目类别投送学科代码科学部编码 A C030304 国家自然科学基金 请 书 项目名称:靶向求源探索宫颈癌发病分子学机理 申请者:马丁 所在单位:华中科技大学同济医学院 邮政编码:430030 通讯地址:湖北省武汉市航空路13号 电话: 传真 电子信箱 申请日期:2002年3月 国家自然科学基金委员会 九九七年制
项目类别 投送学科代码 科学部编码 A C030304 国 家 自 然 科 学 基 金 申 请 书 项目名称: 靶向求源探索宫颈癌发病分子学机理 申 请 者：马 丁 所在单位：华中科技大学同济医学院 邮政编码：430030 通讯地址：湖北省 武汉市 航空路13号 电 话： 传 真： 电子信箱： 申请日期: 2002年3月 国家自然科学基金委员会 一九九七年制
填报说明 填写申请书前,请先查阅国家自然科学基金有关项目申请办法及 规定。申请书各项内容,要实事求是,逐条认真填写。表达要明确、严 谨,字迹要清晰易辨。外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现的 缩写词,须注出全称 、申请书为十六开本,复印时用B5复印纸,于左侧装订成册。第 页起各栏空格不够时,请自行加页。一式六份(至少一份为原件),由 所在单位审查签署意见后,按申报学科投送国家自然科学基金委员会对 口科学部。地区科学基金项目,申请书另报送省(自治区)科委一份原 件 封面右上角“科学部编号”由对口科学部填写,项目类别和申报 学科代码1由申请者填写。 四、下列人员不得作为申请项目的负责人提出申请,但可作为项目组 成员参加研究 在读(含在职)研究生 已离退休的科研人员 -申请单位的兼职科研人员 五、申请者和项目组中具有高级专业技术职务的主要成员申请(含参 加)的项目数,连同在研的国家自然科学基金项目数(不含重点项目、 重大项目),不得超过两项 六、同一项目组研究内容相近的项目,只允许报送一个学科。 七、申请者可因同类项目竞争等原因,提出不宜评议本项目的专家名 单(姓名与单位,3人以内),密封于信封中,钉在申请书原件封面, 或另专函相关学科,供科学部选择同行评议人时参考。科学部将对此信 息保密。 八、国家自然科学基金委员会通讯地址:北京市海淀区花园北路35 号东门 邮政编码:100083
填 报 说 明 一、填写申请书前，请先查阅国家自然科学基金有关项目申请办法及 规定。申请书各项内容，要实事求是，逐条认真填写。表达要明确、严 谨，字迹要清晰易辨。外来语要同时用原文和中文表达。第一次出现的 缩写词，须注出全称。 二、申请书为十六开本，复印时用B5复印纸，于左侧装订成册。第三 页起各栏空格不够时，请自行加页。一式六份（至少一份为原件），由 所在单位审查签署意见后，按申报学科投送国家自然科学基金委员会对 口科学部。地区科学基金项目，申请书另报送省（自治区）科委一份原 件。 三、封面右上角“科学部编号”由对口科学部填写，项目类别和申报 学科代码1由申请者填写。 四、下列人员不得作为申请项目的负责人提出申请，但可作为项目组 成员参加研究： —在读（含在职）研究生 —已离退休的科研人员 —申请单位的兼职科研人员 五、申请者和项目组中具有高级专业技术职务的主要成员申请（含参 加）的项目数，连同在研的国家自然科学基金项目数（不含重点项目、 重大项目），不得超过两项。 六、同一项目组研究内容相近的项目，只允许报送一个学科。 七、申请者可因同类项目竞争等原因，提出不宜评议本项目的专家名 单（姓名与单位，3人以内），密封于信封中，钉在申请书原件封面， 或另专函相关学科，供科学部选择同行评议人时参考。科学部将对此信 息保密。 八、国家自然科学基金委员会通讯地址：北京市海淀区花园北路35 号东门 邮政编码：100083
简表 逆|向求源|探索含颈癌发两分子学机 g ia The etiology and molecular biological counterevidence of cervical cancer 研|类别A自由申请B高技术探索C青年D地区 高技术探索 究 重大 F重点 H专项 「A项目主题号 项报审|名称1 妇科学 名称2 A.基础研究 目学科|代码1 C030304 代码2 B应用基础 申请金额 25 00|万元起止年月2003年1月至2005年12月 所用实验室A国家重点:B部门开放 B实验室编号 姓名 马丁 性|A.男 出生年月 民名称汉 申拼音| Ma Ding别|B.女A身份证号 族代码01 专业名称教授 A.博士 博士学位 请职务代码011位学士把予国别国(地区名中国B博士生导师 技术 B.硕士 或地区代码|156c博士后 名称 华中科技大学 系(所)同济医院代码43007402 者所 A高等院校 在性质|B科研单位 邮政编码 430030 隶属名称教育部 其它 A申请者电话(027)83662475关系代码 360 位「所在地「湖北省(自治区、直辖市)武汉市(县)硚口区航空街(路)13号 总人数高级|中级初级博士后博士生硕士生参加单位数 3 专业技术 项目中 主姓名 身份证号 工作单位及代码 的分工签章 「本國冈囯臼洲科酬改田及研究毆·用区
一、简表 ⎯ 1 ⎯ 本 项 目 采 用 全 新 科 研 设 计 及 研 究 手 段 ， 运 用 双 名称 逆 向 求 源 探 索 宫 颈 癌 发 病 分 子 学 机 理 英语 The etiology and molecular biological counterevidence of cervical cancer women 研 类别 A.自由申请 B.高技术探索 C.青年 D.地区 高技术探索 究 E. 重大 F.重点 H.专项 A 项目主题号 项 报审 名称1 妇科学 名称2 A..基础研究 目 学科 代码1 C030304 代码2 B.应用基础 A 申请金额 2 5 ． 0 0 万元 起止年月 2003年1 月至2005年12 月 所用实验室 A.国家重点；B.部门开放 B 实验室编号 姓名 马 丁 性 A. 男 出生年月 民 名称 汉 申 拼音 Ma Ding 别 B. 女 A 身份证号 族 代码 01 专业 技术 名称 教授 学 A. 博 士 B. 硕 士 博士学位 授予国别 国(地区)名 中国 A.院士 B.博士生导师 请 职务 代码 011 位 C. 学 士 A 或地区 代 码 156 C.博士后 B 名称 华中科技大学 系(所) 同济医院 代码 43007402 者 所 在 性质 A.高等院校 B.科研单位 邮政编码 430030 隶属 名称 教育部 单 C..其它 A 申请者电话 (027)83662475 关系 代码 360 位 所在地 湖北省（自治区、直辖市）武汉市（县) 石乔口 区 航空街（路）13 号 总人数 高级 中级 初级 博士后 博士生 硕士生 参加单位数 11 4 4 3 1 主 姓名 身份证号 专业技术 职 务 工作单位及代码 项目中 的分工 签章
回分子分析系在 DNARNA和蛋 包括|HPv相关致癌|基因|的[筛|查和|确 蛋白表达方式信号传导调F节致病过程易 容要感度量标准 别是反向逆源手段不但能|精巧 辨别致病蛋旧,更能准确逆确定段病基因 由此建对阻断病感染致癌的“疗窗 义|主题词 题词不多于三个;2.主题词之间空一格(英文用/分隔) 中文 宫颈癌人类 状|病|毒||分子机理 英文 Cervical cancer/HPV/biological mechanism 简表填写要求 、简表内容将输入计算机,必须逐项认真填写,采用国家公布的标准简化汉字,简表中所有代码以最新 发布的《国家自然科学基金申请项目分类目录及代码》为准填写。高技术探索课题主题号按《高技术 新概念新构思探索课题项目指南》中主题号填写,申请重点项目时项目类别也填写B,并在申请书封 面右上角加注“高技术探索课题重点项目 凡选择性栏目,将相应提示符A、B等之一填入该栏的右下角。 、部分栏目填写要求 项目名称—应确切反映研究内容和范围,最多不超过25个汉字(包括标点符号)。 基础研究—指以认识自然现象、探索自然规律为目的,不直接考虑应用目标的研究活动 应用基础研究一指有广泛应用前景,但以获得新知识、新原理、新方法为主要目的的研究 申报学科申请项目所属的最基础学科。如涉及多学科可填写两个,先填为主学科。 申请金额一以万元为单位,用阿拉伯数字表示,注意小数点 起止年月一起始时间从申请的次年1月算起。完成时间为完成年度的12月。 所用实验室一系指研究项目将利用的实验室仅填写国家计委批准的国家重点实验室或部门批准的开放实 所在单位名称及代码按单位公章填写全称。例如“中国科学院西安光学精密机械研究所”不得填“中 科院西安光机所”或“西安光机所”。全称中的数字,一律写中文,例如 航空航天工业部第七O一研究所。首次申请国家自然科学基金的单位,尚未 编入单位代码,其代码暂不填写 参加单位数指研究项目组主要成员所在单位数,包括主持单位和合作单位(含作者所在单位),以 阿拉伯数字表示。 项目组主要成员一指在项目组内对学术思想、技术路线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作用 的人员,本人应在申请书上签名。本栏双线右侧内容不输入计算机。 研究内容和意义一摘要及主题词均录入软盘 二、立论依据
向 分 子 分 析 验 证 系 统 在 D N A 、 R N A 和 蛋 白 研 摘 三 个 层 次 全 面 探 索 宫 颈 癌 发 病 机 制 。 研 究 要 点 究 包 括 H P V 相 关 致 癌 基 因 的 筛 查 和 确 定 、 病 毒 内 蛋 白 表 达 方 式 、 信 号 传 导 调 节 、 致 病 过 程 、 易 容 要 感 度 量 标 准 。 特 别 是 反 向 逆 源 手 段 不 但 能 精 巧 和 辨 别 致 病 蛋 白 ， 更 能 准 确 追 逆 确 定 致 病 基 因 ， 意 由 此 建 立 针 对 阻 断 病 毒 感 染 致 癌 的 “ 治 疗 窗 ” 义 主题词 1.主题词不多于三个； 2. 主题词之间空一格 (英文用/分隔) 中文 宫 颈 癌 人 类 乳 头 状 病 毒 分 子 机 理 英文 Cervical cancer/ HPV/biological mechanism 简 表 填 写 要 求 一、简表内容将输入计算机，必须逐项认真填写，采用国家公布的标准简化汉字，简表中所有代码以最新 发布的《国家自然科学基金申请项目分类目录及代码》为准填写。高技术探索课题主题号按《高技术 新概念新构思探索课题项目指南》中主题号填写，申请重点项目时项目类别也填写B，并在申请书封 面右上角加注“高技术探索课题重点项目”。 二、凡选择性栏目，将相应提示符A、B等之一填入该栏的右下角。 三、部分栏目填写要求： 项目名称⎯应确切反映研究内容和范围，最多不超过25个汉字（包括标点符号）。 基础研究⎯指以认识自然现象、探索自然规律为目的，不直接考虑应用目标的研究活动。 应用基础研究⎯指有广泛应用前景，但以获得新知识、新原理、新方法为主要目的的研究。 申报学科⎯申请项目所属的最基础学科。如涉及多学科可填写两个，先填为主学科。 申请金额⎯以万元为单位，用阿拉伯数字表示，注意小数点。 起止年月⎯起始时间从申请的次年1月算起。完成时间为完成年度的12月。 所用实验室⎯系指研究项目将利用的实验室仅填写国家计委批准的国家重点实验室或部门批准的开放实 室。 所在单位名称及代码⎯按单位公章填写全称。例如“中国科学院西安光学精密机械研究所”不得填“中 科院西安光机所”或“西安光机所”。全称中的数字，一律写中文，例如： 航空航天工业部第七○一研究所。首次申请国家自然科学基金的单位，尚未 编入单位代码，其代码暂不填写。 参加单位数⎯指研究项目组主要成员所在单位数，包括主持单位和合作单位（含作者所在单位），以 阿拉伯数字表示。 项目组主要成员⎯指在项目组内对学术思想、技术路线的制订与理论分析及对项目的完成起重要作用 的人员，本人应在申请书上签名。本栏双线右侧内容不输入计算机。 研究内容和意义⎯摘要及主题词均录入软盘。 ⎯ 2 ⎯ 二 、 立 论 依 据
(包括项目的研究意义、国内外研究现状分析,附主要的参考文献及出处) 对基础研究,着重结合国际科学发展趋势,论述项目的科学意义 对应用基础研究,着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题,论述 其应用前景。 宫颈癌是危害全世界妇女健康的首要恶性肿瘤之一,居女性癌症死亡率第二位。宫颈 癌发病率及死亡率在不同地区、不同经济状况的国家有显著差异。据世界卫生组织报告, 病率最高的国家为智利(15410万),中国146/10万)仅次于智利,都是宫颈癌的高发国家 特别近年来宫颈癌发病率在我国有明显增高趋势,并趋于年轻化2。因此,如何找寻宫颈 癌发病因素,探索发病的分子学基础,最终达到根除宫颈癌是关系到攻克重大疾病,保护 国妇女健康的重要课题 宫颈癌发病的高危因素就目前研究资料主要可能为以下因素:(1)人类乳头状瘤病毒 (HPV感染和性因素:约95%宫颈癌患者体内可检出HPV。HPV已被视作宫颈癌发病的首要 因素。在初次性生活过早(<16岁)、性生活活跃、性紊乱和性生活不洁的妇女中宫颈癌 发病率高。性因素被认为引导致癌因子HPV、巨细胞病毒CM等的入侵而具备的,宫颈癌 作为一种性传播性疾病已普遍被认同。(2)宫颈病变:宫颈慢性疾病如宫颈中重度糜烂、慢性 子宫颈炎、宫颈息肉、宫颈湿疣、产后裂伤等与宫颈癌发生有关联,实际上宫颈慢性病变给 HPV等致癌因子更多的侵入机会。(3)基因改变:细胞遗传学研究发现,宫颈癌细胞存在非随 机性染色体异常,如第1、3、5、11和17号染色体上有等位基因缺失(4激素:糖皮质激 素、类固醇激素如雌孕激素等可以增强病毒转录。(5)免疫状态:某些HLA基因型在宫颈癌 患者中较正常人更为常见,表明宫颈癌易感性可能部分由调节对HPV免疫反应的先天遗传因 素所决定。吸烟者、肾移植患者易患宫颈鳞癌,可能与免疫功能缺陷有关。由于机体免 功能下降,清除病毒能力亦下降,导致病毒持续感染状态。上述五点高危因素实际上或多 少都与HPV感染有关。 探索宫颈癌发病过程中的分子生物学因素是国内外学者关注的课题,特别在HPV与宫 颅颈癌发病关联方面进行了先期研究。HPV亚型繁多,约100多种,其中约有20种与人类生殖 区皮肤粘膜病变有关,根据其对生殖系统致癌危害性又分为“高危组”和“低危组”。低 危组有HPV6、1、40、42等,主要引发良性增生如尖锐湿疣:高危组有HPV16、18、31、 3、51等,常引起恶性转化。HPV结构为一小的双链病毒,其基因组可分为三部分。就目 前初步研究认为,第二部分早期区包含6个开放阅读框,E1、E2、F4、E5、E6和E7,它们 第3页(项目的研究意义、国内外研究现状分析,附主要的参考文献一附页) 在病毒复制时起重要作用。其中E6、E7编码的癌蛋白可能对病毒复制及HPV感染的宿主细 胞的转化十分关键,E蛋白具有AP酶活性,对于病毒的复制亦很重要,而E2蛋白能与
（包括项目的研究意义、国内外研究现状分析，附主要的参考文献及出处） ⎯ 3-1⎯ 接第3页（项目的研究意义、国内外研究现状分析，附主要的参考文献—附页） 对 对基础研究，着重结合国际科学发展趋势，论述项目的科学意义； 对应用基础研究，着重结合学科前沿、围绕国民经济和社会发展中的重要科技问题，论述 其应用前景。 宫颈癌是危害全世界妇女健康的首要恶性肿瘤之一，居女性癌症死亡率第二位[1]。宫颈 癌发病率及死亡率在不同地区、不同经济状况的国家有显著差异。据世界卫生组织报告，发 病率最高的国家为智利（15.4/10万），中国(14.6/10万)仅次于智利，都是宫颈癌的高发国家。 特别近年来宫颈癌发病率在我国有明显增高趋势，并趋于年轻化[2, 3]。因此，如何找寻宫颈 癌发病因素，探索发病的分子学基础，最终达到根除宫颈癌是关系到攻克重大疾病，保护我 国妇女健康的重要课题。 宫颈癌发病的高危因素就目前研究资料主要可能为以下因素：(1)人类乳头状瘤病毒 (HPV)感染和性因素：约95℅宫颈癌患者体内可检出HPV。HPV已被视作宫颈癌发病的首要 因素[4-6]。在初次性生活过早（<16岁）、性生活活跃、性紊乱和性生活不洁的妇女中宫颈癌 发病率高。性因素被认为引导致癌因子HPV 、巨细胞病毒(CMV)等的入侵而具备的，宫颈癌 作为一种性传播性疾病已普遍被认同。(2)宫颈病变：宫颈慢性疾病如宫颈中重度糜烂、慢性 子宫颈炎、宫颈息肉、宫颈湿疣、产后裂伤等与宫颈癌发生有关联，实际上宫颈慢性病变给 HPV等致癌因子更多的侵入机会。(3)基因改变：细胞遗传学研究发现，宫颈癌细胞存在非随 机性染色体异常，如第1、3、5、11和17号染色体上有等位基因缺失[7]。(4)激素：糖皮质激 素、类固醇激素如雌孕激素等可以增强病毒转录。(5)免疫状态： 某些HLA基因型在宫颈癌 患者中较正常人更为常见，表明宫颈癌易感性可能部分由调节对HPV免疫反应的先天遗传因 素所决定[8]。吸烟者、肾移植患者易患宫颈鳞癌，可能与免疫功能缺陷有关。由于机体免疫 功能下降，清除病毒能力亦下降，导致病毒持续感染状态。上述五点高危因素实际上或多或 少都与HPV感染有关[9]。 探索宫颈癌发病过程中的分子生物学因素是国内外学者关注的课题，特别在HPV与宫 颈癌发病关联方面进行了先期研究。HPV亚型繁多，约100多种，其中约有20种与人类生殖 区皮肤粘膜病变有关，根据其对生殖系统致癌危害性又分为“高危组”和“低危组 ”。低 危组有HPV6、11、40、42等，主要引发良性增生如尖锐湿疣；高危组有HPV16、18、31、 33、51等，常引起恶性转化[5]。HPV结构为一小的双链病毒，其基因组可分为三部分。就目 前初步研究认为，第二部分早期区包含6个开放阅读框，E1、E2、E4、E5、E6和E7，它们 在病毒复制时起重要作用。其中E6、E7编码的癌蛋白可能对病毒复制及HPV感染的宿主细 胞的转化十分关键[2,3]，E1蛋白具有ATP酶活性，对于病毒的复制亦很重要，而E2蛋白能与 调控区下游区(URR)结合充当转录活化或抑制因子。HPV 的DNA在宿主细胞中以两种方式
3-2
⎯ 3-2 ⎯
差异表达达和功能演变着手,采用全新技术路线,精巧准确对致病蛋白进行分辨定格 并以此为切入点追逆解译DNA的变异,为病毒感染、病毒蛋白致癌提供确实可靠的依据, 也可为探索其它疾病与致病因素相互关系建立一个新的技术突破口。在以上研究的基础 上,提出针对病毒感染致癌的“治疗窗”,建立终止HⅤ持续感染状态、保护妇女免受宫 颈癌侵扰的策略及有效方法 参考文獻 1. Chan PK, et al. Determinants of cervical human papillomavirus infection: differences between high- and low-oncogenic risk types J Infect Dis2021;185(1):28-35 2. Schoell W, et al. Epidemiology and biology of cervical cancer. Semin Surg Oncol.1999;16:203-211 3.马丁,奚玲.宫颈癌的流行病学及病因学硏究进展.中国实用妇产科杂志. 2001;23:1-5 4.许雪梅,司静懿等.中国山东地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16E6Eη 基因的分离、克隆和序列分析.中国医学科学院学报.1999;21:185-191 5. Combita AL, et al. Serologic response to human oncogenic papillomavirus types 16, 18, 31, 33, 39, 58 and 59 virus-like particles in colombian women with invasive cervical cancer. Int J Cancer200220;97(6):796-803 6. Hagensee ME, et al. Infection with Human Papillomavirus: Update on Epidemiology, Diagnosis, and Treatment. Curr Infect Dis Rep 2000 2(1):18-24 Reinstein E, et al. Degradation of the e7 human papillomavirus oncoprotein by the ubiquitin-proteasome system: targeting via ubiquitination of the N-terminalresidue Oncogene 2000; 19: 5944-50
⎯ 3-3 ⎯ 差异表达达和功能演变着手，采用全新技术路线，精巧准确对致病蛋白进行分辨定格， 并以此为切入点追逆解译DNA的变异，为病毒感染、病毒蛋白致癌提供确实可靠的依据， 也可为探索其它疾病与致病因素相互关系建立一个新的技术突破口。在以上研究的基础 上，提出针对病毒感染致癌的 “治疗窗”，建立终止HPV持续感染状态、保护妇女免受宫 颈癌侵扰的策略及有效方法。 参 考 文 献 1. Chan PK, et al.Determinants of cervical human papillomavirus infection: differences between high- and low-oncogenic risk types. J Infect Dis 2002 1;185(1):28-35 2. Schoell W, et al. Epidemiology and biology of cervical cancer. Semin Surg Oncol. 1999; 16:203-211 3. 马丁，奚玲. 宫颈癌的流行病学及病因学研究进展. 中国实用妇产科杂志. 2001; 23:1-5 4. 许雪梅, 司静懿等. 中国山东地区妇女宫颈癌组织中人乳头瘤病毒 16E6E7 基因的分离、克隆和序列分析. 中国医学科学院学报. 1999; 21:185-191 5. Combita AL, et al.Serologic response to human oncogenic papillomavirus types 16, 18, 31, 33, 39, 58 and 59 virus-like particles in colombian women with invasive cervical cancer. Int J Cancer 2002 20;97(6):796-803 6. Hagensee ME, et al. Infection with Human Papillomavirus: Update on Epidemiology, Diagnosis, and Treatment. Curr Infect Dis Rep 2000; 2(1):18-24 7. Reinstein E, et al.Degradation of the E7 human papillomavirus oncoprotein by the ubiquitin-proteasome system: targeting via ubiquitination of the N-terminalresidue Oncogene 2000;19:5944-50
9. Daemen T, et, al. Immunization strategy against cervical cancer involving an alphavirus vector expressing high levels of a stable fusion protein of human papillomavirus 16 E6 and E7. Gene Ther 2002;9(2):85-94 10. Natale C, Computer-assisted analysis of molecular mimicry between human papillomavirus 16 E7 oncoprotein and human protein sequences. Immunol cell biol 2000: 78: 580-5 ll. Villa ll, et al. Molecular variants of human papillomavirus types 16 and 18 preferentially associated with cervical neoplasia. J Gen Virol2000;8lPt12:2959-68 12. von Knebel Doeberitz M New molecular tools for efficient screening of cervical cancer. Dis Markers 2001: 17(3): 123-8 13. Boyle P, et al. Update on cancer control in women. Int J Gynaecol 0 bstet2000;70(2):263-303 14. Daemen T, et, al. Immunization strategy against cervical cancer involving an alphavirus vector expressing high levels of a stable fusion protein of human papillomavirus 16 E6 and E7. Gene Ther 2002;9(2):85-9
⎯ 3-4⎯ 9. Daemen T, et, al.Immunization strategy against cervical cancer involving an alphavirus vector expressing high levels of a stable fusion protein of human papillomavirus 16 E6 and E7. Gene Ther 2002;9(2):85-94 10.Natale C, Computer-assisted analysis of molecular mimicry between human papillomavirus 16 E7 oncoprotein and human protein sequences. Immunol Cell Biol 2000;78:580-5 11.Villa LL,et al. Molecular variants of human papillomavirus types 16 and 18 preferentially associated with cervical neoplasia. J Gen Virol 2000;81 Pt 12:2959-68 12. von Knebel Doeberitz M.New molecular tools for efficient screening of cervical cancer. Dis Markers 2001;17(3):123-8 13. Boyle P,et al. Update on cancer control in women. Int J Gynaecol Obstet 2000;70(2):263-303 14. Daemen T, et, al.Immunization strategy against cervical cancer involving an alphavirus vector expressing high levels of a stable fusion protein of human papillomavirus 16 E6 and E7. Gene Ther 2002;9(2):85-94
研究方案 1.研究目标,研究内容拟解决的关键问题 研究目标 1)通过研究HPV感染与宫颈癌发生的内在关系和分子生物学基础,阐明肿瘤发生学中作 为重要外源促发因素的病毒致癌机理。 2)从DNA、RNA和蛋白三个层次全面探索宫颈癌发病机制,特别以病毒致癌蛋白的结构 定格和功能研究作为切入点,逆向求源解译病毒癌基因 3)确定病毒蛋白在宿主细胞的表达方式、信号传导调节过程、易感频度和强度的度量标 准 4)提出针对病毒感染致癌的“治疗窗”,建立终止HPV持续感染状态、保护妇女免受宫颈 癌侵扰的策略及有效方法 研究内容 1)从整体水平,筛査宫颈癌高危人群,观察慢性宫颈病变与HV易感状态的时空窗,确 定HPV感染时机、频度、强度的度量关系, 2)从细胞水平,分离建立宫颈正常细胞、易感细胞及宫颈癌细胞株,在体外培养过程对 比观察细胞生物学、细胞形态学的特征 3)从分子水平,采用双向验证法探索宫颈癌发病的分子生物学原理,一方面运用正向追 综手段,即基因芯片差异显示筛出目的基因,进而追综相应蛋白在致病过程中的功能 演变:另一方面采用逆向求源方法,即二维蛋白显示和蛋白芯片确定致病蛋白,反向 逆源找出致病基因,研究要点包括 (1)HPⅤ相关致癌基因的筛查和确定 (2)病毒致癌蛋白功能结构的鉴定 (3)外源病毒转导致癌蛋白产物在宿主细胞的表达方式、信号传导调节过程、易感频 度和强度的度量标准 (4)调控网络相关活性因子的变化。 4-1
三 、 研 究 方 案 ⎯ 4-1⎯ 1. 研究目标，研究内容拟解决的关键问题 研 究 目 标 1) 通过研究HPV感染与宫颈癌发生的内在关系和分子生物学基础, 阐明肿瘤发生学中作 为重要外源促发因素的病毒致癌机理。 2) 从DNA、RNA和蛋白三个层次全面探索宫颈癌发病机制，特别以病毒致癌蛋白的结构 定格和功能研究作为切入点，逆向求源解译病毒癌基因。 3) 确定病毒蛋白在宿主细胞的表达方式、信号传导调节过程、易感频度和强度的度量标 准。 4) 提出针对病毒感染致癌的 “治疗窗”，建立终止HPV持续感染状态、保护妇女免受宫颈 癌侵扰的策略及有效方法。 研 究 内 容 1) 从整体水平，筛查宫颈癌高危人群，观察慢性宫颈病变与HPV易感状态的时空窗，确 定HPV感染时机、频度、强度的度量关系。 2) 从细胞水平，分离建立宫颈正常细胞、易感细胞及宫颈癌细胞株,在体外培养过程对 比观察细胞生物学、细胞形态学的特征。 3) 从分子水平，采用双向验证法探索宫颈癌发病的分子生物学原理，一方面运用正向追 综手段，即基因芯片差异显示筛出目的基因，进而追综相应蛋白在致病过程中的功能 演变；另一方面采用逆向求源方法，即二维蛋白显示和蛋白芯片确定致病蛋白，反向 逆源找出致病基因，研究要点包括: (1) HPV相关致癌基因的筛查和确定； (2) 病毒致癌蛋白功能结构的鉴定； (3) 外源病毒转导致癌蛋白产物在宿主细胞的表达方式、信号传导调节过程、易感频 度和强度的度量标准； (4) 调控网络相关活性因子的变化
拟解决的关键问题: 1.硏究HPⅤ感染诱发宫颈癌的分子学基础,精确分析病毒致癌蛋白功能结构,运用双 向验证法特别是逆向求源手段准确筛查病毒癌基因DNA片段。 2.探索HPⅤ在宿主细胞的整合方式,细胞内信息或效应因子作用的病理性累积强化效 3.明确病毒DNA不同开放编码的过度表达或缺失对影响病毒复制、激活宿主细胞癌基 因、维持恶性表型的关键所在 4.探讨HPⅤ病毒蛋白在肿瘤恶变进程中与p53、Rb相互结合过程及对细胞生长负调节 功能的影响 5.阐明端粒酶激活及调控与高危型HV感染的相互关系,p53和Rb对端粒酶活性的调节 作用机制 6.以全新微电子蛋白分析手段确定致癌基本元素以及致癌的根本规律,明确病毒诱促 发癌变的触发点,进一步找寻超早期阻断HPV诱发宫颈癌的“时间窗
⎯ 4-2 ⎯ 拟 解 决 的 关 键 问 题 ： 1. 研究HPV感染诱发宫颈癌的分子学基础，精确分 析病毒致癌蛋白功能结构，运用双 向验证法特别是逆向求源手段准确筛查病毒癌基因DNA片段。 2. 探索HPV在宿主细胞的整合方式，细胞内信息或效应因子作用的病理性累积强化效 应。 3. 明确病毒DNA不同开放编码的过度表达或缺失对影响病毒复制、激活宿主细胞癌基 因、维持恶性表型的关键所在。 4. 探讨HPV病毒蛋白在肿瘤恶变进程中与p53、Rb相互结合过程及对细胞生长负调节 功能的影响。 5. 阐明端粒酶激活及调控与高危型HPV感染的相互关系，p53和Rb对端粒酶活性的调节 作用机制。 6. 以全新微电子蛋白分析手段确定致癌基本元素以及致癌的根本规律，明确病毒诱促 发癌变的触发点，进一步找寻超早期阻断HPV诱发宫颈癌的“时间窗