正在加载图片...
抗体(或抗原)代替原ELISA系统中的酶标抗体(抗原)。在LAB中,固相生物素先与不标记的亲和 素反应,然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期,亲和素从蛋清中提取,这种卵亲 和素为碱性糖蛋白,与聚苯乙烯载体的吸附性很强,用于LISA中可使本底增高。从链霉菌中提取 的链霉亲和素则无此缺点,在ELISA应用中有替代前者的趋势。由于ABS-ELISA较普通ELISA多用 了两种试剂,增加了操作步骤,在临床检验中ABS-LISA应用不多。 生物谷技术讲座4:如何选择ELISA试剂? 在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。前文(2.2)己述,LISA中有三个必要 的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。 完整的ELISA试剂盒包含以下各组分: (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂): (2)酶标记的抗原或抗体(结合物): (3)酶的底物: (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中): (5)结合物及标本的稀释液: (6)洗涤液: (7)酶反应终止液。 3.1免疫吸附剂 己包被抗原或抗体的固相载体在低温(28℃)干燥的条件下一般可保存6个月。有些不完整的试盒 仅供应包被用抗原或抗体,检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。 3.1.1周相载体 固相载体在ELISA测定过程中作为吸附剂和容器,不参与化学反应。可作LISA中载体的材料很多, 最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能,抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保 留原来的免疫学活性,加之它的价格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料,可制成各种形式。 LISA载体的形状主要有三种:微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常用,专用于EISA 的产品称为LISA板,国际上标准的微量滴定板为8×12的96孔式。为便于作少量标本的检测,有 制成8联孔条或12联孔条的,放入座架后,大小与标准ELISA板相同。LISA板的特点是可以同时 进行大量标本的检测,并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量滴 定板型的LISA检测,包括加样、洗涤、保温、比色等步骤,对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯 经射线照射后,其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加,应用于双抗体夹心法可使固相上 抗体量增多,但用于间接法测抗体时空白值较大。抗体(或抗原)代替原 ELISA 系统中的酶标抗体(抗原)。在 LAB 中,固相生物素先与不标记的亲和 素反应,然后再加酶标记的生物素以进一步提高敏感度。在早期,亲和素从蛋清中提取,这种卵亲 和素为碱性糖蛋白,与聚苯乙烯载体的吸附性很强,用于 ELISA 中可使本底增高。从链霉菌中提取 的链霉亲和素则无此缺点,在 ELISA 应用中有替代前者的趋势。由于 ABS-ELISA 较普通 ELISA 多用 了两种试剂,增加了操作步骤,在临床检验中 ABS-ELISA 应用不多。 生物谷技术讲座 4:如何选择 ELISA 试剂? 在临床检验中一般采用商品试剂盒进行测定。前文(2.2)已述,ELISA 中有三个必要 的试剂:免疫吸附剂、结合物和酶的底物。 完整的 ELISA 试剂盒包含以下各组分: (1)已包被抗原或抗体的固相载体(免疫吸附剂); (2)酶标记的抗原或抗体(结合物); (3)酶的底物; (4)阴性对照品和阳性对照品(定性测定中),参考标准品和控制血清(定量测定中); (5)结合物及标本的稀释液; (6)洗涤液; (7)酶反应终止液。 3.1 免疫吸附剂 已包被抗原或抗体的固相载体在低温(2~8℃)干燥的条件下一般可保存 6 个月。有些不完整的试盒, 仅供应包被用抗原或抗体,检测人员需自行包被。以下简述固相载体和包被过程。 3.1.1 固相载体 固相载体在 ELISA 测定过程中作为吸附剂和容器,不参与化学反应。可作 ELISA 中载体的材料很多, 最常用的是聚苯乙烯。聚苯乙烯具有较强的吸附蛋白质的性能,抗体或蛋白质抗原吸附其上后仍保 留原来的免疫学活性,加之它的价格低廉,所以被普遍采用。聚苯乙烯为塑料,可制成各种形式。 ELISA 载体的形状主要有三种:微量滴定板、小珠和小试管。以微量滴定板最为常用,专用于 EILSA 的产品称为 ELISA 板,国际上标准的微量滴定板为 8×12 的 96 孔式。为便于作少量标本的检测,有 制成 8 联孔条或 12 联孔条的,放入座架后,大小与标准 ELISA 板相同。ELISA 板的特点是可以同时 进行大量标本的检测,并可在特制的比色计上迅速读出结果。现在已有多种自动化仪器用于微量滴 定板型的 ELISA 检测,包括加样、洗涤、保温、比色等步骤,对操作的标准化极为有利。聚苯乙烯 经射线照射后,其吸附性能特别是对免疫球蛋白的吸附性能增加,应用于双抗体夹心法可使固相上 抗体量增多,但用于间接法测抗体时空白值较大
<<向上翻页向下翻页>>
©2008-现在 cucdc.com 高等教育资讯网 版权所有