第16卷第4期 杭州大学学报 Vol 16 No 19年0月 JOURNAL OF HANGZHOU UNIV ERSITY October 1939 草鱼出血病病原病毒在鱼类 细胞中增殖的研究 毛树坚邵健忠 (生物研究所) 摘要 应用电子显微镜和放射自显影术,观察草鱼出血病两种病原病毒——草鱼呼肠孤病毒 GcR)和草鱼小RNA病毒(GCP)在鱼类细胞中的形态及殖过程的一些重要特征 着重描述GCR从“毒浆结构”发生和GCP的特殊装配形式以及两者RNA在细胞中的复 制部位和转移过程,也对两种病毒的形态发生动态、释放形式与宿主细胞的病变效应作了 观察和讨论 关键词:草鱼;出血病;呼肠孤病毒!小RNA病毒;鱼类病毒 陈燕樂等(1983)从草鱼出血病病鱼组织中分离到一种病原病毒,定名为草鱼呼肠 孤病毒(GCR).作者等(1987)又分离出一种20-30m的病毒颗粒,经病毒的 形态观察与核酸分析,初步鉴别为小RNA病毒科( Picornaviridae)病毒,可以暂名 为草鱼小RNA病毒( Grass Carp Picornavirus,GCP).将经过分离纯化的两种病 毒分别注射入健康1—2龄草鱼,可以复制出典型的草色出血病* 呼肠孤病毒曾在患传染性胰腺坏死病的鳟鱼、日本大马哈鱼及河鲶中分离得到2-43 而小RNA病毒在鱼类中还是首次发现.为进一步探讨病原病毒致病的机理,本文报道 该两种病毒在鱼类培养细胞中增殖的途径和方式, 1材料与方法 ↑.1细胞与病哥 11.1用草鱼吻端组织ZC-7901细胞株作试验用细胞,常规培养 1.1.2从典型草鱼出血病病鱼组织分离纯化到呼肠孤病毒与小RNA病毒,用 Hanks 液稀释,透析24小时,经0.22#滤膜抽滤除菌,成为病毒液 1.1.3将病毒液分别接种于传代后三天的单层细胞培养物,27℃吸附60分钟后吸去病 毒液,加维持液,27℃培养3-5天收集产生明显细胞病变效应CPE的培养物,-20℃ 冻融三次,稀释后再接种到另外的传代三天的细胞培养物,再收集CPE的培养物.如 本文1988年8月5日收到 两种病的分离纯化及其形态学观察和核酸分析;两种病毒的感染致病结果,将另文报道第j患第 l期 j，I，年 " 月 杭 州 大 学 学 报 JOURNAL OF HANGZ}10U UNiVERSITY V01．“ NO．1 October 1，3， 草鱼出血病病原病毒在鱼类 细胞 中增殖 的研 究 毛 树 坚 邵 健 忠 (生 物 研宄 所 ) 摘 要 应用电子显微镜和放射自显影术，观察草鱼出血病 两种病原精毒一一草鱼呼酾孤 病 毒 (GCR)和草鱼小 RNA病毒 (GCP)在鱼类细胞 中的形态及增殖过程的一些重要特征 ． 着重描述 GCR 从 “毒浆结构”发生和 GCP的特殊 装配形式 厦两者 RNA在细胞 中的。复 制部位和转移 过程，也对两种病 毒的形态发生动态 、释放形式与宿 主细胞 的病变效应 作 了 观察和讨论 ． 关建 词：草 鱼}出血病}砰晒 孤病毒J小 RNA病毒 ，鱼类 病毒 陈燕桑等 (1983)从草鱼出血病病鱼组 织 中分离到一种病原病毒，定名为草 鱼呼肠 孤病毒 (GCR)“ ．作者等 (1987)又分离出一种 20—3013111的病毒颗粒， 经 病 毒 的 形态 观察与核酸分 析，初步 鉴别为小 RNA 病毒科 (Picornaviridae)病毒，可以 暂 名 为草鱼小 RNA 病毒 (GrassCarp Picornavirus，GCP)．将经过分 离纯化 的两 种 病 毒 分别注射入健康 1— 2龄草鱼，可 以复制出典型的草鱼出 血病 ． 呼肠孤病毒 曾在患传染性胰腺坏 死病的鳟 鱼、日本大 马晗鱼 及河鲶 中分离得到 “ ， 而 小 RNA病毒在鱼类 中还是 首次发现 ．为进一 步探 讨病原病 毒致病的机理，本文 报 道 该 两种病毒 在鱼类培养 细胞中增 殖的途径 和方式 ． 1 材 料 与方 法 t．1 细胞 与病毒 1．1．1 用革鱼吻端组织 ZC-7901细胞株作 试验用细胞，常规培养 1．1．2 从典 型 草 鱼 出 血病 病 鱼 组 织分 离 纯 化 到 呼 肠 孤 病 毒 与 小 RNA 病 毒 ， 用 Hanks 液 稀 释 ，透 析 24小 时， 经 0．22 滤 膜 抽 滤 除 菌 ， 成 为 病 毒 液 ． 1．1．3 将 病 毒 液 分 别 接 种 于 传 代 后三 天 的单 屡 细 咆培 养 物 ， 27℃吸 附 60分钟 后 吸 去 病 毒液 ，加维 持液 ，27'13培养 3— 5天 ．收集产生 明显细胞病变效虚 CPE的培 养 物 ，一20'13 冻融三次 ，稀释后再 接种 到另外的传代三天 的细胞 培养物 ，再 收集 CPE 的培 养物 ．如 本 文 1988年 8月 5日嘘到 ·两种病毒的 分离纯化及其形 态学观察和桉酸分析，两种病毒的感染致病结果，将另文报道 维普资讯 http://www.cqvip.com