(4)宫颈癌组织细胞致癌相关蛋白三级分析:挑选经二级分析鉴定的目标致癌蛋白 进行荧光标记,将其与共价离子蛋白芯片结合,经计算机距阵分析译出致癌蛋 白多肽结构和相应DNA核苷酸序列 (5)宫颈癌组织细胞致癌相关蛋白四级分析:当目标致癌蛋白与共价离子蛋白芯片 结合后,使用特功酶对芯片上的蛋白进行特殊分解( Digest on chip),再进 一步经计算机距阵分析译出致癌蛋白多肽结构和相应DNA核苷酸序列; (6)对经四级分析鉴定蛋白的理化、生化性质进行精细分析。 4)病毒致癌蛋白分子生物特性分析 (1)蛋白质活性离体测定 (2)致癌蛋白与细胞培养测定; (3)致癌蛋白与组织培养测定; (4)观察病毒致癌蛋白与宿主细胞生长调节蛋白间的关系。 5)病毒致癌分子调控机理分析: (1)流式细胞仪分析宿主感染细胞的表型及组织相容性表现 (2)运用分子原位杂交和共聚焦激光断层显示系统观察病毒在宿主细胞中的整合时 机及方式 (3)观察细胞周期调节因子p53和Rb蛋白对慢性宫颈慢性疾病、宫颈癌前病变的保 护作用 (4)测定各类病变细胞病毒蛋白与、p53、Rb及E2F-1水平,观察病毒致癌蛋白对p5 和Rb蛋白可能的负调节作用 (5)探索分析端粒酶激活与V感染的内在关系,端粒酶各组份(hTR或 hTERT)的活 性表达内涵,以及p53和Rb失活、端粒酶激活和细胞恶性转化的机制 (6)测定各类病变细胞中活性调控因子如y-干扰素、B-转化生长因子和表皮生长因 子受体的表达活性以及病毒致癌蛋白的相互关系 6)根据硏究结果,提出整体的、分层次有效阻断病毒致癌综合方案及策略: (1)利用精筛鉴定的致癌蛋白制备高效免疫疫苗,接种保护高危人群 (2)应用分子基因治疗手段对已感染人群,干预逆转病毒持续致癌状态。 5-2⎯ 5-2⎯ (4) 宫颈癌组织细胞致癌相关蛋白三级分析: 挑选经二级分析鉴定的目标致癌蛋白 进行荧光标记，将其与共价离子蛋白芯片结合，经计算机距阵分析译出致癌蛋 白多肽结构和相应DNA核苷酸序列； (5) 宫颈癌组织细胞致癌相关蛋白四级分析: 当目标致癌蛋白与共价离子蛋白芯片 结合后，使用特功酶对芯片上的蛋白进行特殊分解（Digest on chip），再进 一步经计算机距阵分析译出致癌蛋白多肽结构和相应DNA核苷酸序列； (6) 对经四级分析鉴定蛋白的理化、生化性质进行精细分析。 4) 病毒致癌蛋白分子生物特性分析： （1）蛋白质活性离体测定； （2）致癌蛋白与细胞培养测定； （3）致癌蛋白与组织培养测定； （4）观察病毒致癌蛋白与宿主细胞生长调节蛋白间的关系。 5) 病毒致癌分子调控机理分析： (1) 流式细胞仪分析宿主感染细胞的表型及组织相容性表现； (2) 运用分子原位杂交和共聚焦激光断层显示系统观察病毒在宿主细胞中的整合时 机及方式； (3) 观察细胞周期调节因子p53和Rb蛋白 对慢性宫颈慢性疾病、宫颈癌前病变的保 护作用； (4) 测定各类病变细胞病毒蛋白与、p53、Rb及E2F-1水平，观察病毒致癌蛋白对p53 和Rb蛋白可能的负调节作用； (5) 探索分析端粒酶激活与HPV感染的内在关系，端粒酶各组份（hTR或hTERT）的活 性表达内涵，以及p53和Rb失活、端粒酶激活和细胞恶性转化的机制； (6) 测定各类病变细胞中活性调控因子如γ-干扰素、β-转化生长因子和表皮生长因 子受体的表达活性以及病毒致癌蛋白的相互关系。 6 ) 根据研究结果，提出整体的、分层次有效阻断病毒致癌综合方案及策略： (1) 利用精筛鉴定的致癌蛋白制备高效免疫疫苗，接种保护高危人群； (2) 应用分子基因治疗手段对已感染人群，干预逆转病毒持续致癌状态