《草鱼出血病》草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究：疫苗株的免疫原性及其有效免疫....pdf_大学文库

维普资hpw http/www.cqvip.com 第13卷第2期水产学报 Vol.13, No. 2 1989年6月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA June,1989 草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究疫苗株的免疫原性及其有效免疫剂量的比较杨先乐夏春左文功中国水产科学研究院长江水产研究所) 提要本文比较了疫苗株854和F836-w的免疫原性,及其对三寸左右草鱼种的有效免疫剂量。疫苗株-854和F836w均有较强的免疫原性,其保护力可达70% 以上。但试验结果初步证明,FR-84疫苗比F836-w疫苗免疫原性更强。经统计分析, F-854疫苗的免疫保护力可达88.9±12.0(6%,血清中和抗体效价为160.5±58.9(6);而 Fr-836-w疫苗分别只有71.3±14.2(6)%、88.3±262(6);二者有显的差异(0.05> 0.01)注射免疫三寸左右的草鱼种,FR-854的免疫剂量在3-5×10CD尾左右,r -836在8-5x10.CD尾左右,其免疫保护力可达80%左右,同时我们测得R-854 的半数免疫量为10D/ml 关键词草鱼出血病鱼呼肠孤病毒,细胞培养灭活疫苗疫苗株免疫剂量草鱼(Ctenopharymgodom sdellus.etv.)血病是鱼呼肠孤病毒(fV)引起的病毒性疾病(中国科学院武汉病毒所,中国水产科学研究院长江水产研究所沙市分所草鱼出血病研究协作组,19831984a1984b),严重影响着草鱼的成活率,目前尚无理想的防治方法。1985年以来,我们开始对草鱼肾细胞系CK)培养的鱼呼肠孤病毒灭活疫苗进行研究,通过对其安全性、免疫原性和抗攻击保护力试验,初步证实了该疫苗防治草鱼出血病的可行性,并且测得草鱼对该疫苗的应答时间(水温28左右)为10天,在第20天时,免疫后的草鱼血清中和抗体水平达到峰值,免疫保护力也达到较高水平(杨先乐等, 1986) 对疫苗株的筛选及其抗原性的研究,是制备高效细胞培养灭活疫苗的一个重要方面。但在水产领域,国内外对此报道甚少。疫苗的有效免疫剂量是疫苗的一个重要参数, 学者们曾作过一些研究(高汉姣等,1986 De Kinkelin et ab.1984),但各具特定性。为此我们从十几株野毒株中,初步筛选出二株具有较强免疫原性的病毒株,对其免疫原性进行了详细的比较,并对它们所制备的细胞培养灭活疫苗的有效免疫剂量作了研究本文承卫生部上海生物制品研究所焦水真教授,国农科院哈尔滨兽医研究所徐振东副研究审阅,并提出宝贵意见在此一并致谢收稿年月:198年月;血病 (1)高汉姣等1986。草 84细胞培养灭活疫苗实验研究,疫苗度对出血病免疫力的影响。鱼病简讯,(4):1

第 13卷第2期 198g年 6月水产学报 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA Vo1．13．No．2 Ju ．1989 草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究 — — 疫苗株的免疫原性及其有效免疫剂量的比较枥先乐夏春左文功 (中国水产科学研究院长江水产研究所) 提要本文比较了疫苗株 FR~54和 FR-836-w 的免疫原性，及其对三寸左右草鱼种的有效免疫剂量。疫苗株 F1％~54和 Fl~836-w 均有较强的免疫原性，其保护力可达 70菇 E卫上。但试验结果初步证明，FR-854疫苗比 Fl~836-w 疫苗免疫原性更强。经统计分析， FR~54疫苗的免疫保护力可达 88．9±12．o(6) ，血清中和抗体教价为 16o．5±58．9(6)；而 FR-836-w 疫苗分别只有 71．3±14．2(6)彤、88．3士26．2(6)；=者有显著的差异(O．05>P> 0．01)．注射免疫三寸左右的草鱼种，FR-854的免疫剂量在 3—5X10“ TCID5。／尾左右，FR ≈36’W在 3—5xl0‘TCIDla／尾左右，其免疫保护力可达 8O 左右，同时我们测得 F 采畦舶半效免疫量为 1O“TCID1．／mL 关键词草鱼出血病，鱼呼肠孤病毒，细胞培养灭活疫苗，疫苗株，免疫剂量草鱼 ( mo 池； sa．etV．)出血病是鱼呼肠孤病毒 (FRV)引起的病毒性疾病 (中国科学院武汉病毒所，中国水产科学研究院长江水产研究所沙市分所草鱼出血病研究协作组，1983}1984a~1984b)，严重影响着草鱼的成活率，目前尚无理想的防治方法。1985年以来，我们开始对草鱼肾细胞系(CIK)培养的鱼呼肠孤病毒灭活疫苗进行研究，通过对其安全性、免疫原性和抗攻击保护力试验，初步证实了该疫苗防治草鱼出血病的可行性，并且铡得草鱼对该疫苗的应答时间 (水温 28a左右 )为 lO天，在第 2O天时，免疫后的草鱼血清中和抗体水平达到峰值，免疫保护力也达到较高水平 (杨先乐等， 1986)。对疫苗株的筛选及其抗原性的研究，是制备高效细胞培养灭活疫苗的一个重要方面。但在水产领域，国内外对此报遭甚步。疫苗的有效免疫剂量是疫苗的一个重要参数，学者们曾作过一些研究(高汉姣等，1986 }DeKinkelinet ；．1984)，但各具特定性。为此我们从十几株野毒株中，初步筛选出二株具有较强免疫原性的病毒株，对其免疫原性进行了详细的比较，并对它们所制备的细胞培养灭活疫苗的有效免疫剂量作了研究。 · 本文承卫生都上海生物制品研究所焦永真教授，中国农科院喧尔滨兽医研究所棣振糸副研究员审阅，并提出宝贵意见，在此一并致谢。收稿年月：1988年 8月；同年 12月修改。 (1) 高汉蛀等．1986。草鱼出血病 GCK一84细胞培葬灭活疫苗实验研究，接苗陆鏖对出血病免疫力的影响。鱼霸简讯，(4)：l 维普资讯 http://www.cqvip.com

杨先乐等:草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究材料和方法 1.疫苗的制备与检定将在CIK细胞上增殖稳定的种子毒株FE854和FR836 分别接种于已呈单层的CIK细胞,收获后灭括前测定其病毒滴度(TIm1)。疫苗制备和检定参照杨先乐等 (1986)所采用的方法。由此所得的细跑培养灭活疫苗,分别简称为FB854和FB886W疫苗。病毒灭活前的滴度,作为确定疫苗免疫剂量的依据。 2.疫苗的接种及免疫原性测定采用腹腔注射的方法,对三寸左右的草鱼种进行免疫(水温28°C 左右)。疫苗注射量为08-06m以测定免疫鱼的免疫保护力和血清中和抗体效价评价疫苗的免疫效果(杨先乐等,198)。 3.FR864和FR838-W疫苗棒免疫原性的比较用滴度相近、各批次未作任何稀释的FB~854 和FE-88-W疫苗,分别对草鱼种进行6次免疫接种试验(同时设立不注射疫苗的对照组,以下试验同)。免疫后20天左右检测中和抗体及保护力,并将试验结果进行统计分析,以比较二疫菌株的兔疫原性。另一方面,用无血清的 Eagles MEM准确将FB854和FB88W疫苗稀释成同一滴度后,同时免疫一冬龄草鱼或当年草鱼,20天后,比较其免疫原性 4.疫苗有效免疫剂量和半数免疫量的测定用无血清的 Eagle s MEM将FB84疫苗或FB 836W疫苗作序列稀释后,同时免疫一冬龄草鱼,然后根据免疫20天后的免疫效果,衡量疫苗的有效免疫剂量和半数免疫试验结果疫苗株免疫原性的比较用滴度基本接近的各批次理R854和IR836W疫苗,不进行任何稀释,直接免疫一冬龄或当年草鱼种,试验统计结果表明,二疫苗对草鱼出血病均有一定的抗攻击保护作用,免疫保护力分别为88.9±12.0(6)%、71.3±14,2(6)%*。它们的中和抗体效价分别达1605±58,9(6)883士26.2(6),与对照组有极其显著的差别(P值均小于0.001) 表1)。但是F854疫苗与836W疫苗相比,前者的免疫原性显著高于后者,无论从免疫保护力还是血清中和抗体水平分析,二者均有显著的差异(t检验,0.05>p> 0.01) 另将R854疫苗和FR836W疫苗稀释成同一病毒滴度含量后,同时免疫一冬龄草鱼70尾,当年草鱼50尾,其结果如表2。对一冬龄和当年草鱼种,FR-854疫苗的免疫保护力和血清中和抗体效价都要高于或略高于FR-836-W疫苗。、疫苗有效免疫剂量将滴度为10GID/ml和100CID/ml的理R854疫苗分别稀释成10°,10-1, 2×10-2,10-2和10°,10-1,10-2,使其最终含量为10,105,2×10°,100,10OID ml,然后分成二组免疫一冬龄的草鱼种。试验结果表明,免疫剂量在10TcID/ml( 03-0.5ml)以上的PR854疫苗,保护力均在80%以上,血清中和抗体水平也较高;当免疫剂量下降到104ID/ml(×0.3-0.5m)时,免疫效果明显下降,免疫保护力只有 6%,血清中和抗体效价也下降到12.2±14.4(2),基本上保持在对照水平(表3)。同时,根

2期橱先乐等：草鱼出血病鲺晦培养灭活疫苗的研究 139 材料和方法 1．疫苗的制备与检定将在 CIE 细胞上增殖稳定的种子毒株 FR-854和 FR--836一w．分别接种于已呈单层的 CIE 细胞，收获后灭活前测定其病毒滴度(TCII)¨／mI)。疫苗制各和检定参照杨先乐等 (1986)所采用的方法由此所得的细胞培养死活疫苗分别简称为 FR—854和 F 船 6-w疫苗病毒死活前的滴度，作为确定疫苗免疫剂量的依据． 2．疫苗的接种爱免疫原性测定采用腹腔注射的方法，对三寸左右的草鱼种进行免疫 (水温 28℃ 左右)。疫苗注射量为 0．8一O．缸以测定免疫鱼的免疫保护力和血清中和抗体效价评价疫苗的免疫效果 (杨先乐等，1986)。 5． FR-854和 FR--836-w 疫苗株免疫原性的比较用潇度相近，各批次来作任何稀释的 FR-85~ 和 FR--836-w 疫苗，分别对草鱼种进行 6捷免疫接种试验 (同时设立不注射疫苗的对照组，以下试验同)。免疫后 20天左右，检测中和抗体及保护力，并将试验结果进行统计分析，以比较二疫苗株的免疫原性。另一方面，用无血清的 B le，BMEⅡ 准确将 FR-854和 FR-83e-w 疫苗稀释成同一漓度后，同时免疫一冬龄草鱼斌当年草鱼，2O天后，比较其免疫原性。 4．疫苗有效免疫帮量和半教免疫量的测定用无血清的 F~ ldsMEM 将 F 诅疫苗戒 FR 836--w疫苗作序列稀释后，同时免疫一冬龄草鱼，然后根据免疫 2O天后的免疫效果，衡量疫苗的有效免疫荆量和半数免疫量。试验结果一，疫苗株免疫原性的比较用滴度基本接近的各批次 FR-854和 FR-836-w 疫苗，不进行任何稀释，直接免疫一冬龄或当年草鱼种，试验统计结果表明，二疫苗对草鱼出血病均有一定的抗攻击保护作用，免疫保护力分别为 88．9±12．O(6) 、71．3±14．2(6) 。它们的中和抗体效价分别达 160．5±58．9(6)、88．3±26．2(6)’，与对照组有极其显著的差别(P值均小于0．001) (表 1)。但是 FR-854疫苗与 FR--836-w 疫苗相比，前者的免疫原性显著高于后者，无论从免疫保护力还是血清中和抗体水平分析，二者均有显著的差异 (t检验，0．05>p> 0．01)。另将卫B一854疫苗和 FR-836-w疫苗稀释成同一病毒滴度含量后，同时免疫一冬龄草鱼 7O尾，当年草鱼 5O尾，其结果如表 2。对一冬龄和当年草鱼种，FR-854疫苗的免疫保护力和血清中和抗体效价都要高于或略高于 FR-836-w 疫苗。二、疫苗有效免疫剂量将滴度为 10 TCID 。／ml和 10 TCID。／m]的 ~ -854疫苗分别稀释成 1O。，10～， 2×10_。，10 和 lO。，10～，1O一，使其最终含量为 10 ，10 ，2×10 ，10 ，10“TCID ／ ml，然后分成二组免疫一冬龄的草鱼种。试验结果表明，免疫剂量在 10“TCID-。／ml(× 0．3一 O．5m1)以上的 FR-854疫苗，保护力均在 8O跖以上，血清中和抗体水平也较高；当免疫剂量下降到10‘。TCI 。／ml(×0．3— 0．5m1)时，免疫效果明显下降，免疫保护力只有 6 ，血清中和抗体效价也下降到 12．2±14．4(2)，基本上保持在对照水平 (表 3)。同时，棍维普资讯 http://www.cqvip.com

l4O 水产学报 l3卷表 1 各批发未稀释的近漓度 FR-854和 FR-836-w疫苗免疫原性比较 Table 1 c啪Ⅲ ri∞ n ofim munogenicity between FR-f34sand FR-836-ws which were delivered atal xima抽 doses 试验尾数免疫组对照姐免疫保护力疫苗名称疫苗批号 (免疫姐／存括率血清中和 · 存活率对照蛆 ) 血清中和· (名 ) ( ) 抗体鼓竹 ( ) 抗体效价 7一I ltm／ltm 95．o 256．0 0 39．8 ％． 0 8—I 50／50 70．o 74．8 0 6．6 70． 0 9— 1 0， 0 90．0 l49．7 16 88． 0 船．2 FB—8取 lO一 1 55f醯 96．4 183．1 48．6 蜘． 1 1(—_2 7o1235 ioo．o 14日．7 0 11．2 100． 0 I1— 1 8o／~0 10o．o 】49．7 18．7 l8．8 100． 0 检侧统计 160．6± - X ±S．D．(N) i91．9±11．如． 58． 9(8) 12．6±17．1(6)盘．7±15．船鹋．9土12． 0㈣ 6一 I 60,,170 70．o 89．1 21．4 8． o H ．6 6_2 76／78 83．o 89．8 o 11．2 83． o 扫— 17／17 船．2 228．o 舡．2 4．o 83． 8 FR—I8B—w 23— 1 45，50 6o．o 45．2 o 5． 8 60．o 23_ 2 60 0 6o．o 1 16． 7 18．8 62．o 2垂__l 10 I鼬舾．7 89．1 6． 7 3B．o 84．6 捡溯统计龉．8± L2 X±s．D(N) 74．5±12．啪 26．2(6) ． 7±12．@(6t14．3~12．曲71．8±14．I1 FE-854与 FP~836-W 比较 0．05>p 0．帖 >p > 0．01 > 0． 01 ‘ 血请中和抗体效竹能保护 5O名的细胞不产生病变的最终血请稀释度的倒数 “免疫保护力c)=(一饕冀等藩 )x100 表 2 稀释咸同漓度的 FR-854疫苗与 FR--836-w疫苗免疫原性的比较 Table 2 Com partzcn 0f im m unogenicity between FIL~54 an d ．FR-836--w w hich wm diluted to the equaltitrv with Eagle BM EM 试验日期 ’ I。87年 7月7日～8月28日 1987年8月14日～日月l6目免疫对象一冬龄草鱼种 1当年草鱼种痤苗滴度 Titre(TOI o．／rn1) 10v- 10vE 存活尾数／试验尾数 7／10 ／0,"10 FR—854 竟症保护力存活率( ) 7o 100 疫苗免疫保护力( ) 70 1oo 血清中和抗体效价 74．8 112．4 存活尾数／试验尾数 6／lO 6／10 FR—88B_w 免疫保护力存活率 ( ) 60 6o 疫苗¨ ．免疫保护力 ( ) 6o 62 血清中和抗体效竹 4．5．2 97． 5 有活尾数／试验尾数 O／lO 2／12 对照存活率 ( ) 0 16． 7 血请中和抗体效价 5．B 11． 1 ¨ 经适当处理后使用前在 4℃ 冰箱中已分别保存In 无和 18日天．维普资讯 http://www.cqvip.com

142 水产学报 13卷用疫苗的研究仍很火热,也取得了不少成就初步展示了鱼用疫苗的应用前景。我国关于鱼用疫苗的研究起步较晚,应用尚处于空白(不考虑组织浆疫苗)。从我们的研究结果可以看出,无论是FR-854疫苗还是FR-836-W疫苗,都能获得较理想的免疫效果,这就进一步证明了用免疫预防的方法防治草鱼出血病是一条很有希望的途径 2. Dorson(1984)在概述鱼类应用免疫学时说,免疫原的质和量是判断一种疫苗好坏的重要根据之一一种疫苗成功与否,很大程度上决定该抗原能否诱导鱼体产生保护性抗体。因而筛选具有强抗原性的疫苗株是进行鱼类疫苗研究的一个重要方面,它不仅能提高疫苗的免疫效果,而且也能降低疫苗的成本,为疫苗实际应用和商品化生产奠定基础。我们从分离到的十几株野毒株中,初步筛选出FR-854和FR-836W疫苗株,通过对二毒株所制备的疫苗免疫接种后的抗体应答及抗攻击保护作用比较观察,初步证实了 FR-854比FR-836-W疫苗株的免疫原性更强。 FR-854与F-836-W毒株于不同年份采集于湖北荆沙地区,关于其免疫原性差异的原因我们正在深入研究之中。 3.以病毒灭活前的滴度作为疫苗免疫剂量的参考标准,我们认为是一个可行又较合理的方法。 De Kinkelin等(1984)在研究灭活的病毒性出血性败血症疫苗时,曾以此作为确定疫苗免疫剂量的方法,而高汉姣等(1986)在研究疫苗免疫剂量对免疫力的影响时, 却把疫苗的稀释度作为疫苗免疫剂量的衡量标准。从我们对FR-854疫苗两个同等稀释度(10-)而不同病毒滴度(灭活前)所获得的不同免疫效果的试验(表3),我们认为以病毒灭活前的滴度作为疫苗免疫剂量的衡量标准较为合适。疫苗的有效免疫剂量是疫苗的一个重要参数。关于VHsv灭活疫苗, De Kinkelin 等(1984)确定以每克鱼体重注射2×10°pu(空斑形成单位)的给于量时,其成活率可达 90%左右,根据试验结果,我们初步认为FR-854疫苗的半数免疫为10·ToID/ml。以FR-854疫苗和FR-836-W疫苗对3寸左右的草鱼种注射免疫接种,其免疫剂量分别约为10oD/ml(x0.3-0.5m1)和10· TCIDso/ml(x0.3-0.5ml),即3-5 10…oID/尾和3-5×10OD。/尾时,对草鱼出血病的兔疫保护力可达80%左有。分析不同免疫剂量的FR-854疫苗的免疫效果,我们发瑰10oD/ml似乎比 10TOTD3a/m1接种量对草鱼的免疫效果要好一些。同样,表2中也有类似的现象,只保存111天的F-854疫苗(灭活前病毒滴度为10oI5/ml)却比保存了150天(灭活前滴度为10TOID/m1)的该疫苗的免疫保护力和血清中和抗体效价要低。这是因为偶然的异常,还是因为疫苗免疫过程中导致部分免疫耐受性?假若如此这就提示我们在使用疫苗时要做到免疫剂量适宜。 italian(1980)研究鲤鱼的免疫效果时发现,注射过量的牛血清白蛋白会导致免疫耐受。 Manning et al.(1980)用人类r球蛋白注射1 14日龄的硬头鳟也得到了同样的结果。关于F854疫苗能否引起草鱼免疫耐受性的问题,有待于进一步研究 4.从试验统计的结果,我们发现草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的免疫保护力,大致上与血清中和抗体水平相平行,也就是免疫保护力较高时,血清中和抗体水平也较高。然而有个别时候,却也存在免疫保护力与血清中和抗体水平不一致的现象,这种情况在疖疮病疫苗和弧菌疫苗的研究中也有发现( Michel C,eta.1984)。 Smith(1982)提出,疖疮

水产学报 l3卷用疫苗的研究仍很火热，也取得了不步成就，初步展示了鱼用疫苗的应用前景我国关于鱼用疫苗的研究起步较晚，应用尚处于空白(不考虑组织浆疫苗 )。从我们的研究结果可以看出，无论是 FR一854疫苗，还是 FR一886-w 疫苗，都能获得较理想的免疫效果，这就进一步证明了用免疫预防的方法防治草鱼出血病是一条很有希望的途径。 2．Dorson4198,1)在概述鱼类应用免疫学时说，免疫原的质和量是判断一种疫苗好坏的重要根据之一 }一种疫苗成功与否，很大程度上决定该抗原能否诱导鱼体产生保护性抗体。因而筛选具有强抗原性的疫苗株是进行鱼类疫苗研究的一个重要方面，它不仅能提高疫苗的免疫效果，而且也能降低疫苗的成本，为疫苗实际应用和商品化生产奠定基础。我们从分离到的十几株野毒株中，初步筛选出 FR-854和 FR-836-w 疫苗株，通过对二毒株所制备的疫苗免疫接种后的抗体应咎厦抗攻击保护作用比较观察，初步证实了 FR-854比 FR-836-w 疫苗株的免疫原性更强。 FR-854与 FR--836-w 毒株于不同年份采集于湖北荆沙地区，关于其免疫原性差异的原因我们正在深入研究之中。 3。以病毒灭活前的滴度作为疫苗免疫剂量的参考标准，我们认为是一个可行又较合理的方法。DeK／nkelin等 (1984)在研究灭活的病毒性出血性败血症疫苗时，曾以此作为确定疫苗免疫剂量的方法，而高汉姣等(1988)在研究疫苗免疫剂量对免疫力的影响时，却把疫苗的稀释度作为疫苗免疫剂量的衡量标准。从我们对 FR一85,1疫苗两个同等稀释度 (10 )而不同病毒滴度 (灭活前 )所获得的不同免疫效果的试验 (表 3>，我们认为以病毒灭活前的滴度作为疫苗免疫剂量的衡量标准较为合适。疫苗的有效免疫剂量是疫苗的一个重要参数。关于 VHSV 灭活疫苗，DeKinkel／n 等 (1984)确定以每克鱼体重注射 2x10‘pfu(空斑形成单位)的给予量时，其成活率可达 90 左右，根据试验结果，我们初步认为 FR-854疫苗的半数免疫罡为 10 TOID 。／ml。以 FR-854疫苗和 FR-836-w 疫苗对 8寸左右的草鱼种注射免疫接种，其免疫剂量分别约为 10 TOID；o／ml(×0．一 0．5m1)和 10 ‘TOIDB。／ml(×0．3— 0．5m1)，即 3— 5× 10 TOID。／尾和 3— 5×10 TOID ／尾时，对草鱼出血病的免疫保护力可达 80 左右。分析不同免疫剂量的 FR-854疫苗的免疫效果，我们发现 lO TOID。／ml似乎比 10‘TOID 。／m]接种量对草鱼的免疫效果要好一些。同样，表 2中也有类似的现象，只保存 1】l天的 FR一85,1疫苗 (灭活前病毒滴度为 10 TOID 。／mh却比保存了 15o天 (灭活前滴度为 10 TOID。／m1)的该疫苗的免疫保护力和血清中和抗体效价要低。这是因为偶然的异常，还是因为疫苗免疫过程中导致部分免疫耐受性?假若如此，这就提示我们在使用疫苗时要做到免疫剂量适宜。A'v~l／an(1980)研究鲤鱼的免疫效果时发现，注射过量的牛血清白蛋白会导致免疫耐受。Manning eta1．(1980) 用人类 r球蛋白注射 1— 14日龄的硬头蹲也得到了同样的结果关于 FR-854疫苗能否引起草鱼免疫耐受性的问题，有待于进一步研究。 4．从试验统计的结果，我们发现草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的免疫保护力，大致上与血清中和抗体水平相平行，也就是免疫保护力较高时，血清中和抗体水平也较高。然而有个别时候，却也存在免疫保护力与血清中和抗体水平不一致的现象，这种情况在疖疮病疫苗和弧菌疫苗的研究中也有发现 (Michel0．et ．1984)。Smith41982)提出，疖疮维普资讯 http://www.cqvip.com

期杨先乐等;草鱼出血病细胞培养灭活疫苗的研究 143 病疫苗免疫虹鲜后能导致细胞免疫应答,T淋巴细胞在清除感染菌过程中起着很重要的作用,然而体液免疫也不容忽视,它在中和细菌抗原中也很重要。这提示我们,草鱼出血病细胞培养灭活疫苗对出血病的保护力,可能是刺激鱼体产生体液免疫和细胞免疫的综合作用的结果。弄清楚二者相互关系的规律,不仅有助于丰富鱼类免疫学理论,而且能为评价疫苗的优劣,提供准确可信的依据。参考文 1]中国科学院武汉病毒研究所、中国水产料学研究院长江水产研究所沙市分所草鱼出血病研究协作组,1983。茸鱼出血病病毒的电子显微键观察初报,淡水渔业,(8):89。 2]中国科学院武汉病毒研究所,中国水产科学研究院长江水产研究所沙市分所草茸鱼出血病研究协作组,1984 草鱼出血病病毒精细结构的研究。淡水渔业,(2):21~22。〔8]中国科学院武汉病毒研究所、中国水产科学研究院长江水产研究所沙市分所草鱼出血病研究协作组,1984b。草鱼出血病病原一鱼呼肠孤病毒核酸特性的研究。淡水渔业,(4):7~9。〔4]杨先乐等,19。草鱼出血病细胞培养灭活疫苗研究初步报告。淡水渔业,(8):1~5。 [5] Avtalin R. R. et at., 1990. Regula tory effeet of temperature on apecific supression and enhance- ment of the humoral responce in fish. In Immunological ry. Edited by Manning M, J. pp. 118--12I, Elsevier/ Amsterdam. [8] De Kinkelin P et al., 1984. Immunization against viral diseases occurring in cold warte. In Sump oahu on Fish vaccination, Ed ted by pierre de Kinkelin, pp. 167--108 [7] Duff D, C. B, 1942. The oral immunization of trout against Bacterium salmonicida, Journal of im- nology, 44: 87-94. [8] Dorson M. gy of fish. in Immunological Memory, Edited J. pp 89--47, Elsevier/Ams terdam [ 9] Manning M. J. et aL., 1982. Developmental aspects of immunity and tolerate in fish, In Boberts B J, xicorobiat Diseases of Fish, Academic press, pp. 3I-46 [10] Michel C et aL., 1884. Evalua tion of the protection activity and economic efficacy of vaccines for fish. In Sumposium on FisA vaccination, Edited by Pierre de Kinkell, pp 75-88. [Il] Smith P. D et al., 1980. Further studies on furuculosis vaccination. in Fish Disease3rd COPB4Q Session Edited by Ahne w.. Springerverlay, pp. 118-119 INACTIVE VACCINE FOR HEMORRHAGE OF GRASS CARP COMPARISON OF IMMUNOGENICITY AND IMMUNIZING DOSE BETWEEN TWO STRAINS Yang Xianle, Xia Chun and Zuo wengong (Changiiang Fisheries Research Institute) ABSTRACT Vaccine FR-854 and FR-836-w have high immunogenicity and their PRP (percentage relative protection) are both more than 70%6. However, it is preliminarily demonstrated that strain FR-854 has much higher immunogenicity than strain FR-836-w by means of measuring the PRP and ANT (antiserum neu tralization titre)of vaccinated grass carp with them. It has been obtained that PRP nd ANT are 88.9+12.0(6)% and 160.5+ 58.9(6)respectively for FR-854, while

2期拓先乐等：草鱼出血病细胞培葬灭活疫苗的研究 143 病疫苗免疫虹鳟后能导致细腱免疫应咎，T淋巴细胞在清腺感染菌过程中起着很重要的作用，然而体液免疫也不容忽视，它在中和细菌抗原中也很重要。这提示我们，草鱼出血病细胞培养灭活疫苗对出血病的保护力，可能是刺激鱼休产生体液免疫和细胞免疫的综合作用的结果。弄清楚二者相互关系的规律，不仅有助于丰富鱼类免疫学理论，而且能为评价疫苗的优劣，提供准确可信的依据。【1] [2] ￡8] ￡4] ￡5] ‘6] ￡7] ￡8] f9] ￡lO] [111 参考文献中国科学院武衩病毒研究所、中国水产科学研究院长江水产研期涉市分所草鱼出血病研究协作组，1983。草鱼出血病病毒的电子显微镜观察初报，谈水渔业，(8)：∞。中国科学院武衩病毒研究所、中国水产科学研究院长江水产研究所抄市分所草鱼出血病研究协作组，1984a．草鱼出血病病毒精细结构的研究。姨水渔业，(2)：21~22。中国科学院武汉府毒研究所、中国水产科学研究院长江水产研究所抄市舟所草鱼出血病研究协作组，1984b。草鱼出血病病原一鱼呼肠孤病毒按酸特性的研究。淡水渔业，(4)：7—9。杨先乐等，1988。草鱼出血痛细胞培养正活疫苗研究初步报告。淡水渔业，(8)：l～5 Aviolin R ．R i．．19~0,Reg~dstory o setoftem pe rature On specific supe resstom and enhancementofthellllinoralresponcein fish．InI 删 nol 咖啪。删 Edited by ~ nning 虬．，PP． 1L$——1舡．Elsevier／Amsterdam． DeKinkelinP ．，]984．Im muuizstion a iⅡst训 T Idf鼬蜊 occurring in ∞ ld 帕 rte．I S p． o0 ∞ FishVav~ ation，Edi ted by pierredeKinkelin ，PP．167— 198． DuffD 0．B．．1942 The oralim m unization of~routag丑In日t砌 m ¨ m 岛d知们 c池． O4rn戚 ofImm ，44：87— 94． Dem on M ，1984．App~ed im m unology offish．h Immanological ，Edited by M m g M ．， pp．39—47．E~sevier／Amster&~m． M annin g M J．d a1．1982 De veIopm enta~aspectsofim munity and tolezaee In tIsh． h 丑o 丑．，M icorobiatj)妇胁s甜 Fish，Aeadem press，PP．81— 46． M ichelC．d ．1984．Eva3u~tion oftheprotec$ion activit aⅡd~ onom efffc~'T of T们 Ⅱo目 for f曲 h mpo骟 m 帅 Fish 口cd犯 l‘0，l，Edj{edby PferredeK ln~elln，PP． — ∞ ． SmithP．D a1．，]980 Furtherstudiesonfuruculc~isvacoinstion．In Fish卫啪翮’3rdCOPB埘 S 卿 m Edited by AhneW ．，Springerveri~y，PP．1l3一 I1g INACTIVE VACCINE F0R HEM 0RRH AGE 0F GRA SS CARP： C0M PARISON OF IM M UN0GENICITY AND IM M UNIZING D 0SE BETW EEN TW 0 STRAINS Y ang X ianle，X iaChun and Zuo W engong (Cha~ ‘洲 ,FisheriesResearchI 对“me) ABSTRACT VaccineFR一854andFR一836-w have high imm ungen~city and their PRP (percer~tagerelativeprotection) are both more than 70 ． However， it is prelim inarily dem onstrated thatstrain FR-854 has m uch higher im m unogenicity than strain FR-836-w by m eansofm easuring thePRP and ANT (antiserum neu· tralization titre)ofvaccinated grasscarpwith them．Ithasbeen obtained tha tPRP andANT are88．9±12．0(6)％ and 160．5±58．9(6)respec~velyforFE一854'，while 维普资讯 http://www.cqvip.com