MLPA技术 徐程明14307130055 、生物技术名称及简介 多重连接探针扩增技术( multiplex ligation- dependent probe amplification,MLPA),是近几年发展起来的一种针对待检DNA序列进行定 性和半定量分析的新技术 设计好的探针 引物X杂交序列杂交序列填充片段引物Y 该技术高效、特异,在一合成的 M13衍生的 寡核苷酸 寡核苷酸 次反应中可以检测45个 甲基化 非甲基化 研究序列 核苷酸序列拷贝数的改变 多探针杂交 目前已经应用于多个领域 ↓ 连连 多种疾病的研究。 性内切酶消 MLPA的原理 MLPA的基本原理包括探针 仅连接的探针扩增出产物 和靶序列DMA进行杂交,之 片段分析 通过连接、PCR扩增,产物通 过毛细管电泳分离及数据收集,DNA分析软件对收集的数据进行分析最后得出结 论。每个MLPA探针包括两个荧光标记的寡核苷酸片段,一个由化学合成,一个 由M13噬菌体衍生法制备;每个探针都包括一段引物序列和一段特异性序列。在 MLPA反应中,两个寡核苷酸片段都与靶序列进行杂交,之后使用连接酶连接两 部分探针。连接反应高度特异,只有当两个探针与靶序列完全杂交,即靶序列与 探针特异性序列完全互补,连接酶才能将两段探针连接成一条完整的核酸单链 反之,如果靶序列与探针序列不完全互补,即使只有一个碱基的差别,就会导致 杂交不完全,使连接反应无法进行。连接反应完成后,用一对通用引物扩增连接 好的探针,每个探针的扩增产物的长度都是唯一的,范围在130~480bp。最后 通过毛细管电泳分离扩增产物, Genemarker软件分析,得出结论。只有当连接 反应完成,才能进行随后的PCR扩增并收集到相应探针的扩增峰,如果检测的靶 序列发生点突变或缺失、扩増突变,那么相应探针的扩増峰便会缺失、降低或增 加,因此,根据扩增峰的改变就可判断靶序列是否有拷贝数的异常或点突变存在。 、MLPA的应用MLPA 技术 徐程明 14307130055 一、生物技术名称及简介 多 重 连 接 探 针 扩 增 技 术 （ multiplex ligation-dependent probe amplification ,MLPA），是近几年发展起来的一种针对待检 DNA 序列进行定 性和半定量分析的新技术。 该技术高效、特异，在一 次反应中可以检测 45 个 核苷酸序列拷贝数的改变， 目前已经应用于多个领域、 多种疾病的研究。 二、MLPA 的原理 MLPA的基本原理包括探针 和靶序列 DNA 进行杂交，之后 通过连接、PCR 扩增，产物通 过毛细管电泳分离及数据收集，DNA 分析软件对收集的数据进行分析最后得出结 论。每个 MLPA 探针包括两个荧光标记的寡核苷酸片段，一个由化学合成，一个 由 M13 噬菌体衍生法制备；每个探针都包括一段引物序列和一段特异性序列。在 MLPA 反应中，两个寡核苷酸片段都与靶序列进行杂交，之后使用连接酶连接两 部分探针。连接反应高度特异，只有当两个探针与靶序列完全杂交，即靶序列与 探针特异性序列完全互补，连接酶才能将两段探针连接成一条完整的核酸单链； 反之，如果靶序列与探针序列不完全互补，即使只有一个碱基的差别，就会导致 杂交不完全，使连接反应无法进行。连接反应完成后，用一对通用引物扩增连接 好的探针，每个探针的扩增产物的长度都是唯一的，范围在 130～480bp。最后， 通过毛细管电泳分离扩增产物，Genemarker 软件分析，得出结论。只有当连接 反应完成，才能进行随后的 PCR 扩增并收集到相应探针的扩增峰，如果检测的靶 序列发生点突变或缺失、扩增突变，那么相应探针的扩增峰便会缺失、降低或增 加，因此，根据扩增峰的改变就可判断靶序列是否有拷贝数的异常或点突变存在。 三、MLPA 的应用