良好的LISA板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同 板各孔之间性能相近。聚苯乙烯ELISA板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异 很大，因此，每一批号的LISA板在使用前须事先检查其性能。常用的检查方法为：以一定浓度的 人IgG(一般为10ng/ml)包被ELISA板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人IgG抗体， 保温后洗涤，加底物显色，终止南反应后，分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各孔读数 在吸光度0.8左右。计算全部读数的平均值。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于10%。 与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。作为LISA固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可剪制， 价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯 乙烯高，但空白值也略高。 为比较不同固相在某一LISA测定中的优劣，可应用如下的试验：用其他免疫学测定方法选出一个 典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的LISA操作 步骤进行测定，然后比较结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大，这种载体就是这 ELISA测定项目的最合适的固相载体。 在LISA中，用作固相载体的小珠一般为直径0.6cm的圆珠，表面经磨砂处理后吸附面积大大增加 ELISA板孔的吸附面积约为200mm2,小珠均为1000mm2,将近LISA板孔的5倍。吸附面积的增大 即意味着固相抗原或抗体量的增加。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体 结合位点的暴露面处于最佳反应状态，因此珠式LIS的反应往往更为灵敏。小珠的另一特点是更 易于使洗涤彻底，使用特殊的洗涤器，使小珠在洗涤过程中滚动淋洗，其洗涤效果远较板孔的浸泡 式为好。但由于磨砂工艺的难度较大，小珠的均一性较差。 小试管作为固相载体也有较大的吸附表面，而且标本的反应量也相应增加。板式及珠式LISA的标 本量一般为100-2001，而小试管可根据需要加大反应体积，标本反应量的增加有助于试验敏感性 的提高。小试管还可以当作比色杯，最后直接放入分光光度计中比色。 也有应用聚苯乙烯胶乳或其他材料制成的微粒作为LISA固相载体的。其优点是表面积极大，反应 在悬液中进行，其速率与液相反应近似。以含铁的磁性微粒作为LIS固相载体，反应后用磁铁的 吸引进行分离，洗涤方便，试剂盒一般均配以特殊仪器。 3.1.2包被的方式 将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating))。换言之，包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的 过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与 固相载体表面的疏水基团间的作用于。这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、 浓度等的影响。载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有 良好的 ELISA 板应该是吸附性能好，空白值低，孔底透明度高，各板之间、同一板各孔之间、同一 板各孔之间性能相近。聚苯乙烯 ELISA 板由于原料的不同和制作工艺的差别，各种产品的质量差异 很大，因此，每一批号的 ELISA 板在使用前须事先检查其性能。常用的检查方法为：以一定浓度的 人 IgG（一般为 10ng/ml）包被 ELISA 板各孔，洗涤后每孔内加入适当稀释度的酶标抗人 IgG 抗体， 保温后洗涤，加底物显色，终止酶反应后，分别测每孔溶液的吸光度。控制反应条件，使各孔读数 在吸光度 0.8 左右。计算全部读数的平均值。所有单个读数与全部读数的均数之差，应小于 10%。 与聚苯乙烯类似的塑料是聚氯乙烯。作为 ELISA 固相载体，聚氯乙烯的特点为质软板薄，可剪割， 价廉，但光洁度不如聚苯乙烯板，孔底亦不如聚苯乙烯平整。聚氯乙烯对蛋白质的吸附性能比聚苯 乙烯高，但空白值也略高。 为比较不同固相在某一 ELISA 测定中的优劣，可应用如下的试验：用其他免疫学测定方法选出一个 典型的阳性标本和阴性标本，将它们进行一系列稀释后，在不同的固相载体上按预定的 ELISA 操作 步骤进行测定，然后比较结果。在哪一种载体上阳性结果与阴性结果差别最大，这种载体就是这一 ELISA 测定项目的最合适的固相载体。 在 ELISA 中，用作固相载体的小珠一般为直径 0.6cm 的圆珠，表面经磨砂处理后吸附面积大大增加。 ELISA 板孔的吸附面积约为 200mm2，小珠均为 1000mm2，将近 ELISA 板孔的 5 倍。吸附面积的增大 即意味着固相抗原或抗体量的增加。再者，球型小珠的表面弧度更有利于吸附的抗原决定簇或抗体 结合位点的暴露面处于最佳反应状态，因此珠式 ELISA 的反应往往更为灵敏。小珠的另一特点是更 易于使洗涤彻底，使用特殊的洗涤器，使小珠在洗涤过程中滚动淋洗，其洗涤效果远较板孔的浸泡 式为好。但由于磨砂工艺的难度较大，小珠的均一性较差。 小试管作为固相载体也有较大的吸附表面，而且标本的反应量也相应增加。板式及珠式 ELISA 的标 本量一般为 100-200ul，而小试管可根据需要加大反应体积，标本反应量的增加有助于试验敏感性 的提高。小试管还可以当作比色杯，最后直接放入分光光度计中比色。 也有应用聚苯乙烯胶乳或其他材料制成的微粒作为 ELISA 固相载体的。其优点是表面积极大，反应 在悬液中进行，其速率与液相反应近似。以含铁的磁性微粒作为 ELISA 固相载体，反应后用磁铁的 吸引进行分离，洗涤方便，试剂盒一般均配以特殊仪器。 3.1.2 包被的方式 将抗原或抗体固定在过程称为包被(coating)。换言之，包被即是抗原或抗体结合到固相载体表面的 过程。蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与 固相载体表面的疏水基团间的作用于。这种物理吸附是非特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、 浓度等的影响。载体对不同蛋白质的吸附能力是不相同的，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有