四、实验内容与方法 (一)器材的清洗 1、培养用瓶的清洗：将培养瓶放入肥皂水中煮沸30分钟，并趁热刷洗 瓶内，然后用自来水将皂液冲净，干后置硫酸一重铬酸钾洗液中浸泡24小 时左右，从洗液中取出的小瓶立即用自来水充分冲洗15次，接着用蒸馏水 冲洗5次，双蒸水神洗3次，然后将小瓶倒立在铝饭盒中，置于烤箱将其烤 干，最后盖上饭盒盖放入高压蒸气消毒锅中灭菌。其它玻璃器皿的清洗消毒 与上述操作基本相同. 2、玻璃除菌滤器的清洗：新购置的玻璃除菌滤器先用肥皂水刷洗并用 自来水冲洗干净：再将滤器安置在抽滤瓶上，倒满浓硫酸后进行抽滤，使浓 硫酸全部通过滤板，然后用蒸馏水多次抽滤，使残留的酸全部除去，再用双 蒸水滤过两次，置110℃烤箱中2小时（温度不要过高：以免使玻璃析出碱 性物质)：取出后用牛皮纸包扎出入口置高压蒸气消毒锅中灭菌。抽滤过不 含血清的培养液的滤器可直接用蒸瘤水油滤洗涤。但油滤讨血清或P阳A的浅 器必须用浓硫酸浸泡一天（将滤器中盛满浓硫酸，不加负压）后，再将剩余 的硫酸抽完，然后用蒸馏水彻底冲洗。 3、橡胶瓶盖的清洗：橡皮塞清洗较简单：可直接放入肥皂水中煮沸30 分钟，然后用自来水充分冲洗，再用蒸溜水煮沸0分钟，取出后用蒸馏水、 双蒸水、各冲洗两次，放入100℃烤箱中烘干，置饭盒中：高压灭菌备用。 4、载波片的清洗：新载玻片先用肥皂水逐一洗一遍，用自来水彻底冲 洗干净，再逐一投入到95%的酒精中浸泡一夜（可在其中长期保存），用 前一小时捞出，然后放入蒸馏水中置入冰箱预冷。 (二)培养液及各种试剂的配制 1.青霉素液： 一瓶80万单位的青霉素，将其溶于40ml双蒸水中，即 成每毫升20000单位的使用液。在培养液中的最终浓度为100单位/ml。 2.链福茶液：取一瓶100万单位的硫酸链霉素粉剂，容于50m1双蒸水 中，即成每毫升20000单位的使用液。在培养液中的最终浓度为100单位/m1。 3.0.075mol1LKC1低渗液： 钾(KCI) 溶于500ml蒸馏水中 4.秋水仙素液：称取秋水仙素5mg溶于100ml0.85NaC1中，配制成50 μg/血l的原液，再用生理盐水稀释成5μg/ml的工作液，然后用G玻璃滤 器除菌，分装成小瓶置4℃冰箱避光。使用时，每5ml培养液用5号针头加 2滴（约0.05ml,相当于205μg),使培养液中秋水仙素的终浓度达0.05 μg/ml左右 5.肝素抗凝剂：肝素注射液1支(12500单位)用25ml灭菌生理盐水 在超净工作台中稀释成500单位/ml的使用液，使用时每毫升血加0.2ml开 素液(100单位肝素液一般可抗凝5ml血)。若购得的肝素为粉剂，可配成 4mg/m1的浓度，由于每毫克含125单位，故浓度也是500单位/ml。 6.pH6.8磷酸缓冲液：称取NaP0,.12H011.8g(或5.92g5 四、实验内容与方法 （一）器材的清洗 1、培养用瓶的清洗：将培养瓶放入肥皂水中煮沸 30 分钟，并趁热刷洗 瓶内，然后用自来水将皂液冲净，干后置硫酸一重铬酸钾洗液中浸泡 24 小 时左右，从洗液中取出的小瓶立即用自来水充分冲洗 15 次，接着用蒸馏水 冲洗 5 次，双蒸水冲洗 3 次，然后将小瓶倒立在铝饭盒中，置于烤箱将其烤 干，最后盖上饭盒盖放入高压蒸气消毒锅中灭菌。其它玻璃器皿的清洗消毒 与上述操作基本相同． 2、玻璃除菌滤器的清洗：新购置的玻璃除菌滤器先用肥皂水刷洗并用 自来水冲洗干净；再将滤器安置在抽滤瓶上，倒满浓硫酸后进行抽滤，使浓 硫酸全部通过滤板，然后用蒸馏水多次抽滤，使残留的酸全部除去，再用双 蒸水滤过两次，置 110℃烤箱中 2 小时（温度不要过高；以免使玻璃析出碱 性物质）；取出后用牛皮纸包扎出入口置高压蒸气消毒锅中灭菌。抽滤过不 含血清的培养液的滤器可直接用蒸馏水抽滤洗涤。但抽滤过血清或 PHA 的滤 器必须用浓硫酸浸泡一天（将滤器中盛满浓硫酸，不加负压）后，再将剩余 的硫酸抽完，然后用蒸馏水彻底冲洗。 3、橡胶瓶盖的清洗：橡皮塞清洗较简单；可直接放入肥皂水中煮沸 30 分钟，然后用自来水充分冲洗， 再用蒸溜水煮沸 30 分钟，取出后用蒸馏水、 双蒸水、各冲洗两次，放入 100℃烤箱中烘干，置饭盒中；高压灭菌备用。 4、载波片的清洗：新载玻片先用肥皂水逐一洗一遍，用自来水彻底冲 洗干净，再逐一投入到 95％的酒精中浸泡一夜（可在其中长期保存），用 前一小时捞出，然后放入蒸馏水中置入冰箱预冷。 （二）培养液及各种试剂的配制 1.青霉素液：取一瓶 80 万单位的青霉素，将其溶于 40ml 双蒸水中，即 成每毫升 20000 单位的使用液。在培养液中的最终浓度为 100 单位/ml。 2.链霉素液：取一瓶 100 万单位的硫酸链霉素粉剂，溶于 50ml 双蒸水 中，即成每毫升20000单位的使用液。在培养液中的最终浓度为100单位/ml。 3. 0．075 mol/ . L KCl 低渗液： 氯化钾（KCl） 2．79g 溶于 500ml 蒸馏水中。 4.秋水仙素液：称取秋水仙素 5mg 溶于 100ml 0.85NaCl 中，配制成 50 μg/ml 的原液，再用生理盐水稀释成 5μg/ml 的工作液，然后用 G5 玻璃滤 器除菌，分装成小瓶置 4 0 C 冰箱避光。使用时，每 5ml 培养液用 5 号针头加 2 滴（约 0.05ml，相当于 205μg），使培养液中秋水仙素的终浓度达 0.05 μg/ml 左右。 5. 肝素抗凝剂：肝素注射液 1 支（12500 单位）用 25ml 灭菌生理盐水 在超净工作台中稀释成 500 单位/ml 的使用液，使用时每毫升血加 0.2ml 肝 素液（100 单位肝素液一般可抗凝 5ml 血）。若购得的肝素为粉剂，可配成 4mg/ml 的浓度，由于每毫克含 125 单位，故浓度也是 500 单位/ml。 6. pH6.8 磷 酸 缓 冲 液 ： 称 取 Na2HPO4 .12H20 11.8g （ 或 5.92g