Ⅲ大肠杆菌的转化实验 一实验目的 学习并掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及外源基因导入细胞的技术 二实验材料和用具 南种：E.coli DH5a 质粒：pUC19: 培养基：LB: 1.LB液体试管：5ml/管 2.LB液体三角瓶：20ml/250ml三角瓶： 3.LB+Amp平板：Ampicillin加量100μgml: 器材：恒温培养箱、恒温摇床、离心机、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、涂布棒、EP 管、 可调移液器、吸头等。 三实验原理 转化活性是检测质粒生物活性的重要指标。用于转化的受体细胞一般是限制-修饰系统 缺陷的变异株，以防止对外源DNA的切割。质粒能否进入受体细胞取决于该细胞是否处于 容易吸收外源DNA的感受态。细胞的感受态可以通过理化因素诱导产生。大肠杆菌是常用 的受体南，其感受态一般是通过用CaC2在0℃条件下处理细胞而形成。细胞处于0℃的CaC2 低渗溶液中，会膨胀成球形，细胞膜的通透性发生改变，转化混合物中的质粒DNA形成抗 Dnase的羟基-钙磷酸复合粘附于细胞表面，经42℃短时间热激处理，促进细胞吸收DNA复 合物，在LB培养基上培养数小时后，球形细胞复原并增殖，在选择培养基上便可获得所需 的转化子。 四实验内容 1.制备E.coli DH5a的感受态细胞： 2.进行质粒pUC19的转化 Ⅲ 大肠杆菌的转化实验 一 实验目的 学习并掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及外源基因导入细胞的技术。 二 实验材料和用具 菌种：E.coli DH5； 质粒：pUC19； 培养基：LB： 1. LB 液体试管：5ml/管； 2. LB 液体三角瓶：20ml/250ml 三角瓶； 3. LB+Amp 平板：Ampicillin 加量 100g/ml； 器材：恒温培养箱、恒温摇床、离心机、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、涂布棒、EP 管、 可调移液器、吸头等。 三 实验原理 转化活性是检测质粒生物活性的重要指标。用于转化的受体细胞一般是限制-修饰系统 缺陷的变异株，以防止对外源 DNA 的切割。质粒能否进入受体细胞取决于该细胞是否处于 容易吸收外源 DNA 的感受态。细胞的感受态可以通过理化因素诱导产生。大肠杆菌是常用 的受体菌，其感受态一般是通过用CaCl2 在0℃条件下处理细胞而形成。细胞处于0℃的CaCl2 低渗溶液中，会膨胀成球形，细胞膜的通透性发生改变，转化混合物中的质粒 DNA 形成抗 Dnase 的羟基-钙磷酸复合粘附于细胞表面，经 42℃短时间热激处理，促进细胞吸收 DNA 复 合物，在 LB 培养基上培养数小时后，球形细胞复原并增殖，在选择培养基上便可获得所需 的转化子。 四 实验内容 1. 制备 E.coli DH5的感受态细胞； 2. 进行质粒 pUC19 的转化