五操作步骤 1.菌种在LB液体培养基中活化，37℃，150rpm振荡培养过夜： 2.转接到新鲜LB液体培养基中，接种量5%： 3.37℃，150rpm培养至0D60o=0.2-0.25: 4.将培养液放入冰浴冷却10min: 5.取1.5ml培养液于6500rpm离心5min,弃上清液： 6.加0.75ml冰冷CaC溶液(50mmol/LCaC2,10mmol/LTris,pH8.0),用混匀器混匀 或用手指弹离心管混匀： 7.将离心管置于冰浴45min: 8.6S00rpm5min离心收集细胞 9.将细胞小心悬浮于0.1ml冰冷CaC,溶液中（用移液器小心混匀）： 10.加1l质粒，小心混匀，置冰浴45min: 11.将离心管置于42℃恒温水浴热处理2min(准确：)： 12.加1mlLB液体培养基后于37℃、150rpm振荡培养1h 13.取0.1ml培养液涂布至LB+Amp平板上： 14.将平板倒置于37℃恒温培养箱中培养过夜。 六实验结果 观察转化结果，并进行分析。 七思考题 1.本实验成功的关键是什么？ 2.什么是感受态细胞，用什么方法获得感受态细胞？ 3.本实验中转化的原理是什么？pUC19质粒有何特点？五 操作步骤 1. 菌种在 LB 液体培养基中活化，37℃，150rpm 振荡培养过夜； 2. 转接到新鲜 LB 液体培养基中，接种量 5%； 3. 37℃，150rpm 培养至 OD600=0.2~0.25； 4. 将培养液放入冰浴冷却 10min； 5. 取 1.5ml 培养液于 6500rpm 离心 5min，弃上清液； 6. 加 0.75ml 冰冷 CaCl2 溶液（50mmol/LCaCl2，10mmol/L Tris，pH8.0），用混匀器混匀 或用手指弹离心管混匀； 7. 将离心管置于冰浴 45min； 8. 6500rpm 5min 离心收集细胞； 9. 将细胞小心悬浮于 0.1ml 冰冷 CaCl2 溶液中（用移液器小心混匀）； 10. 加 1l 质粒，小心混匀，置冰浴 45min； 11. 将离心管置于 42℃恒温水浴热处理 2min（准确！）； 12. 加 1mlLB 液体培养基后于 37℃、150rpm 振荡培养 1h； 13. 取 0.1ml 培养液涂布至 LB+Amp 平板上； 14. 将平板倒置于 37℃恒温培养箱中培养过夜。 六 实验结果 观察转化结果，并进行分析。 七 思考题 1. 本实验成功的关键是什么？ 2. 什么是感受态细胞，用什么方法获得感受态细胞？ 3. 本实验中转化的原理是什么？pUC19 质粒有何特点？