更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。【gG对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力，其联结 多发生在段上，抗体结合点暴露于外，因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。蛋白质抗原大多 也可采用与抗体相似的方法包被。当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时，抗原与固相载体的直 接吸附可使抗原决定簇不能充分暴露，在这种情况下，直接包被效果不佳，可以采用间接的捕获包 被法，即先将针对该抗原的特异抗体作预包被，其后通过抗原抗体反应使抗原固相化。此间接结合 在固相上的抗原远离载体表面，其抗原决定簇也得以充分暴露。间接包被的抗原经固相抗体的亲和 层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大提高，因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法（见 22.4),试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳。间接包被的另一优点是抗原用量少， 仅为直接包被的1/10乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯载体上的非蛋白质抗原可采用特殊的包被方 式。例如，在检测抗DNA抗体时，需用DNA作为包被抗原，而普遍的固相载体一般不能直接与核酸 结合。可将聚苯乙烯板先经紫外线照射（例如30W紫外灯，75cm照射12小时），以增加其吸附性能。 固相载体先用碱性蛋白质，如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被，也可提高核酸的结合力。也可用亲 和素生物素系统作间接包被，即用亲和素先包被载体，然后加入生物素化的DA,这种包被方法均 匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定 脂类物质无法与固相载体结合，可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入LISA板孔中，开盖 置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。抗心磷脂抗体的LISA试剂 一般采用这种包被方式。 3.1.3包被用抗原 用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗 原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如邢sAg可以从携带者的血清 中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从高含此抗原的材料中提 取等（例如AP从脐带血或胎肝中提取）。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以 大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但 纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆茵成份，用于LISA,在 反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的 另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒(HV)尚 不能培养成功，而且丙肝病人血清中HCV抗原含量极微。目前检测抗HCV ELISA中所用包被抗原大 多为根据HCV的基因克降表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中，不少重组抗原如BsAg、HBeAg 和HIV抗原等均在LISA中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨 基酸序列人工合成的多肚片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。IgG 对聚苯乙烯等固相具有较强的吸附力，其联结 多发生在 Fc 段上，抗体结合点暴露于外，因此抗体的包被一般均采用直接吸附法。蛋白质抗原大多 也可采用与抗体相似的方法包被。当抗原决定簇存在于或邻近于疏水区域时，抗原与固相载体的直 接吸附可使抗原决定簇不能充分暴露，在这种情况下，直接包被效果不佳，可以采用间接的捕获包 被法，即先将针对该抗原的特异抗体作预包被，其后通过抗原抗体反应使抗原固相化。此间接结合 在固相上的抗原远离载体表面，其抗原决定簇也得以充分暴露。间接包被的抗原经固相抗体的亲和 层析作用，包被在固相上的抗原纯度大大提高，因此含杂质较多的抗原也可采用捕获包被法（见 2.2.4），试验的特异性、敏感性均由此得以改善，重复性亦佳。间接包被的另一优点是抗原用量少， 仅为直接包被的 1/10 乃至于/100。不易吸附在聚苯乙烯载体上的非蛋白质抗原可采用特殊的包被方 式。例如，在检测抗 DNA 抗体时，需用 DNA 作为包被抗原，而普遍的固相载体一般不能直接与核酸 结合。可将聚苯乙烯板先经紫外线照射（例如 30W 紫外灯，75cm 照射 12 小时），以增加其吸附性能。 固相载体先用碱性蛋白质，如聚赖氨酸、鱼精蛋白等作预包被，也可提高核酸的结合力。也可用亲 和素生物素系统作间接包被，即用亲和素先包被载体，然后加入生物素化的 DNA，这种包被方法均 匀、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。 脂类物质无法与固相载体结合，可将其在有机溶剂（例如乙醇）中溶解后加入 ELISA 板孔中，开盖 置冰箱过夜或冷风吹干，待酒精挥发后，让脂质自然干固在固相表面。抗心磷脂抗体的 ELISA 试剂 一般采用这种包被方式。 3.1.3 包被用抗原 用于包被固相载体的抗原按其来源不同可分为天然抗原、重组抗原和合成多肽抗原三大类。天然抗 原可取自动物组织、微生物培养物等，须经提取纯化才能作包被用。如 HBsAg 可以从携带者的血清 中提取，一般的细菌和病毒抗原可以从其培养物中提取，蛋白成份抗原可从富含此抗原的材料中提 取等（例如 AFP 从脐带血或胎肝中提取）。重组抗原是抗原基因在质粒体中表达的蛋白质抗原，多以 大肠杆菌或酵母菌为质粒体。重组抗原的优点是除工程菌成份外，其他杂质少，而且无传染性，但 纯化技术难度较大。以大肠杆菌为质粒体的重组抗原如不能充分除大肠杆菌成份，用于 ELISA，在 反应中可出现假阳性，因不少受检者受大肠杆菌感染而在血清中存在抗大肠杆菌抗体。重组抗原的 另一特点是能用基因工程制备某些无法从天然材料中分离的抗原物质。例如丙型肝炎病毒（HCV）尚 不能培养成功，而且丙肝病人血清中 HCV 抗原含量极微。目前检测抗 HCV ELISA 中所用包被抗原大 多为根据 HCV 的基因克隆表达而制备的重组抗原。在传染病诊断中，不少重组抗原如 HBsAg、HBeAg 和 HIV 抗原等均在 ELISA 中取得应用。合成多肽抗原是根据蛋白质抗原分子的某一抗原决定簇的氨 基酸序列人工合成的多肽片段。多肽抗原一般只含有一个抗原决定簇，纯度高，特异性也高，但由