2.连二亚硫酸钠(NaS,O4),分析纯，粉术： 3.1%TTC溶液：准确称取TT℃1.0000g,溶于少量水中，定容到100mL。用时稀释金 需要浓度： 4.0.1mol·L-pH7.5磷酸缓冲液 5.1mol·L硫酸：用量筒取比重1.84的浓硫酸55mL,边搅拌边加入盛有500mL蒸馏 水的烧杯中，冷却后稀释1000mL: 6.0.4molL琥珀酸：称取琥珀酸4.72g,溶于水中，定容全100mL。 【材料】 水培或砂培的植物材料（需洗净），玉米浸种24左右，在实验前1周发芽做好材料准 备 【方法步骤】 1.定性测定： (1)配制反应液：把1%的TTC溶液，0.4%mol·L的琥珀酸和0.1mol·LpH7.5磷 酸缓冲液按1：5：4的此例混合。 (2)将根行 把地上部分从茎基切除。然后将根放入带盖的称量瓶中，倒入 反应液，以浸汝根为度.置37℃暗箱中1，以观察着色情况，新根尖端几毫米以及侧根部 分明显地变成红色，表明该处具有活跃的脱氢南存在。 2.定量测定： (1)TTC标准曲线的制作：吸取0.1 mLTTCH标淮液（合TTC10mg·mL-)放入10nmL 容量瓶，加少许NaS,0粉 ，摇匀后即产生红色的甲。再用乙酸乙酯定容全刻度， 匀，然后分别取此液0.25、0.50、1.00、 .50、2.00mL10mL容量瓶中 乙酸乙酯定 仝刻度，即得到含甲月0.025、0.05、0.10、0.15、0.20mg的标准比色系列。以空白作参比 在485m波长下测定吸光度，绘制标准曲线。 (2)称取材料根尖1cm切段0.5g,放入称量瓶，加入1%TTC溶液和0.1molL磷酸 缓冲液的等量混合液10mL,把根充分浸没在溶液内，在37℃下保温1h。此后加入1molL 硫酸2mL,以终 反应 (3)把根取出，擦干水分后与3~5mL乙酸乙酯和少量石英砂一起在研体内研碎，以 提取甲濉。把红色浸提液滤入试管，并用少量乙酸乙酯把残渣洗涤2~3次，滤入试管，最 后用乙酸乙酯定容10mL。用分光光度计在波长485m下比色，以空白试验（先加入硫酸 再加入根样品，其它步骤同上)作参比读出吸光度，查标准曲线，即可求出TTC还原量。 (4)计算： TTC还原强度=根重(g)×时间(h TTC还原量(g) 【注意事项】 在对材料根系的操作中切忌对根的损伤，以免对实验结果带来影响 【思考题】 试分析活力测定中根系着色深浅不同的原因。 实验9硝酸还原酶活性的测定 【原理】 ·7