硝酸还原牌是植物氮素同化的关键酶，也是一种诱导，与作物吸收和利用氮肥有关， 可催化硝酸盐还为亚硝酸盐： NO;+NADH+H"-NE>NO;+NAD'+H,O 产生的NO,在酸性条件下可以与对-氨基苯磺酸(sulfanilic acid)或磺胺（对-氨基苯 磺酰胺，sulfanil--amide)反应生成重氨盐，再与-萘胺反应生成红色偶氮化合物（对苯磺 酸-码--萦胺)。 生成的红色偶氮化合物在520m波长下有最大吸收值，可用分光光度法测定。硝酸还 原南活性可以每h每克鲜重产生的NOg数表示南活性(NO:ggW 根据材料处理不同可分为活体法与离体法，根据反应介质的不同则可分为内源基法利 外源基质法。活体法步骤简单，适合快速、多组测定。离体法复杂，但重复性较好。内源 基质法测定结果可反映硝酸还原酶在实际生长条件下的还原力，而外湖基质法测定结果则 可反映硝酸还原痕的潜在或最高还原力。 一、活体法 【仪器设备】 1.分光光度计： 2.真空绿： 3.真点空干燥器 4.天Ψ（感量0.1mg): 5.恒温培养箱： 6.角瓶(50mL): 7.1L移液管」 8.5mL移液管. 9.10mL试管 10.试管架 l.直径1cm打孔器 【试剂】 1.0.1mol·LpH7.5.酸缓冲液0 Na:HPO412H,0取30.0905g与NaHP04,2H,0 取2.4965马用蒸馏水定容全1000mL): 2.30%的三氯乙酸(30g 氯乙酸，水溶后定容全100mL): 3. 0.2 mol-LKNO 20.22gKN0,用蒸馏水定容于1000mL): 4.磺胺试剂(1g磷胺，加25mL浓盐酸，用蒸馏水定容于100mL): 5.-萘胺试剂(0.2g-萘胺，用含1mL浓盐酸的蒸馏水定容于100mL): 6.5ug·mLNO:标准夜(0.10 g NaNO2用蒸瘤水定容至100mL,吸取7.5mL,再 用蒸馏水定容至1000mL) 【材料】 欲测植物材料（叶桌类蔬菜，实验材料在实验前一天可用硝态氨肥处理，以增强硝酸还 原酶活性)。 【方法步骤】 1.标准曲线制作取7支15mL刻度试管按下表顺学试剂 2。取新鲜植物组织洗净，拭干如果是叶片可去主脉，打成直径1cm的圆片，若足 根、茎可切成0.1cm厚的薄片 试管徐号 4 6 7 5gmLO标准液ml 0.2 0,4 0.8 121.6 2.0 楼馏水mL 2.0 1.8 1.6 1.20.80.4 0.0 每个试斧中O,含量gmL 0 0.51.0 2.0 30 4.05.0 ·8