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Vol.29 Suppl.2 邱丽娜等：一株硫氧化菌的筛选与表征 .213. 方法同) 3.2纯化的硫氧化菌的形态特征 2.2表征 固体培养基中培养得到1~3mm直径大小的 (1)菌的形态特征 淡黄色菌落，见图1. 观察平板中菌落的大小、形状，并分别采用简单 染色法和革兰氏染色法山在光学显微镜下观察菌 体的形态 (2)液体培养基pH值测定 用pH计测含污泥的液体选择培养基I的pH 值，每天（间隔24h)测一次，并对其数据进行记录. 同时做一组不加入污泥的液体培养基1的对照. 将刚接入单菌落的液体培养基1的pH值调为 6.0,每天（间隔24h)测一次pH值，同时做一组不 加入菌的对照 图1硫氧化菌菌落图片 (3)离子色谱测定 镜检观察发现，单个菌体呈短杆状，革兰氏染色 硫酸根标准曲线测定：配制K2S04溶液，浓度 呈阴性，菌体着色均一，挑一环菌加入清水中，在40 分别为9.6,19.2,28.8,38.4,48gmL-1.根据离 倍光学显微镜下观察，菌有很强的运动态，从菌的运 子色谱测量的数值列出不同浓度的硫酸根峰面积， 动方式看，该菌应该是端生鞭毛·染色图片见图2. 硫酸根的保留时间一般在12.9min左右，绘制出硫 酸根标准曲线. 加入纯化硫氧化菌的液体培养基1中硫酸根离 子含量测定：取1mL含硫氧化菌的液体培养基1稀 释100倍，先用定性滤纸过滤，再过0.45m微孔滤 膜，进样23mL入离子色谱仪进行测试，每天测硫 酸根离子含量， (4)Fes培养基表征 配制50mL液体培养基2，加100L纯化硫氧 图2硫氧化菌简单染色镜检图(×1000倍) 化菌液（挑取固体培养基上较纯的菌落接入1mL无 菌水中，混匀)，做一组加入100L无菌水对照.30 3.3硫氧化菌生长对液体培养基pH值的影响 ℃振荡培养，转速200rmin1,培养2周以上.观察 A号瓶为不加污泥的对照样，B号瓶为加入污 Fes颜色变化 泥的液体培养基，在培养的第4天可以看到B瓶的 3结果与讨论 pH值有较明显的下降，从一开始的pH=4左右下 降到pH=1,证明培养基酸度明显增加，硫粉被氧化 3.1硫氧化菌的筛选 生成硫酸，而对照样A瓶的pH值变化不大，可见污 培养1周后，液体培养基1（硫粉培养基）中漂 泥中存在硫氧化菌能将硫粉氧化，硫粉本身在自然 浮在液面上的硫粉沉到锥形瓶底部，逐渐被消耗，接 条件下氧化不明显，见图3. 种了污泥的硫粉培养基开始混浊，在载玻片上滴一 滴混浊液，盖上盖玻片在显微镜下观察，发现有短杆 状游动性强的菌， 3 液体培养基3（基础培养基）中长出了白色球状 霉菌，液体变粘稠，有絮状菌丝，取液体镜检，除了细 士合甜楚 长的霉菌菌丝外没有发现短杆状游动菌.初步判断 由于液体培养基3（基础培养基）营养成分比较丰 3 4 培养天数d 富，较适合霉菌的生长，霉菌比硫氧化菌生长快，故 该培养基不适于筛选硫氧化菌，而液体培养基1不 图3污泥中菌对培养pH值变化曲线 含有机碳源，霉菌不易生长，适于筛选硫氧化菌，方法同）． 2∙2 表征 （1） 菌的形态特征 观察平板中菌落的大小、形状并分别采用简单 染色法和革兰氏染色法［11］在光学显微镜下观察菌 体的形态． （2） 液体培养基 pH 值测定 用 pH 计测含污泥的液体选择培养基1的 pH 值每天（间隔24h）测一次并对其数据进行记录． 同时做一组不加入污泥的液体培养基1的对照． 将刚接入单菌落的液体培养基1的 pH 值调为 6∙0每天（间隔24h）测一次 pH 值同时做一组不 加入菌的对照． （3） 离子色谱测定 硫酸根标准曲线测定：配制 K2SO4 溶液浓度 分别为9∙619∙228∙838∙448μg·mL －1．根据离 子色谱测量的数值列出不同浓度的硫酸根峰面积． 硫酸根的保留时间一般在12∙9min 左右绘制出硫 酸根标准曲线． 加入纯化硫氧化菌的液体培养基1中硫酸根离 子含量测定：取1mL 含硫氧化菌的液体培养基1稀 释100倍先用定性滤纸过滤再过0∙45μm 微孔滤 膜进样2～3mL 入离子色谱仪进行测试每天测硫 酸根离子含量． （4） FeS 培养基表征 配制50mL 液体培养基2加100μL 纯化硫氧 化菌液（挑取固体培养基上较纯的菌落接入1mL 无 菌水中混匀）做一组加入100μL 无菌水对照．30 ℃振荡培养转速200r·min －1培养2周以上．观察 FeS 颜色变化． 3 结果与讨论 3∙1 硫氧化菌的筛选 培养1周后液体培养基1（硫粉培养基）中漂 浮在液面上的硫粉沉到锥形瓶底部逐渐被消耗接 种了污泥的硫粉培养基开始混浊．在载玻片上滴一 滴混浊液盖上盖玻片在显微镜下观察发现有短杆 状游动性强的菌． 液体培养基3（基础培养基）中长出了白色球状 霉菌液体变粘稠有絮状菌丝取液体镜检除了细 长的霉菌菌丝外没有发现短杆状游动菌．初步判断 由于液体培养基3（基础培养基）营养成分比较丰 富较适合霉菌的生长霉菌比硫氧化菌生长快故 该培养基不适于筛选硫氧化菌而液体培养基1不 含有机碳源霉菌不易生长适于筛选硫氧化菌． 3∙2 纯化的硫氧化菌的形态特征 固体培养基中培养得到1～3mm 直径大小的 淡黄色菌落见图1． 图1 硫氧化菌菌落图片 镜检观察发现单个菌体呈短杆状革兰氏染色 呈阴性菌体着色均一．挑一环菌加入清水中在40 倍光学显微镜下观察菌有很强的运动态从菌的运 动方式看该菌应该是端生鞭毛．染色图片见图2． 图2 硫氧化菌简单染色镜检图（×1000倍） 3∙3 硫氧化菌生长对液体培养基 pH 值的影响 A 号瓶为不加污泥的对照样B 号瓶为加入污 泥的液体培养基在培养的第4天可以看到 B 瓶的 pH 值有较明显的下降从一开始的 pH＝4左右下 降到 pH＝1证明培养基酸度明显增加硫粉被氧化 生成硫酸而对照样 A 瓶的 pH 值变化不大可见污 泥中存在硫氧化菌能将硫粉氧化．硫粉本身在自然 条件下氧化不明显见图3． 图3 污泥中菌对培养 pH 值变化曲线 Vol．29Suppl．2 邱丽娜等： 一株硫氧化菌的筛选与表征 ·213·