23.洗膜液B:2xSSC 24.洗膜液C:0.1×SSC 0.1% SDS 25.酚:氯仿(1:1w) 26.杂交液:在预杂交液中加入10%(w)硫酸葡聚糖。 27.抗地高辛溶液:2.5μ抗地高辛抗体碱性磷酸酶结合物 I mol/L Tris-HCl(pH9.5) 5 mol/L NaCI 28.检测缓冲液:0.1moL二乙醇胺 I mmol/L Mecl 0.02%叠氮化钠 用浓HCl调节pH到100。 29. AMPPD溶液:在3u检测缓冲液中加入6 Hl Tropix AMPPD。 30.脱色液:0.1×SSC 0.1% SDS 31.有关设备:电热板、电泳仪、电泳槽、长波紫外灯(365nm)、312nm 紫外灯、尼龙杂交膜、杂交袋或杂交瓶 (二)样本制备 DNA提取具体步骤见细胞内核酸的提取 2.DNA的限制性内切酶消化DNA的限制性内切酶是从细菌中分离出来 的、在特定序列识别并切割双链DNA的蛋白酶,包括Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类。分子 生物学中常用的是Ⅱ类DNA限制性内切酶,识别并切割双链DNA的特定序列 通常是4~6个核苷酸长度的短的回文结构,如 AAGCTT(HindⅢ)、 GAATTC ( ECoRI)、 GAGCTC(SacI)等,不同的酶切割的结果有所不同:有些酶在 回文结构的对称点上同时切割DNA双链而产生平末端的DNA片段;另外一些 酶则在回文结构对称点左右相应的位点同时切割两条链而形成粘末端的DNA片 段。DNA的限制性内切酶的消化步骤如下。23．洗膜液 B：2×SSC 0.1% SDS 24．洗膜液 C：0.1×SSC 0.1% SDS 25．酚:氯仿（1:1 v/v） 26．杂交液：在预杂交液中加入 10%（w/v）硫酸葡聚糖。 27．抗地高辛溶液：2.5μl 抗地高辛抗体/碱性磷酸酶结合物 1 mol/L Tris-HCl（pH9.5） 1 mol/L MgCl2 5 mol/L NaCl 28．检测缓冲液：0.1 mol/L 二乙醇胺 1 mmol/L MgCl2 0.02%叠氮化钠 用浓 HCl 调节 pH 到 10.0。 29．AMPPD 溶液：在 3μl 检测缓冲液中加入 6μl Tropix AMPPD。 30．脱色液：0.1 ×SSC 0.1% SDS 31．有关设备：电热板、电泳仪、电泳槽、长波紫外灯（365nm）、312nm 紫外灯、尼龙杂交膜、杂交袋或杂交瓶 （二）样本制备 1．DNA 提取 具体步骤见细胞内核酸的提取 2．DNA 的限制性内切酶消化 DNA 的限制性内切酶是从细菌中分离出来 的、在特定序列识别并切割双链 DNA 的蛋白酶，包括Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类。分子 生物学中常用的是Ⅱ类 DNA 限制性内切酶，识别并切割双链 DNA 的特定序列 通常是 4～6 个核苷酸长度的短的回文结构，如 AAGCTT（Hind Ⅲ）、GAATTC （Eco RⅠ）、GAGCTC（Sac Ⅰ）等，不同的酶切割的结果有所不同：有些酶在 回文结构的对称点上同时切割 DNA 双链而产生平末端的 DNA 片段；另外一些 酶则在回文结构对称点左右相应的位点同时切割两条链而形成粘末端的 DNA 片 段。DNA 的限制性内切酶的消化步骤如下