维普资讯pw.i.cm 第13卷第1期 水产学报 Vol.13, No.1 1989年3月 JOURNAL OF FISHERIES OF CHINA March,1989 草鱼出血病的病原研究 毛树坚邵健忠杭绮 张念慈 (杭州大学生物研究所) 浙江省淡水水产研究所) 提要草鱼出血病的病原研究,始于50年代178—84年,分离到一种病原病毒,定 名为草鱼呼肠孤病毒或鱼呼肠孤病毒。本文报道从出血病病鱼组织的电镜研究中发现两种病 毒颗粒,一种即是呼肠孤病毒,另一种是20-3m大小的病毒经病毒的核酸分析,前者是双 股RNA病毒;后者为单股RNA病毒。用分离到的这两种病毒分别注入1足龄康草鱼,可 发生两类不同症状的出血病:呼肠孤病毒主要导致“肠出血型症状;另一种病毒(经初步鉴别 属于小RNA病毒科病毒)主要导致“肌肉出血型”出血病。由此,可以证实两种病毒都是草鱼 出血病的病原病毒,同时也初步解释出现两种不同症状出血病的原因 关键词草鱼,出血病,呼肠孤病毒,小RNA病毒,鱼类病毒学 草鱼(Ctenopharyngodon idellus.et、v是一种草食性鱼类饲养成本低,养殖地域 广,是我国淡水养殖鱼的主要品种,其产量约占淡水养殖总产量的20%。但草鱼病害多, 以草鱼出血病(Hemorrbage of Grass Carp)最甚从鱼苗到商品鱼的成活率仅10 15%,当年和1足龄草鱼极易发病死亡。因此草鱼出血病是我国水产研究中的一个重要 课题。早在50年代,倪达书等已注意到草鱼容易发生出血症状的鱼病,以后,陈燕桑等 (1972)用分离病毒的方法从病鱼组织得到的滤液感染草鱼,获得典型的出血病症状。中 国科学院水生生物研究所(1978,1980)分离出一种病毒,暂名为草鱼疱疹病毒(Herpesvi rus of Grass Carp)但陈燕桑等(19831984)根据病毒的形态和理化特性,更改为 草鱼呼肠孤病毒(Reovirus of Grass Carp)以后又有报道,认为应称作鱼呼肠孤病毒 (Fish Reovirus)。郑德崇等(1986)用光镜研究了草鱼出血病的病理组织,观察到病 鱼的小血管内皮广泛受损,引起出血。本文从电镜观察病变细胞入手,分离纯化得到两 种病原病毒。 材料和方法 一、实验鱼 1.实验用鱼是当年或1足龄草鱼,体长46厘米或10—13厘米,由浙江省淡水水产研究所杭州 市水产研究所提供。实验前从鱼塘描出哲养于水泥池7天以上,选取健康鱼为材料 2.取有典型出血病症状的预死病鱼的脏器匀浆,加10倍量生理盐液混匀,过滤,滤液即为组织病 本研究得到杭市水产研究所的大力支持,杨广智、启任、陈汉民、尹文刘惠芬等同志参加部分工作 沈一雨老师曾子技术上的帮特此一并致谢, 收稿年月:1988年3月
第 15卷 第 1期 l989年 5月 水 产 学 报 JOURNAL OF FISHERIES 0F CHINA Vol_13.No.1 M arch.1989 草 鱼出血病 的病原研 究 毛树坚 邵健忠 杭 琦 张念慈 (杭州大学生物研究所) (浙江省淡水水产研究所) 提 要 草鱼出血病的病原研究.始于 50年代 1978-84年,分离到一种病原病毒,定 名为草 鱼呼 肠孤 病辜或 鱼呼垣 孤病 辜 本文 报道从 出血 病 病鱼 组 织的 电镜 研究 中发现 两 种 病 毒 颗粒 .一种 即是呼 肠孤 病毒 .另一种是 20-30rim 大小的 病 辜 经 病毒 的核酸 分析,前 者是双 股 RNA 病毒 ;后者 为单股 RNA 病毒 用分离 到的这 两 种病毒 分别注 入 1足 龄健 康草 鱼.可 发 生两 类不 同症状的 出血 病:呼肠 孤病毒 主要导 致 肠 出血 型”症状 }另一 种病毒 (经初 步鉴别 属于小 RNA 病毒 科 病辜 )主要导 致“肌 肉出血型”出血病 。 由此,可 以证 实两 种病辜都 是草 鱼 出 血病 的病原 病毒 .同时 也初 步解释 出现 两种不 同症 状出血 病 的原 因。 关键 词 草鱼 ,出血 病.呼 肠孤 病毒.小 RNA 病辜,鱼类病毒 学 草鱼 (0En叩 dm gdeglusC.et、V.)是一 种草食性鱼类 ,饲 养成本低 ,养殖地域 广 ,是我国淡水 养殖 鱼的主要 品种 ,其产量约 占淡水养殖 总产量的 2O 。但草鱼病害多, 以草鱼 出血 病 (HemorrhageofGrassCarp)最甚 从鱼苗到商 品鱼的成活 率 仅 lO— l5 ,当年和 1足龄草鱼极易发病死亡。因此 ,草鱼 出血病 是我 国水产研究 中的一个重要 课题 早 在 50年代 ,倪 达书等 已注意到草鱼容易发生 出血症状的鱼病 ,以后 ,陈燕桑等 (1972)用分离 病毒 的方法从 病鱼 组织得到 的滤 液感染草鱼 ,获得典型的 出血病症状 中 国科学 院水生生物研 究所 (1978,1980)分 离出一 种病 毒 ,暂名为草鱼疱疹病 毒 (Herpesv/- rusofGrassCarp)“ 。 但陈燕桑 等(1983,1984)根据病毒 的形态和理化特 性 ,更改 为 草鱼 呼肠孤 病毒 (ReovlrusofGrassCarp) 。 以后又有报道 ,认为应称 作鱼 呼肠孤病毒 (FishReovirus)[。 郑 德崇 等(1986)用光镜研究 了草鱼 出血病的病理组织 ,观察到病 鱼的小血管内皮广 泛受损 ,引起出血[。 本文 从 电镜观察病变细胞^手 ,分离纯化得到两 种 病 原病 毒 。 材 料 和 方 法 一 、 实验 鱼 1.实验 用鱼 是 当年 或 1足 龄草 鱼,体长 4-6厘 米或 1O一1s厘米,由浙江 省淡水 水 产研 究所 .杭州 市水 产研 究所提 供。 实验前 从鱼塘 捕 出哲养 于水泥 池 7天 以上.选取 健康 鱼为村 科 2.取 有典型 出血病 症状 的濒死 扁鱼 的脏器 ,匀浆 .加 1O倍 置生理 盐}良馄 匀,过滤 ,滤液 即为 组织病 本研究得到杭州市水产研究所的大力支持 ,杨广智、邱启任、脒投民、尹文棘.刘惠芬等同志参加部分工作 枕一 雨老师 曾蛤予技 术上 的帮 E, 持此 一并 致谢 收稿 年 月 :1988年 3月 。 1 维普资讯 http://www.cqvip.com
2 水产学报 13卷 毒液 3.用组织病毒液以每尾05毫升的量,注入健康鱼,2530C水温饲养,5天后陆续复制出草鱼出 病病鱼 二、病毒的分离纯化 取人工复制病鱼的脏器,匀浆后离心取上清液,经氯仿反复处理,除尽脂肪和杂蛋白。用PEG或 硫酸铵分离病毒,所得病毒液再经鱼精蛋白沉淀。沉淀后的上清液中得到一种小病毒颗粒;沉淀的鱼精 蛋白经1 M NaCl液洗脱,得到一种大病毒颗粒 三、电镜现察 1.取病鱼肝、肾、牌、肠、肌肉、血管等组织,戊二醛固定,常规制作超薄切片,且-300,且-600电子显 微镜观察 2.取已分离纯化的病毒悬液制成电镜标本,3%磷钨酸负染后观察。 四、病毒的核酸分析 1.纯化的病毒悬液于卫EN×1缓冲液中透析,加10%SD液,再加含饱和酚的氯仿除去蛋白质 加适量3MNaA与无水乙醇,-20°C过夜,最后离心取沉淀,用TEN×1缓冲液溶解备测 2.用苔黑酚一FeCL2溶液与二苯胺试剂分别同待测核酸反应,鉴别RNA与DNA用标准酵母 NA(1004gm1)、小牛胸腺DNA(100μg/ml)作对照 3.小病毒颗粒的核酸进行聚丙烯酰胺凝胶电冰,凝胶浓度6%,巴比妥一Tris级冲系统,甲烯兰 染色。凝胶柱用牛胰RNA酶处理作对照 4.凝胶柱经固定与漂洗后,001%吖啶橙染色,鉴别核酸的双股或单股。以ADNA的FcoR内切 酶消化片段作对照。 五、病原性试验 两种分离的病毒分别用磷酸缓冲生理盐液配制成10-1浓度的悬液,以每尾03毫升的量注入健康 草鱼。用灭活病毒液及生理盐液作对照。2-30C水温饲养,观察病毒侵染后致病情况。 果 1.电镜观察病鱼6种器官组织的细胞,发现有两种不同的病毒颗粒。一种大颗粒 80-100nm,双层衣壳,主要存在于肾管上皮细胞、肾间质细胞、肠上皮细胞及血管、微血 管的内皮细胞;另一种小颗粒,仅20-30nm,除也存在于上述细胞外,还发现于脾网状细 胞、嗜酸性白细胞中。受侵染细胞发生细胞病变:线粒体变态,内质网及核周隙肿胀不规 则,细胞内结构素乱,直至细胞解体。在肾、脾、肌肉等组织间隙或微血管腔内,可以见到 红细胞及解体的细胞,病毒颗粒弥散细胞外。 2.电镜观察分离后的两种病毒颗粒。大病毒颗粒呈六角形,直径80nm,核心部分 nm,双层衣壳清晰,可辨出20面体中三角形边的衣粒数为4,因此病毒的总衣粒数为 92;无囊膜;这种形态结构是呼肠孤病毒( Reovirus)另一种小病毒颗粒约24nm, 可辨出六角形,农粒也可辨,但数目不清;无囊膜(图1) 3.两种病毒的核酸与苔黑酚的反应都呈强阳性;与二苯胺是呈阴性反应!说明两者 都是BNA。小病毒颗粒的核酸用吖啶橙染色呈火红色,证明是单股RNA病毒。聚丙 烯酰胺凝胶电泳显示出两条区带,一条是强带,位于指示剂之后,Rn=0.159,一条是弱 带,在指示剂之前,Ba=1.127(图2)。用牛胰RNA酶处理后,两条区带消失
2 水 产 学 报 13卷 毒 液。 5.用组 织病 毒液以 每尾 0.5毫升 的量,注 ^健 康鱼.25--5矿C水 温饲养 .5天后 陆续 复翩 出草 鱼出 血病 病鱼。 二, 病毒舶 分离 纯化 取人 工复制 病鱼 的脏器 . 匀浆后 离心 取上清 澈.经氯 仿反 复处理 ,除尽 脂肪 和杂 蛋 白。 用 PFG或 硫酸 铵 分离 病毒,所得 病毒澈 再经 鱼精 蛋 白沉 淀。 沉淀 后的 上清澈 中得 到一 种小 离毒颗粒 |沉 淀 的鱼精 蛋 白经 1M NaCI液 洗脱 .得 到一 种大 病毒颗 粒。 三, 电镜观察 1.取 病鱼肝 、肾、牌 、肠、肌 肉、血管 等臼织 戊 二醛 固定 .常 规制作 超 薄切片,11-300,H_60o电子显 微 饶观 察。 2.职 已分离纯 化的病 毒悬液 制成 电镜标本 .5彤磷 钨酸 负染后观 察。 四,病毒舶核酸分折 1.纯化的病毒悬{燕于 TEN×1缓冲液中透析.加10彤SDS液 再加含饱和酚的氯仿除去蛋白质。 如适量 3M NaAo与无水乙醇,一2fC过夜,最后离心取沉淀 用 TEN×1缓冲液溶解各铡。 2.用苔黑酚一n a 溶液与二苯胺试剂分别嗣特测桉酸反应,鉴别 RNA 与 DNAo用 标 准 酵 母 I~qA(1o g/m1)、小牛胸腺 DNA(1OO~g/m1)作对照。 5.小病 毒颗粒 的桉 酸进 行聚丙 烯酰胺 凝胶 电诛,凝胶浓 度 6彤, 巴 比妥一 Trls缓 冲系 统 甲烯 兰 染 色。 凝胶柱 用牛胰 RNA 酶处理 作对照。 4.糖腔柱经固定与漂洗后 0.D1彤吖啶橙染色.鉴别核酸的双股或单股 以 ~.DNA的 EcoRI内切 酶消 化片 段作对 照。 。 五、病原性试验 ‘ 两种分离的病毒分别用磷酸缓冲生理盐液配制成 10I1浓度的悬液.以每尾 0.5毫升的量注^硅康 草鱼。用灭活病毒液及生理盐液作对照。25-~0C水温饲养.观察病毒侵染后致病情况。 结 果 1.电镜观察病鱼 6种器官组织的细胞 ,发现 有两 种不 同的病毒颗粒 。一种大颗粒 , 80- 10Ohm,双层衣壳 ,主要存 在于肾管 上皮 细胞、肾间质细胞 、肠上皮细胞及 血管 、微 血 管 的内皮 细胞 |另一 种小 颗粒 ,仅 20~ 30nm,躁也存在于上述细胞外 ,还发现于 脾同状细 胞 、嗜酸性自细胞中。受 侵染 细胞发生 细胞病变 t线粒体 变态 ,内质同及核 周隙肿胀不规 则 ,细胞 内结构紊乱 ,直至细胞解 体。在 肾、脾、肌 肉等组 织间隙或微 血管腔 内,可 以见到 红 细胞及解体的细 胞 ,病毒颗粒弥散细胞外。 2.电镜观察分离后的两种病毒 颗粒 。大病毒 颗粒 呈六角形 ,直径 80rim,核 心部分 50rim,双 层衣壳清 晰,可 辨出 20面体 中三角形边 的衣粒数 为 4,因此病毒的总衣 粒数为 92|无囊膜 |这种形态 结构是呼肠孤病毒 (Reovirus) 】。另一种小病毒颗粒 约 24rim, 可 辨出六角形 ,衣粒也可 辨 ,但数 目不清 ;无囊膜 (图 1)。 3.两 种病毒的核酸与苔黑酚的反应都 呈强 阳性 |与二苯 胺是呈阴性反 应 I说 明两者 都 是 RNA。小病毒颗粒 的核酸用吖 啶橙染色 呈火 红色 ,证 明是单殷 RNA 病 毒。聚 丙 烯 酰胺凝脏 电泳显示 出两条 区带 ,一条是强带 ,位于 指示剂 之后 ,I =0.159,一 条是弱 带 ,在 指示剂 之前 ,I =1.127(图 2)。用 牛胰 RNA 酶 处理 后 ,两条 区带 消失 . 维普资讯 http://www.cqvip.com
1期 毛树坚、邳健忠、杭绮、张念慈:草鱼出血病的病原研究 图1小RNA病毒。(A)存在于血管 内皮细胞内,内皮细跑中可见粘连 带、题饮泡、微管、微丝束等。50Kx, 图2小MNA病毒核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳光密度 扫描图(630nm处扫描,样品不含指示剂) H-300电子显微镜。(B)分离后的 病毒。10Kx,H-600电子显微镜 Fig. 2 The OD(630nm)scanning graphic record of the virion RNA of Picornaviridae virus Fig. 1 Electron micrographs showing on 6% polyacrylamide gel electrophoresi Picornaviridae virus.(A)Viral par ticles in the endothelial cell of blood vessel, x 60K, H-30oEM. (B)The 呼肟孤病毒 purified virions. x 10K, H-6CoEM 4.健康草鱼分别注入呼肠孤病毒与小 病毒颗粒的悬液后,25-30°C饲养,发生典型 的草鱼出血病症状,并导致病鱼死亡。呼肠 孤病毒组的死亡率平均为66.13%小病毒 颗粒组平均为64%1面灭活病毒或生理盐液 的对照组均不发病,无死亡。 图3两种病原病毒引起不同类型出血症状 在发病草鱼中,不同病毒所引起的出血 的比率图(A)肠出血型;(B) 病症状是不同的:呼肠孤病毒侵染致病的病 肌肉出血型;(C)混合型 鱼主要呈肠道出血,极少数肌肉出血;而小 different kinds of hemorrhagic Symp 病毒侵染致病,主要是肌内出血。也有一部 sed by Reovirus and Pi 份病鱼是出现肠道与肌肉都出血的混合型 bornaviridae virus. (A)Hemorrhage of intestinal traet. (B)Hemorrhage of (图3) musculature. (C)Synthetic Symptom. 讨 论 电镜观察到呼肠孤病毒与一种小病毒颗粒主要因侵染草鱼血管与微血管的内皮细胞 而导致出血症状,这与光镜的研究相一致。以往生产上早已发现出血病的症状有“肠出血 (肠炎)型”、“红肌肉型”、“混合型”等,一直不明原因。本文初步说明不同类型的出血症状 是由两种不同的病毒病原所造成。 草鱼出血病最早被当作细菌性鱼病,1978-1984年才分离出一种呼肠孤病毒。本研 究根据病变细胞中发现两种病毒颗粒面进一步分离出另一种小病毒颗粒。根据小病毒颗 粒的核酸分析,确证为单股RNA对照病毒的形态大小,初步鉴别为小RNA病毒科 ( Picornaviridae)病毒印
1期 毛 树坚 .邵健 忠、杭 绮 、张念 慈:草 鱼 出血 病的病原 研 究 3 图 1 小 RNA 病毒 。 (A)存在 于血 管 内皮 纲胞 内. 内皮细 胞 中可 见粘 连 带、胞饮 泡、微管 微 壁束 等。50Kx, H一8oo电子显 微镜 。 (B)分离 后的 病毒。 10l(x,H oo电子显微 镜 Fig.1 E ]ee七r0Ⅱ m ierographs showing Picornavirtda~V~'US.(A)Vtratpartitlesin the endothe.1iaJ.∞ Ⅱ ofblood 删 .:6。K.H一8O0EM. (B)Tho purif ied viri0ng.x 10K .H -6oc皿 M . 圈 2 小 RNA 病毒 核酸 聚丙烯 酰胺 凝胶 电诛 光密 度 扫描 圈(680nm 处扫 描,样 品不 含 指示 剂) Fig.2 The0D(630nm)Scanninggraphiorecord ofthovirlon RNA of Pieorna~dridaevirus On6男 poly们口Iam遍。gelele。缸0phore矗s. 4.健康草鱼分 别注入呼肠孤病 毒 与 小 病毒颗粒 的悬 液后 ,25— 30。G饲 养 ,发生典型 的草鱼 出血病症状 ,并导 致病鱼死亡。呼肠 孤 病毒 组的死 亡率平均 为 66.13笳 ,小 病 毒 颗粒组平均为 64笳 I而灭活 病毒 或生 理盐 液 的对 照组均不发病 ,无 死亡。 在发病草鱼中 ,不 同病毒所引起 的出血 病症状是不 同的 :呼肠孤病毒侵染致病 的病 鱼主要呈肠道 出血,极少数 肌 内出血 ’而小 病毒侵染致病 ,主要是肌 内出血。也有一部 份 病鱼是出现肠 遭与肌 肉都 出 血 的 混 合 型 (图 3) 圈 5 两 种病原 病毒 gI起 不 同类 型 出血症 状 的 比率 图 (A) 肠出血 型; (B) 肌内出血型; (G)混台型 F .3 Thepercentageil1us 0naboutthe differentkindsof he morrhagic syru p. tom which ea 丑 m s and Pieornavitidae7irⅡs.(A)H~morrhageof .m协s}i叫 traat. fB1Hemorrha geof mu鼬uIhLre.(C)Syathe~o SymptOm. 讨 论 电铙观察到呼肠孤病毒与一种小病毒颗粒主要 因侵染草鱼血管 与微血管 的内皮细胞 而导致 出血症状 ,这与光镜 的研 究相一致。 以往生 产上早 已发现 出血 病的症状有 肠 出血 (肠炎)型 、红肌 肉型 、混合型 等,一直不明原因。本文初步说 明不 同类 型的出血 症状 是由两 种不 同的病毒 病原所造成。 草鱼出血病最早被当作细 菌性鱼病 ,1978— 1984年才分离 出一种呼肠孤病毒。本研 究根据病变细胞中发现两种病毒颗粒而进一步分离 出另一种小病毒颗粒。根据小病毒颗 粒 的核 酸分 析 ,确证为单股 RNAj对照病毒的形态大小 ,初 步鉴 别为小 RNA 病 毒 科 (Picornaviridae)病 毒m 。 维普资讯 http://www.cqvip.com
水产学报 13卷 小RNA病毒科有200多种和更多的型和亚型。作为致病病毒,有肠道病毒、鼻病 毒、口麟疫病毒及脑心肌炎病毒、甲型肝炎病毒,主要危害人和牛、马、猪、狗猫、鸡、鸭等 禽畜;近年又有分离到鸟肾炎病毒(ANv), Berkely蜂小RNA病毒(BBPV)以及草蛾 ( Lymantria minaya幼虫中一种小RNA病毒的报道0作为鱼类的致病病毒,在国 内外尚未见报道。 对小RNA病毒的核酸研究,比较多的是脊髓灰质炎病毒、肠道病毒和鼻病毒,其 RNA都是单股单分子1在本研究中显示出ENA的两片段,其中一个片段分子量较 由于草鱼出血病的病原病毒已经基本查明,因而可以采用免疫方法防治该病,也可以 进而进行抗病因子及抗病育种的生物技术研究。 参考文獻 1]中国科学院水生生物研究听第三室病毒组,1978,草鱼出血病病原的研究。水生生物学集刊,(6):821 30 〔2】中国科学院水生生研究所第三室病毒组等,1980。草鱼出血痢病原研究,江电镜观尞。水生生物学 集刊,(7):75-79 [8]中国科学院武汉椭毒研究所等,1984草鱼出血病病毒精细结构的研究。淡水渔业,(2):21-22 84,草鱼出血钩病原一鱼呼断孤病毒核酸特性的研究。淡水渔业,(4):7-9 [5]陈燕燊、江育林,198。草鱼出血病病毒形态结构及其理化特性的研究。料学通报,28:1138-1140。 [6]郑德崇等,1986。草鱼出血的组织病理研究。水产学报,10:11-159 [ 7J Ginsberg, H. S, 1080, Picornavirus, 1097-1008 In vIrology, eds. R. Dulbecco e a. Harper and Row Publishers, Inc. Hagerstown, [8] Imada, T, 1986. Pathogenicity of newly isolated Picornavirus(avlan nephritis virus )for chlcken, JPN Agr0.Bes.Q-,1:137-144. [9] Lommel, S.A et aL., 1988. Characterization of nueleic acid associated with Arkansas bee virus Interusrotogg, 23: 199-207. 1o]Pullin,J.S. K et al., 1986. Characterization of a small RNA-containing virus in fteld-collected Larvae of the tussock moth, Lymantria mnay, from Papua New Guinea, App. Environ MicroMol. 48:b06-60 [11] Rekosh, D. M. K, 197. Picornavirus, 67-69. In The molecular biology of animaI viruses, Yol. I, ed.D. P. Nayak, Marcel Dekker Inc. New York. ON PATHOGEN OF HEMORRHAGE OF GRASS CARP (CTENOPHARYNGODON IDELLUS C ET V) Mao Shujian, Shao Jianzhong and Hang Qi Biological Research Institute, Hangzhou University Zhang Nia (Freshwater Fisheries Institute of Zhejiang Province) aBSTRACt The pathogen of hemorrhage of grass carp was studied as early as 下接第79页( continued on page79)
l 水 产 学 报 l5巷 小 RNA 病毒科有 200多种和更多的型和亚型。作为致 病病毒 ,有肠道 病毒 、鼻病 毒 、口蹄疫 病毒及脑心肌炎病毒 、甲型肝炎病毒 ,主要 危害人和牛 、马 、猪 、狗、猫 、鸡、鸭等 禽 畜 }近年又有 分离到鸟肾炎病毒 (ANV),Berkely蜂小 RNA 病毒 (BBPV)以及 草蛾 ( m。耐 )幼虫 中一种小 RNA 病毒的报道 。作为 鱼类 的致 病病毒 ,在国 内外 尚未见报道。 对小 RNA 病毒的核 酸研 究 ,比较 多的是脊 髓灰质炎 病毒、肠道 病毒和 鼻病毒 ,其 RNA 都是单股单分子 在本研究 中显示出 RNA 的两 片段 ,其 中一个片 段分子量 较 小 。 由于草鱼出血 病的病原病毒 已经基本查明 ,因而 可以采 用免 疫方 法防治该 病,也可 以 进 而进 行抗 病因子及 抗病育种的生物技术研究。 参 考 文 献 【1】 中国科学院水生生畅研究所第三室病毒蛆, 1978。 草鱼出血病病原的研究。水生生物学集刊, (8):321— 830。 【2】 中国j珥学院农生生物研究所第三室病毒蠡等, 1080。 草鱼出血病病原研究 , Ⅱ电镜观察。 水生 生 物 学 集 刊 , (7):75-79 中国科学院武沮病毒研究所等, 1984-。 草鱼出血病病毒精细结构的研究。 淡水渔业, (2):21-22。 — — , 1984-。 苴量出血病病原一鱼呼晒孤病毒桉酸特性的研究。 襁水渔业 , (4):7_9。 陈燕蔡、江育林 , 1983。 草鱼出血病扁毒形态结构厦其理化特性的研究。 科学通报 , 28:1L~-1140。 部德崇等, 1g88。 草鱼出血痛的组织病理研究。 水产学报 , 10:151- 159。 Ginsberg,H .S ,1980 ‘c0r ‘r ,20@7-1098 In Virology,ed目.R.])ulbeccoel o/.,H arper and BOw Publishers.Inc H agerstown. Im~dg,T.,1瓣5Pathogenioi~yofnewlyisolatedPicornavix~$(syrianephritisvinm)farchioken, JF2~ n 苗. .,19:187-I . Lomm e1.S.A 打 ..1985.Characterization ofnucleic 且cid tmsocf~ ed wi地 Arkansas bee 哪 删 Im er ‘r。lq ,23:1~g-207. Pullin 丁.S.K . .1985 Ch acterj龃 tjon ota印n&n RNA—con~slnlng 叽 删 In l ollected 工 胛 ae畦 the t嘲 。咄 m oth, d r缸 时舭 ,from PapuaNew Guinea, p . 口rm M 如ro 如 l, 48:50 嘶 . Rek~h.Ⅱ M .Ⅱ ,1077. ∞ rm i -67-69 InThem oleou~ rbiology Of anim alViruses, Vo1. I, ed D P Nayak,M~,rcelO okker Ine ,N ew Y ork. ON PATHOGEN OF H EM ORRHA GE OF GRA SS CA RP (CTENOPHARYNGODON IDELLUSC.ETV.) MaoShu~ian,ShaoJi~,nzhongandHangQi ( i ∞ ∞∞ 曲 In~itule,Hangzhon t t) Zhang N ianci (_Wresb,walerFisherte~ Zb,efia~#Provln~ ) ABSTRACT Thep~thogen ofhem orrhageofgrassc8rp was studied as early B3 下接第79页 (continuedoi1page79) …………… … … ㈣ ㈣ 维普资讯 http://www.cqvip.com