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以从组织中提取各种代谢物质或酶进行研究。 但是生物组织离体过久,其所含物质的含量和生物活性都将发生变化。因此,利用离 体组织作为提取材料或代谢研究材料时,应在冰冷条件下迅速取出所需组织,并尽快进行提 取或测定。 一般采用断头法(或注射空气于动物心脏)处死动物,放出血液,立即取出实验所需之 脏器或组织,去除外层的脂肪及结缔组织后,用冰冷的生理盐水洗去血液,必要时也可用冰 冷的生理盐水灌注脏器以洗去血液,再用滤纸吸干。迅速称重后,根据实验的不同要求,用 以下不同的方法制成不同的组织样品。 (一)组织糜将组织用剪刀迅速剪碎,或用绞肉机纹成糜状即可。 (二)组织匀浆向剪碎的新鲜组织中加入适量冰冷的匀浆制备液,用高速电动匀浆器 或玻璃匀浆器制成匀浆。常用的玻璃匀浆器有5ml和10ml两种,由一个磨砂玻璃套管和 个带有磨砂玻璃杵头的杵组成。玻璃杵的外壁必须紧靠玻璃套管的内壁。用时将套管放入冰 浴中,玻璃杵与调速马达连接,将剪碎的组织悬浮于匀浆制备液中并倾入套管中,然后再把 玻璃杵插入套管中。开动马达并调节杵的转速,小心地用手扶住套管口部,不断上下移动, 直至组织碎块磨成匀浆为止。 常用的匀浆制备液有生理盐水、缓冲液或0.25molL燕糖溶液等,可根据实验的不同要 求,加以选择。 (三)组织浸出液将上法制成的组织匀浆进行离心,其上清液即为组织浸出液, §4离心分离技术原理 离心机是利用离心力把溶液中的粒子进行分离的一种仪器。所谓离心力是指物体作圆周 运动时形成的一种迫使物体脱离圆周运动中心的力。 离心力的单位为g即重力加速度(980.6cm/s),离心力的大小可根据离心时的旋转速度 V(r/min,每分钟转数,revolution per minute)和物体离旋转轴中心的距离r(cm)按下式 计算 g=r×V2×1.118×105 或按下式计算所需的转速 V=V(g×89445)斤 在离心场中物体所受离心力的大小,与物体离旋转轴中心的距离有关,离轴心越远,以从组织中提取各种代谢物质或酶进行研究。 但是生物组织离体过久,其所含物质的含量和生物活性都将发生变化。因此,利用离 体组织作为提取材料或代谢研究材料时,应在冰冷条件下迅速取出所需组织,并尽快进行提 取或测定。 一般采用断头法(或注射空气于动物心脏)处死动物,放出血液,立即取出实验所需之 脏器或组织,去除外层的脂肪及结缔组织后,用冰冷的生理盐水洗去血液,必要时也可用冰 冷的生理盐水灌注脏器以洗去血液,再用滤纸吸干。迅速称重后,根据实验的不同要求,用 以下不同的方法制成不同的组织样品。 (一)组织糜 将组织用剪刀迅速剪碎,或用绞肉机绞成糜状即可。 (二)组织匀浆 向剪碎的新鲜组织中加入适量冰冷的匀浆制备液,用高速电动匀浆器 或玻璃匀浆器制成匀浆。常用的玻璃匀浆器有 5ml 和 10ml 两种,由一个磨砂玻璃套管和一 个带有磨砂玻璃杵头的杵组成。玻璃杵的外壁必须紧靠玻璃套管的内壁。用时将套管放入冰 浴中,玻璃杵与调速马达连接,将剪碎的组织悬浮于匀浆制备液中并倾入套管中,然后再把 玻璃杵插入套管中。开动马达并调节杵的转速,小心地用手扶住套管口部,不断上下移动, 直至组织碎块磨成匀浆为止。 常用的匀浆制备液有生理盐水、缓冲液或 0.25mol/L 蔗糖溶液等,可根据实验的不同要 求,加以选择。 (三)组织浸出液 将上法制成的组织匀浆进行离心,其上清液即为组织浸出液。 §4 离心分离技术原理 离心机是利用离心力把溶液中的粒子进行分离的一种仪器。所谓离心力是指物体作圆周 运动时形成的一种迫使物体脱离圆周运动中心的力。 离心力的单位为 g 即重力加速度(980.6cm/s2),离心力的大小可根据离心时的旋转速度 V(r/min,每分钟转数,revolution per minute)和物体离旋转轴中心的距离 r(cm )按下式 计算: g = r× V2× 1.118 ×10-5 或按下式计算所需的转速 在离心场中物体所受离心力的大小,与物体离旋转轴中心的距离有关,离轴心越远, V=√(g×89445)/r
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