-ttCI．以 15()V世压 4-_电泳．染色参j}ci 晏鹤龄 攫供的方缇 2 试 验 结果 21 自然感染发病草鱼种与正 常草鱼种血液红细胞数 草仙血撒r{红细胞数在 常‘} F—P均值为 235x io6个 nl，出m病 潜伏期为 2 I×l( 个／m1．发病初期 大 约为 I8×1co个／mI．发病中^ 新为 13×} 个／nil 2．2 sum 同工酶电泳 『l。常草鱼种 SLI)I[同 I一酶谱 足 5条 ．晦相l州活 SII)Hl<SLDH <SI1)H]<SLI)I14<SI1) ． 病毒存 潜 伏蛸干¨发展期 sI_DH间1酶相埘活性含蔚紊 乱．并 且在部 分病有的 SLDH同丁酶靠 阴极位置叫显多出 一条区带 23 免疫电泳 对草龟种免疫 清进行 I免疫 电诛 {’机．发观在 帆 痫潜伏期 、发展期都m现较为清晰的免疫 )【淀降线 (尽管 个体 自一定差 )： 在 常 鱼种 禾能发 3 讨 论 草鱼H1血病的病状 ，主要 丧现为 件部分 充m，常笼 统地Ⅱ]之于体表炳或循环系统痫 似 -^ 液研究结果分 析 ．缸液 组 l【IL球数 F降 ．匣映m ．肾器 受损害 ．造成 龟体 理功 能严雨 火 心，使 t细 管 {_rIK．凝 干I：片；减 弱 一炳鱼 sJI)FI同 ll黪活 含 Ⅲ脚 紊乱 蟓 呵能是病 毒侵袭肾组织 ，使生 功能失调 ．『产 '1-严 重贫 和肾功 能失间 免疫沉 降线 的差异，证明鱼类 消 r{I各种蛋 ll 质的量受多种外界 固素的影响 ．个体芳 异大 4 参考文献 1 昊鹤龄 遗侍学实验方法与技 术[M]．北京 ：科学 出版 社 ．1985 2 江育宁 常见病毒 爰验技 术：M]北京 ：科 学 出版 社． 1994 3 中国科学院水生生物研 究所 草鱼 出血病病原的研 究 [J]、水生生物学集刊 ．1986，(3)：237—272 4 朱一0芙．草鱼 出血病的生态防治技 术研 究[J]鱼病 简 讯 ．1986，(4)：76—79 5 林光华 ．鲫鱼血液的研 究【J]动物 学报 ，1999．25(2)： 210—2l9 (责任编辑 ：孙红忠 责任校对 ：孙红忠) 维普资讯 http://www.cqvip.com