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.214 北京科技大学学报 2007年增刊2 接入单菌落的液体培养基1的pH值变化情况 加.同时将pH计在液体培养基中测得的数值也放 见图4，培养基的pH能在第3天下降到1左右，纯 入图6中进行对比，培养基的起始pH值用1mol· 化后硫氧化菌氧化硫的能力增强了，继续对其进行 L1NaOH调到6，从第3天开始，pH值下降到1左 培养，pH值持续下降，并在培养的第7天趋向稳定， 右，而硫酸根含量的增加也表明硫氧化菌正进入对 最低pH值可以下降到0.6 数生长期.由于硫的疏水性，培养的第1天，刚加入 硫粉时，液体培养基中硫均悬浮于液面，下层液体澄 清，从第3天开始，接种了菌液的液体培养基开始混 士手甜器装 浊，pH降至1左右，从测定结果看，硫开始大量被氧 玉3 化成硫酸，第5天培养基混浊程度增加了. 起始pH调6 2 到第5天培养结束的时候，硫酸根的峰面积达 到3657.60 mV'min,用公式y=99.40x,算出硫酸 6 培养时间/d 根的含量为36.797gmL-(稀释100倍)，原液的 硫酸根含量达到3679.7内mL-1,即3679.7mg· 图4培养硫氧化菌对培基pH值变化曲线 L1,起始硫酸根含量为249.2mgL1. 3.4硫氧化菌的生长对液体培养基中硫酸根离子 3.5硫氧化菌的生长对Fes培养基的影响 的影响 通过在1,2号瓶Fs培养基中分别加入无菌 根据离子色谱测量的数值列出不同浓度的硫酸 水和菌液，经过30℃振荡培养2周以上，发现1瓶 根峰面积，硫酸根的保留时间一般在12.9min左 中的深褐色FS培养基没有太大变化，而加菌液的 右，绘制出硫酸根标准曲线见图5. 2号瓶培养基颜色有一定程度的变浅，推测这是由 6000r 于硫氧化菌将部分Fes固体氧化的缘故，Fes本身 5000 y99.4x 是不溶于水的深褐色固体，如果其受到菌的氧化，生 2=0.995 4000 成的硫酸根和金属离子会溶在液体培养基中，造成 3000 Fs固体含量变少，培养基颜色变浅，而加入无菌 2000 ◆峰面积 水的1号瓶颜色无太大变化的原因，可能是由于没 1000 ·线性（峰面积） 有菌的存在Fs很难在自然条件下氧化，用pH试 10 2030405060 纸测2瓶培养基的pH值，基本上都在7~8左右， 硫酸根浓度(g~mL-) 培养基的pH值并没有明显变化. 图5硫酸根含量标准曲线 4结论 测含硫氧化菌的液体培养基1的硫酸根含量， 用固液选择培养基交替培养的方法，从污泥中 发现随着时间的增加，硫酸根含量大大提高，见图 分离纯化出一种嗜酸硫氧化菌株，用简单染色和革 6. 兰氏染色等方法，在光学显微镜下对筛选出的硫氧 4000 化菌进行镜检，观察到该菌呈短杆状，运动能力较 5.81 一◆一硫酸根浓度 强，从运动方式看应该是端生鞭毛，革兰氏染色为阴 3000 535 一pH值 性.在培养的过程中，分别用pH计对其培养基pH 出2000 值进行检测，发现在培养的第3天pH值由原来的6 下降到1左右，继续培养，pH值最终可以达到0.6 1000 129 附近，证明该菌能使液体培养基变酸。硫氧化菌对 .61 0.81 硫粉进行氧化过程中，硫酸根含量呈对数上升趋势， 3 培养时间d 培养5天，硫酸根含量从249.2增加到3679.7mg· L一1，初步推断该菌能氧化硫生成硫酸.将筛选出来 图6硫氧化菌对pH值和硫酸根的影响 的硫氧化菌在FeS培养基中培养，固体不溶物Fes 由图6可得：随时间的推移，硫酸根含量逐渐增 有一定程度的消耗，证明该菌可以氧化硫化物，有很 加，从离子色谱的峰面积来看，5天的数值呈对数增 好的工业用途接入单菌落的液体培养基1的 pH 值变化情况 见图4培养基的 pH 能在第3天下降到1左右纯 化后硫氧化菌氧化硫的能力增强了继续对其进行 培养pH 值持续下降并在培养的第7天趋向稳定 最低 pH 值可以下降到0∙6． 图4 培养硫氧化菌对培基 pH 值变化曲线 3∙4 硫氧化菌的生长对液体培养基中硫酸根离子 的影响 根据离子色谱测量的数值列出不同浓度的硫酸 根峰面积硫酸根的保留时间一般在12∙9min 左 右绘制出硫酸根标准曲线见图5． 图5 硫酸根含量标准曲线 测含硫氧化菌的液体培养基1的硫酸根含量 发现随着时间的增加硫酸根含量大大提高见图 6． 图6 硫氧化菌对 pH 值和硫酸根的影响 由图6可得：随时间的推移硫酸根含量逐渐增 加从离子色谱的峰面积来看5天的数值呈对数增 加．同时将 pH 计在液体培养基中测得的数值也放 入图6中进行对比．培养基的起始 pH 值用1mol· L －1 NaOH 调到6从第3天开始pH 值下降到1左 右而硫酸根含量的增加也表明硫氧化菌正进入对 数生长期．由于硫的疏水性培养的第1天刚加入 硫粉时液体培养基中硫均悬浮于液面下层液体澄 清从第3天开始接种了菌液的液体培养基开始混 浊pH 降至1左右从测定结果看硫开始大量被氧 化成硫酸第5天培养基混浊程度增加了． 到第5天培养结束的时候硫酸根的峰面积达 到3657∙60mV·min用公式 y＝99∙40x算出硫酸 根的含量为36∙797μg·mL －1（稀释100倍）原液的 硫酸根含量达到3679∙7μg·mL －1即3679∙7mg· L －1起始硫酸根含量为249∙2mg·L －1． 3∙5 硫氧化菌的生长对 FeS 培养基的影响 通过在12号瓶 FeS 培养基中分别加入无菌 水和菌液经过30℃振荡培养2周以上发现1瓶 中的深褐色 FeS 培养基没有太大变化而加菌液的 2号瓶培养基颜色有一定程度的变浅．推测这是由 于硫氧化菌将部分 FeS 固体氧化的缘故．FeS 本身 是不溶于水的深褐色固体如果其受到菌的氧化生 成的硫酸根和金属离子会溶在液体培养基中造成 FeS 固体含量变少培养基颜色变浅．而加入无菌 水的1号瓶颜色无太大变化的原因可能是由于没 有菌的存在 FeS 很难在自然条件下氧化．用 pH 试 纸测2瓶培养基的 pH 值基本上都在7～8左右 培养基的 pH 值并没有明显变化． 4 结论 用固液选择培养基交替培养的方法从污泥中 分离纯化出一种嗜酸硫氧化菌株用简单染色和革 兰氏染色等方法在光学显微镜下对筛选出的硫氧 化菌进行镜检观察到该菌呈短杆状运动能力较 强从运动方式看应该是端生鞭毛革兰氏染色为阴 性．在培养的过程中分别用 pH 计对其培养基 pH 值进行检测发现在培养的第3天 pH 值由原来的6 下降到1左右继续培养pH 值最终可以达到0∙6 附近证明该菌能使液体培养基变酸．硫氧化菌对 硫粉进行氧化过程中硫酸根含量呈对数上升趋势 培养5天硫酸根含量从249∙2增加到3679∙7mg· L －1初步推断该菌能氧化硫生成硫酸．将筛选出来 的硫氧化菌在 FeS 培养基中培养固体不溶物 FeS 有一定程度的消耗证明该菌可以氧化硫化物有很 好的工业用途． ·214· 北 京 科 技 大 学 学 报 2007年 增刊2