D0I:10.13374/1.issnl00103.2007.s2.054 第29卷增刊2 北京科技大学学报 Vol.29 Suppl.2 2007年12月 Journal of University of Science and Technology Beijing Dee.2007 一株硫氧化菌的筛选与表征 邱丽娜李圆原弓爱君闫海 王小宁 北京科技大学应用科学学院生物科学与技术系，北京100083 摘要利用液体选择培养基，固体选择培养基从污泥中筛选出一种可以氧化低价硫的菌株，该菌为革兰氏阴性菌，在光学 显微镜下有较强的运动能力·对含有该菌的培养基进行pH值检测，在培养的第3天发现pH值有显著下降，继续培养一周左 右，pH值下降到0.6：用离子色谱进行检测，培养5天，液体培养基中硫酸根含量从249.2mgL-1增加到3679.7mgL-1;将 菌液加入FeS培养基中，培养2周后，FS被氧化，培养基颜色变浅， 关键词硫氧化菌；菌种筛选：表征 分类号Q939.1 硫氧化菌(Sulfur-Oxidizing Bacteria简称 0.4g.KH2PO4 4g MgSO4.7H2O 0.5g.CaCl2 0.25 SOB),是能氧化元素硫、硫化物、硫代硫酸盐和亚硫 gFes047H200.01g,蒸馏水1L,0.1MPa高压蒸 酸盐等产生代谢产物硫酸的一类菌，这类菌常见的 汽灭菌，再加入间歇灭菌的10g硫粉 有硫杆菌属(Thiobacillus)中的排硫硫杆菌 液体选择培养基2(Fes培养基)：(NH4)S044 (Thiobacillus thloparus)、氧化亚铁硫杆菌 g.KH2PO4 4g.MgS04.7H20 0.5 g.CaCl2 0.25 g. （Thiobacillus ferrooxidans)、氧化硫硫杆菌 FeS04-7H200.02g,FeS10g,蒸馏水1L,0.1MPa (Thiobacillus thioxidans)山.硫杆菌广泛分布在 高压蒸汽灭菌， 含无机硫和铁的陆地和水域中，如污水、河口、湖沼 液体培养基3（基础培养基）：葡萄糖5g,NHCl 的淤泥中，作为浸矿的主要菌种，氧化亚铁硫杆菌 0.4g,Mgs04·7H200.5g,CaC20.25g,KH2P043 和氧化硫硫杆菌最初应用于低品位铜矿、铀矿的生 gFeS04·7H00.02g,酵母粉2g,蒸馏水1L,pH 产，后来发展应用于金、锌、钴等多种金属的浸 值23,0.1MPa高压蒸汽灭菌， 出].由于硫氧化菌能氧化低价硫的特性，也常 固体选择培养基：(NH4)2S044g,KH2P044g 用此类菌作为生物浸出法(Bioleaching)的菌种去除 Mgs04·7Hz00.5 g.CaCla20.25gFes04·7Hz0 污泥中的重金属门.由于该微生物在工业和环保上 0.01g,Na2S2035H2010g,琼脂粉20g,蒸馏水1 具有重要价值，国内目前在生物治金，处理污泥中的 L,0.1MPa高压蒸汽灭菌， 重金属，煤炭脱硫，处理刻蚀以铜及铜合金为材料的 基片等方面都有不同程度的应用，现在的研究目标 2实验步骤 主要是采用快速、高效、新的育种方法对现有菌株进 2.1单菌落筛选 行改良，以期望获得多株具有繁殖速率快，氧化能力 吸5mL污泥于100mL已灭菌的液体选择培养 强，适应性强，特别是对多种重金属离子、表面活性 剂、氯离子的耐受性强的优良工业用菌[810]. 基1中，30℃振荡培养，转速200rmin,培养1周 以上，直至pH降到2以下，随后吸取100L培养 1材料 液，滴加于固体选择培养基的平板上，涂布，30℃恒 温培养箱中培养1周以上.7~10天左右平板中长 1.1供试污泥 北京海淀区清河南镇河中浅滩污泥 出1~3mm直径大小的淡黄色菌落·再用接种环 1.2培养基 挑取单菌落，接种于100mL液体选择培养基1中， 液体选择培养基1（硫粉培养基）：(NH4)2S04 振荡培养。如此固液交替培养3次以上，直到涂布 得到较纯的单菌落 收稿日期：2007-10-23 同时进行5mL污泥加入100mL液体培养基3 基金项目：北京市教有委员会共建项目建设计划 (基础培养基)的筛选，30℃振荡培养，转速200r· 作者简介：邱丽娜(1979一)，女，讲师，硕士 min1,培养1周以上（与液体选择培养基1的筛选
一株硫氧化菌的筛选与表征 邱丽娜 李圆原 弓爱君 闫 海 王小宁 北京科技大学应用科学学院生物科学与技术系北京100083 摘 要 利用液体选择培养基、固体选择培养基从污泥中筛选出一种可以氧化低价硫的菌株该菌为革兰氏阴性菌在光学 显微镜下有较强的运动能力．对含有该菌的培养基进行 pH 值检测在培养的第3天发现 pH 值有显著下降继续培养一周左 右pH 值下降到0∙6；用离子色谱进行检测培养5天液体培养基中硫酸根含量从249∙2mg·L －1增加到3679∙7mg·L －1；将 菌液加入 FeS 培养基中培养2周后FeS 被氧化培养基颜色变浅． 关键词 硫氧化菌；菌种筛选；表征 分类号 Q939∙1 收稿日期：2007-10-23 基金项目：北京市教育委员会共建项目建设计划 作者简介：邱丽娜（1979－）女讲师硕士 硫 氧 化 菌 （ Sulfur-Oxidizing Bacteria 简 称 SOB）是能氧化元素硫、硫化物、硫代硫酸盐和亚硫 酸盐等产生代谢产物硫酸的一类菌．这类菌常见的 有 硫 杆 菌 属 （ Thiobacillus ） 中 的 排 硫 硫 杆 菌 （ Thiobacillus thloparus ）、氧 化 亚 铁 硫 杆 菌 （ Thiobacillus ferrooxidans ）、氧 化 硫 硫 杆 菌 （ Thiobacillus thiooxidans） ［1］．硫杆菌广泛分布在 含无机硫和铁的陆地和水域中如污水、河口、湖沼 的淤泥中．作为浸矿的主要菌种氧化亚铁硫杆菌 和氧化硫硫杆菌最初应用于低品位铜矿、铀矿的生 产后来发展应用于金、锌、钴等多种金属的浸 出［2－6］．由于硫氧化菌能氧化低价硫的特性也常 用此类菌作为生物浸出法（Bioleaching）的菌种去除 污泥中的重金属［7］．由于该微生物在工业和环保上 具有重要价值国内目前在生物冶金处理污泥中的 重金属煤炭脱硫处理刻蚀以铜及铜合金为材料的 基片等方面都有不同程度的应用现在的研究目标 主要是采用快速、高效、新的育种方法对现有菌株进 行改良以期望获得多株具有繁殖速率快氧化能力 强适应性强特别是对多种重金属离子、表面活性 剂、氯离子的耐受性强的优良工业用菌［8－10］． 1 材料 1∙1 供试污泥 北京海淀区清河南镇河中浅滩污泥 1∙2 培养基 液体选择培养基1（硫粉培养基）：（NH4）2SO4 0∙4gKH2PO44gMgSO4·7H2O 0∙5gCaCl20∙25 gFeSO4·7H2O0∙01g蒸馏水1L0∙1MPa 高压蒸 汽灭菌再加入间歇灭菌的10g 硫粉． 液体选择培养基2（FeS 培养基）：（NH4）2SO44 gKH2PO44gMgSO4·7H2O 0∙5gCaCl20∙25g FeSO4·7H2O0∙02gFeS 10g蒸馏水1L0∙1MPa 高压蒸汽灭菌． 液体培养基3（基础培养基）：葡萄糖5gNH4Cl 0∙4gMgSO4·7H2O 0∙5gCaCl20∙25gKH2PO43 gFeSO4·7H2O 0∙02g酵母粉2g蒸馏水1LpH 值2～30∙1MPa 高压蒸汽灭菌． 固体选择培养基：（NH4）2SO44gKH2PO44g MgSO4·7H2O 0∙5gCaCl20∙25gFeSO4·7H2O 0∙01gNa2S2O3·5H2O 10g琼脂粉20g蒸馏水1 L0∙1MPa 高压蒸汽灭菌． 2 实验步骤 2∙1 单菌落筛选 吸5mL 污泥于100mL 已灭菌的液体选择培养 基1中30℃振荡培养转速200r·min －1培养1周 以上直至 pH 降到2以下∙随后吸取100μL 培养 液滴加于固体选择培养基的平板上涂布30℃恒 温培养箱中培养1周以上．7～10天左右平板中长 出1～3mm 直径大小的淡黄色菌落∙再用接种环 挑取单菌落接种于100mL 液体选择培养基1中 振荡培养．如此固液交替培养3次以上直到涂布 得到较纯的单菌落． 同时进行5mL 污泥加入100mL 液体培养基3 （基础培养基）的筛选30℃振荡培养转速200r· min －1培养1周以上（与液体选择培养基1的筛选 第29卷 增刊2 2007年 12月 北 京 科 技 大 学 学 报 Journal of University of Science and Technology Beijing Vol．29Suppl．2 Dec．2007 DOI:10．13374／j．issn1001－053x．2007．s2．054
Vol.29 Suppl.2 邱丽娜等：一株硫氧化菌的筛选与表征 .213. 方法同) 3.2纯化的硫氧化菌的形态特征 2.2表征 固体培养基中培养得到1~3mm直径大小的 (1)菌的形态特征 淡黄色菌落，见图1. 观察平板中菌落的大小、形状，并分别采用简单 染色法和革兰氏染色法山在光学显微镜下观察菌 体的形态 (2)液体培养基pH值测定 用pH计测含污泥的液体选择培养基I的pH 值，每天（间隔24h)测一次，并对其数据进行记录. 同时做一组不加入污泥的液体培养基1的对照. 将刚接入单菌落的液体培养基1的pH值调为 6.0,每天（间隔24h)测一次pH值，同时做一组不 加入菌的对照 图1硫氧化菌菌落图片 (3)离子色谱测定 镜检观察发现，单个菌体呈短杆状，革兰氏染色 硫酸根标准曲线测定：配制K2S04溶液，浓度 呈阴性，菌体着色均一，挑一环菌加入清水中，在40 分别为9.6,19.2,28.8,38.4,48gmL-1.根据离 倍光学显微镜下观察，菌有很强的运动态，从菌的运 子色谱测量的数值列出不同浓度的硫酸根峰面积， 动方式看，该菌应该是端生鞭毛·染色图片见图2. 硫酸根的保留时间一般在12.9min左右，绘制出硫 酸根标准曲线. 加入纯化硫氧化菌的液体培养基1中硫酸根离 子含量测定：取1mL含硫氧化菌的液体培养基1稀 释100倍，先用定性滤纸过滤，再过0.45m微孔滤 膜，进样23mL入离子色谱仪进行测试，每天测硫 酸根离子含量， (4)Fes培养基表征 配制50mL液体培养基2，加100L纯化硫氧 图2硫氧化菌简单染色镜检图(×1000倍) 化菌液（挑取固体培养基上较纯的菌落接入1mL无 菌水中，混匀)，做一组加入100L无菌水对照.30 3.3硫氧化菌生长对液体培养基pH值的影响 ℃振荡培养，转速200rmin1,培养2周以上.观察 A号瓶为不加污泥的对照样，B号瓶为加入污 Fes颜色变化 泥的液体培养基，在培养的第4天可以看到B瓶的 3结果与讨论 pH值有较明显的下降，从一开始的pH=4左右下 降到pH=1,证明培养基酸度明显增加，硫粉被氧化 3.1硫氧化菌的筛选 生成硫酸，而对照样A瓶的pH值变化不大，可见污 培养1周后，液体培养基1（硫粉培养基）中漂 泥中存在硫氧化菌能将硫粉氧化，硫粉本身在自然 浮在液面上的硫粉沉到锥形瓶底部，逐渐被消耗，接 条件下氧化不明显，见图3. 种了污泥的硫粉培养基开始混浊，在载玻片上滴一 滴混浊液，盖上盖玻片在显微镜下观察，发现有短杆 状游动性强的菌， 3 液体培养基3（基础培养基）中长出了白色球状 霉菌，液体变粘稠，有絮状菌丝，取液体镜检，除了细 士合甜楚 长的霉菌菌丝外没有发现短杆状游动菌.初步判断 由于液体培养基3（基础培养基）营养成分比较丰 3 4 培养天数d 富，较适合霉菌的生长，霉菌比硫氧化菌生长快，故 该培养基不适于筛选硫氧化菌，而液体培养基1不 图3污泥中菌对培养pH值变化曲线 含有机碳源，霉菌不易生长，适于筛选硫氧化菌
方法同）． 2∙2 表征 （1） 菌的形态特征 观察平板中菌落的大小、形状并分别采用简单 染色法和革兰氏染色法［11］在光学显微镜下观察菌 体的形态． （2） 液体培养基 pH 值测定 用 pH 计测含污泥的液体选择培养基1的 pH 值每天（间隔24h）测一次并对其数据进行记录． 同时做一组不加入污泥的液体培养基1的对照． 将刚接入单菌落的液体培养基1的 pH 值调为 6∙0每天（间隔24h）测一次 pH 值同时做一组不 加入菌的对照． （3） 离子色谱测定 硫酸根标准曲线测定：配制 K2SO4 溶液浓度 分别为9∙619∙228∙838∙448μg·mL －1．根据离 子色谱测量的数值列出不同浓度的硫酸根峰面积． 硫酸根的保留时间一般在12∙9min 左右绘制出硫 酸根标准曲线． 加入纯化硫氧化菌的液体培养基1中硫酸根离 子含量测定：取1mL 含硫氧化菌的液体培养基1稀 释100倍先用定性滤纸过滤再过0∙45μm 微孔滤 膜进样2～3mL 入离子色谱仪进行测试每天测硫 酸根离子含量． （4） FeS 培养基表征 配制50mL 液体培养基2加100μL 纯化硫氧 化菌液（挑取固体培养基上较纯的菌落接入1mL 无 菌水中混匀）做一组加入100μL 无菌水对照．30 ℃振荡培养转速200r·min －1培养2周以上．观察 FeS 颜色变化． 3 结果与讨论 3∙1 硫氧化菌的筛选 培养1周后液体培养基1（硫粉培养基）中漂 浮在液面上的硫粉沉到锥形瓶底部逐渐被消耗接 种了污泥的硫粉培养基开始混浊．在载玻片上滴一 滴混浊液盖上盖玻片在显微镜下观察发现有短杆 状游动性强的菌． 液体培养基3（基础培养基）中长出了白色球状 霉菌液体变粘稠有絮状菌丝取液体镜检除了细 长的霉菌菌丝外没有发现短杆状游动菌．初步判断 由于液体培养基3（基础培养基）营养成分比较丰 富较适合霉菌的生长霉菌比硫氧化菌生长快故 该培养基不适于筛选硫氧化菌而液体培养基1不 含有机碳源霉菌不易生长适于筛选硫氧化菌． 3∙2 纯化的硫氧化菌的形态特征 固体培养基中培养得到1～3mm 直径大小的 淡黄色菌落见图1． 图1 硫氧化菌菌落图片 镜检观察发现单个菌体呈短杆状革兰氏染色 呈阴性菌体着色均一．挑一环菌加入清水中在40 倍光学显微镜下观察菌有很强的运动态从菌的运 动方式看该菌应该是端生鞭毛．染色图片见图2． 图2 硫氧化菌简单染色镜检图（×1000倍） 3∙3 硫氧化菌生长对液体培养基 pH 值的影响 A 号瓶为不加污泥的对照样B 号瓶为加入污 泥的液体培养基在培养的第4天可以看到 B 瓶的 pH 值有较明显的下降从一开始的 pH＝4左右下 降到 pH＝1证明培养基酸度明显增加硫粉被氧化 生成硫酸而对照样 A 瓶的 pH 值变化不大可见污 泥中存在硫氧化菌能将硫粉氧化．硫粉本身在自然 条件下氧化不明显见图3． 图3 污泥中菌对培养 pH 值变化曲线 Vol．29Suppl．2 邱丽娜等： 一株硫氧化菌的筛选与表征 ·213·
.214 北京科技大学学报 2007年增刊2 接入单菌落的液体培养基1的pH值变化情况 加.同时将pH计在液体培养基中测得的数值也放 见图4，培养基的pH能在第3天下降到1左右，纯 入图6中进行对比，培养基的起始pH值用1mol· 化后硫氧化菌氧化硫的能力增强了，继续对其进行 L1NaOH调到6，从第3天开始，pH值下降到1左 培养，pH值持续下降，并在培养的第7天趋向稳定， 右，而硫酸根含量的增加也表明硫氧化菌正进入对 最低pH值可以下降到0.6 数生长期.由于硫的疏水性，培养的第1天，刚加入 硫粉时，液体培养基中硫均悬浮于液面，下层液体澄 清，从第3天开始，接种了菌液的液体培养基开始混 士手甜器装 浊，pH降至1左右，从测定结果看，硫开始大量被氧 玉3 化成硫酸，第5天培养基混浊程度增加了. 起始pH调6 2 到第5天培养结束的时候，硫酸根的峰面积达 到3657.60 mV'min,用公式y=99.40x,算出硫酸 6 培养时间/d 根的含量为36.797gmL-(稀释100倍)，原液的 硫酸根含量达到3679.7内mL-1,即3679.7mg· 图4培养硫氧化菌对培基pH值变化曲线 L1,起始硫酸根含量为249.2mgL1. 3.4硫氧化菌的生长对液体培养基中硫酸根离子 3.5硫氧化菌的生长对Fes培养基的影响 的影响 通过在1,2号瓶Fs培养基中分别加入无菌 根据离子色谱测量的数值列出不同浓度的硫酸 水和菌液，经过30℃振荡培养2周以上，发现1瓶 根峰面积，硫酸根的保留时间一般在12.9min左 中的深褐色FS培养基没有太大变化，而加菌液的 右，绘制出硫酸根标准曲线见图5. 2号瓶培养基颜色有一定程度的变浅，推测这是由 6000r 于硫氧化菌将部分Fes固体氧化的缘故，Fes本身 5000 y99.4x 是不溶于水的深褐色固体，如果其受到菌的氧化，生 2=0.995 4000 成的硫酸根和金属离子会溶在液体培养基中，造成 3000 Fs固体含量变少，培养基颜色变浅，而加入无菌 2000 ◆峰面积 水的1号瓶颜色无太大变化的原因，可能是由于没 1000 ·线性（峰面积） 有菌的存在Fs很难在自然条件下氧化，用pH试 10 2030405060 纸测2瓶培养基的pH值，基本上都在7~8左右， 硫酸根浓度(g~mL-) 培养基的pH值并没有明显变化. 图5硫酸根含量标准曲线 4结论 测含硫氧化菌的液体培养基1的硫酸根含量， 用固液选择培养基交替培养的方法，从污泥中 发现随着时间的增加，硫酸根含量大大提高，见图 分离纯化出一种嗜酸硫氧化菌株，用简单染色和革 6. 兰氏染色等方法，在光学显微镜下对筛选出的硫氧 4000 化菌进行镜检，观察到该菌呈短杆状，运动能力较 5.81 一◆一硫酸根浓度 强，从运动方式看应该是端生鞭毛，革兰氏染色为阴 3000 535 一pH值 性.在培养的过程中，分别用pH计对其培养基pH 出2000 值进行检测，发现在培养的第3天pH值由原来的6 下降到1左右，继续培养，pH值最终可以达到0.6 1000 129 附近，证明该菌能使液体培养基变酸。硫氧化菌对 .61 0.81 硫粉进行氧化过程中，硫酸根含量呈对数上升趋势， 3 培养时间d 培养5天，硫酸根含量从249.2增加到3679.7mg· L一1，初步推断该菌能氧化硫生成硫酸.将筛选出来 图6硫氧化菌对pH值和硫酸根的影响 的硫氧化菌在FeS培养基中培养，固体不溶物Fes 由图6可得：随时间的推移，硫酸根含量逐渐增 有一定程度的消耗，证明该菌可以氧化硫化物，有很 加，从离子色谱的峰面积来看，5天的数值呈对数增 好的工业用途
接入单菌落的液体培养基1的 pH 值变化情况 见图4培养基的 pH 能在第3天下降到1左右纯 化后硫氧化菌氧化硫的能力增强了继续对其进行 培养pH 值持续下降并在培养的第7天趋向稳定 最低 pH 值可以下降到0∙6． 图4 培养硫氧化菌对培基 pH 值变化曲线 3∙4 硫氧化菌的生长对液体培养基中硫酸根离子 的影响 根据离子色谱测量的数值列出不同浓度的硫酸 根峰面积硫酸根的保留时间一般在12∙9min 左 右绘制出硫酸根标准曲线见图5． 图5 硫酸根含量标准曲线 测含硫氧化菌的液体培养基1的硫酸根含量 发现随着时间的增加硫酸根含量大大提高见图 6． 图6 硫氧化菌对 pH 值和硫酸根的影响 由图6可得：随时间的推移硫酸根含量逐渐增 加从离子色谱的峰面积来看5天的数值呈对数增 加．同时将 pH 计在液体培养基中测得的数值也放 入图6中进行对比．培养基的起始 pH 值用1mol· L －1 NaOH 调到6从第3天开始pH 值下降到1左 右而硫酸根含量的增加也表明硫氧化菌正进入对 数生长期．由于硫的疏水性培养的第1天刚加入 硫粉时液体培养基中硫均悬浮于液面下层液体澄 清从第3天开始接种了菌液的液体培养基开始混 浊pH 降至1左右从测定结果看硫开始大量被氧 化成硫酸第5天培养基混浊程度增加了． 到第5天培养结束的时候硫酸根的峰面积达 到3657∙60mV·min用公式 y＝99∙40x算出硫酸 根的含量为36∙797μg·mL －1（稀释100倍）原液的 硫酸根含量达到3679∙7μg·mL －1即3679∙7mg· L －1起始硫酸根含量为249∙2mg·L －1． 3∙5 硫氧化菌的生长对 FeS 培养基的影响 通过在12号瓶 FeS 培养基中分别加入无菌 水和菌液经过30℃振荡培养2周以上发现1瓶 中的深褐色 FeS 培养基没有太大变化而加菌液的 2号瓶培养基颜色有一定程度的变浅．推测这是由 于硫氧化菌将部分 FeS 固体氧化的缘故．FeS 本身 是不溶于水的深褐色固体如果其受到菌的氧化生 成的硫酸根和金属离子会溶在液体培养基中造成 FeS 固体含量变少培养基颜色变浅．而加入无菌 水的1号瓶颜色无太大变化的原因可能是由于没 有菌的存在 FeS 很难在自然条件下氧化．用 pH 试 纸测2瓶培养基的 pH 值基本上都在7～8左右 培养基的 pH 值并没有明显变化． 4 结论 用固液选择培养基交替培养的方法从污泥中 分离纯化出一种嗜酸硫氧化菌株用简单染色和革 兰氏染色等方法在光学显微镜下对筛选出的硫氧 化菌进行镜检观察到该菌呈短杆状运动能力较 强从运动方式看应该是端生鞭毛革兰氏染色为阴 性．在培养的过程中分别用 pH 计对其培养基 pH 值进行检测发现在培养的第3天 pH 值由原来的6 下降到1左右继续培养pH 值最终可以达到0∙6 附近证明该菌能使液体培养基变酸．硫氧化菌对 硫粉进行氧化过程中硫酸根含量呈对数上升趋势 培养5天硫酸根含量从249∙2增加到3679∙7mg· L －1初步推断该菌能氧化硫生成硫酸．将筛选出来 的硫氧化菌在 FeS 培养基中培养固体不溶物 FeS 有一定程度的消耗证明该菌可以氧化硫化物有很 好的工业用途． ·214· 北 京 科 技 大 学 学 报 2007年 增刊2
Vol.29 Suppl.2 邱丽娜等：一株硫氧化菌的筛选与表征 215. 参考文献 cal reactions in enhancement of rate of leaching.Chem Eng Sci. 2004.59.5069 [1]周顺贵，王世梅，余素萍，等.污泥中氧化亚铁硫杆菌的分离及 其应用效果.环境科学，2003,24(3)：56 [7]周顺桂，周立祥，王世梅。嗜酸硫氧化菌株的分离及其在污泥 生物脱毒中的应用.环境科学研究，2003.16(5)：41 [2]Kumari A.Natarajan K A.Electrobioleaching of polymetallic o- cean nodules.Hydrometallurgy.2001,62(10):125 [8】周立祥，王艮梅.污水污泥中重金属的细菌淋滤效果研究·环 [3]沈镭，张太平，贾晓珊。利用氧化亚铁硫杆菌和氧化硫硫杆菌 境科学学报，2001,21(4).504 去除污泥中重金属的研究，中山大学学报（自然科学版）， [9]歌冰，郑宇，邸进申.氧化亚铁硫杆菌的生物学特性研究进展 2005,44(2):111 生物技术，2004,14(2)：71 [4]朱南文，蔡春光，吴志超，等.污泥中重金属的生物沥滤及其机 [10]HosseiniT R.Kolahdoozan M.Tabatabaei Y S M.Bioflotation 理分析.上海交通大学学报，2003,37(5)：801 of Sarcheshmeh copper are using Thiobacillus Ferrooxidans bac- [5]Jaworska M,Urbanek A.The influence of oxygen concentration teria.Miner Eng.2005,18(3):371 [11]钱存柔，黄仪秀，微生物实验教程，北京：北京大学出版社， in liquid medium on elemental sulphur oxidation by Thiobacillus 1999 thiooxidans.Bioprocess Eng.1998.18:201 [6]Kodali B.Rao M B.Narasu M L.Pogaku R.Effect of biochemi- Isolation and characterization of a sulfur oxidizing bacterium QIU Lina,LI Yuanyuan,GONG Aijun,YAN Hai,WANG Xiaoning Applied Science School.University of Science and Technology Beijing.Beijing 100083.China ABSTRACI A sulfur-oxidizing bacterial strain was isolated from sew age sludge using liquid selective medium and then purified on solid selective medium.The bacteriam can metabolize sofur or S2O to SOi during growth.The sulfur-oxidizing strain is Gram-negative,and has ability to swim.After three days of cultivation, the results showed that the pH of medium decreased.After one week,the pH of the medium dropped to about 0.6,which suggests sulfur oxidizion is taken place.The concentration of the sulfate was tested by using ion chromatography,and the results showed that the concentration of the sulfate increased from 249.2mgLto3 679.7mgL.The sulfur oxidizing bacterium was then inoculated into the FeS medium,as expected,the FeS was oxidized and the media became lighter in color. KEY WORDS sulfur-oxidizing bacterium:isolation:characterization
参 考 文 献 ［1］ 周顺贵王世梅余素萍等．污泥中氧化亚铁硫杆菌的分离及 其应用效果．环境科学200324（3）：56 ［2］ Kumari ANatarajan K A．Electrobioleaching of polymetallic ocean nodules．Hydrometallurgy200162（10）：125 ［3］ 沈镭张太平贾晓珊．利用氧化亚铁硫杆菌和氧化硫硫杆菌 去除污泥中重金属的研究．中山大学学报（自然科学版） 200544（2）：111 ［4］ 朱南文蔡春光吴志超等．污泥中重金属的生物沥滤及其机 理分析．上海交通大学学报200337（5）：801 ［5］ Jaworska MUrbanek A．The influence of oxygen concentration in liquid medium on elemental sulphur oxidation by Thiobacillus thiooxidans．Bioprocess Eng199818：201 ［6］ Kodali BRao M BNarasu M LPogaku R．Effect of biochemical reactions in enhancement of rate of leaching．Chem Eng Sci 200459：5069 ［7］ 周顺桂周立祥王世梅．嗜酸硫氧化菌株的分离及其在污泥 生物脱毒中的应用．环境科学研究200316（5）：41 ［8］ 周立祥王艮梅．污水污泥中重金属的细菌淋滤效果研究．环 境科学学报200121（4）：504 ［9］ 耿冰郑宇邸进申．氧化亚铁硫杆菌的生物学特性研究进展． 生物技术200414（2）：71 ［10］ Hosseini T RKolahdoozan MTabatabaei Y S M．Bioflotation of Sarcheshmeh copper are using Thiobacillus Ferrooxidans bacteria．Miner Eng200518（3）：371 ［11］ 钱存柔黄仪秀．微生物实验教程．北京：北京大学出版社 1999 Isolation and characterization of a sulfur-oxidizing bacterium QIU L inaLI Y uanyuanGONG A ijunY A N HaiWA NG Xiaoning Applied Science SchoolUniversity of Science and Technology BeijingBeijing100083China ABSTRACT A sulfur-oxidizing bacterial strain was isolated from sewage sludge using liquid selective medium and then purified on solid selective medium．The bacteriam can metabolize sofur or S2O 2－ 3 to SO 2－ 4 during growth．The sulfur-oxidizing strain is Gram-negativeand has ability to swim．After three days of cultivation the results showed that the pH of medium decreased．After one weekthe pH of the medium dropped to about 0∙6which suggests sulfur oxidizion is taken place．The concentration of the sulfate was tested by using ion chromatographyand the results showed that the concentration of the sulfate increased from249∙2mg·L －1 to3 679∙7mg·L －1．The sulfur-oxidizing bacterium was then inoculated into the FeS mediumas expectedthe FeS was oxidized and the media became lighter in color． KEY WORDS sulfur-oxidizing bacterium；isolation；characterization Vol．29Suppl．2 邱丽娜等： 一株硫氧化菌的筛选与表征 ·215·
