原理:利用羰基可与吉拉尔试剂生成溶于水的腙,而将含羰基的甾体皂苷元与不含 羰基的皂苷元分离,而后在适宜条件下分解腙,使恢复到原皂苷元形式。 操作:(流程图) 混合皂苷元(溶于乙醇) 加入乙酸使成10%浓度,加吉拉尔试剂,室温放置或水浴加热 反应液 加水稀释,乙醚萃取 水层 乙醚层(非羰基皂苷元) 加HC1,加热,乙醚萃取 乙醚(含羰基皂苷元) 特点:常用的试剂为 Girard T、 Girard p,是一类含有季铵盐型氨基乙酰肼类 H3C-N'CH2C ONHNH2 N'CH2CONHNH2 Girard T Girard P 3.色谱分离法 色谱分离法是在上述粗分离的基础上进一步分离常用的方法。 皂苷及皂苷元的色谱分离法见表 适用范围 吸附剂:硅胶、氧化铝。 吸附色法系统:混合低极性有机溶剂 皂苷 固定相:水、稀酸水溶液等。 分配色谱法流动相:氯仿-甲醇-水(不同比例) 皂苷 高效液相色谱法多用反相色谱法,流动相为乙腈一水或甲皂苷 也可将极性大的皂 苷进行衍生化物, 用正相色谱分离 液滴逆流色谱法氯仿-甲醇-正丁醇-水下层为固定相,上 层为流动相。 皂苷 大孔树脂法 反相色谱:样品溶于水,先用水洗去糖极性较大的尚需配合其它层析 等,再用醇洗脱。 甾体皂苷原理：利用羰基可与吉拉尔试剂生成溶于水的腙，而将含羰基的甾体皂苷元与不含 羰基的皂苷元分离，而后在适宜条件下分解腙，使恢复到原皂苷元形式。 操作：（流程图） 混合皂苷元（溶于乙醇） │加入乙酸使成 10％浓度，加吉拉尔试剂，室温放置或水浴加热 ↓ 反应液 │加水稀释，乙醚萃取 ┌──────┴──────┐ ↓ ↓ 水层 乙醚层（非羰基皂苷元） │加 HCl，加热，乙醚萃取 ↓ 乙醚（含羰基皂苷元） 特点：常用的试剂为 Girard T、Girard P，是一类含有季铵盐型氨基乙酰肼类。 H3C N +CH2CONHNH2 H3C H3C N +CH2CONHNH2 Girard T Girard P 3. 色谱分离法 色谱分离法是在上述粗分离的基础上进一步分离常用的方法。 皂苷及皂苷元的色谱分离法见表： 方 法 特 点 适用范围 备 注 吸附色谱法 吸附剂：硅胶、氧化铝。 系统：混合低极性有机溶剂。 皂苷元 分配色谱法 固定相：水、稀酸水溶液等。 流动相：氯仿-甲醇-水（不同比例） 等。 皂苷 高效液相色谱法 多用反相色谱法，流动相为乙腈-水或甲 醇-水系统。 皂苷 也可将极性大的皂 苷进行衍生化物， 用正相色谱分离。 液滴逆流色谱法 氯仿-甲醇-正丁醇-水下层为固定相，上 层为流动相。 皂苷 大孔树脂法 反相色谱：样品溶于水，先用水洗去糖 等，再用醇洗脱。 极性较大的 甾体皂苷 尚需配合其它层析 法