背景假肥大型进行性肌营养不良症( Duchenne and Becker muscular ystrophy,DMD/BD)、脊髓性肌肉萎缩症( Spinal muscular atrophy,SMA)都 是常见的的致死性单基因遗传病,目前暂无有效的治疗手段,所以检测患者致病 基因,开展携带者筛查和产前诊断以避免患儿的出生显得尤为重要。传统的SMA 基因诊断方法为PCR-酶切法,仅限于检测SMN1基因7号外显子纯合缺失,未能检 出携带者。基于上述方法的缺陷和临床需要,我们急需建立高效、准确、灵敏并 适用于临床大样本检测、不依赖患者信息的携带者筛査平台,完善 DMD/BMD、SMA 基因诊断体系。目的建立单基因遗传病DMD/B⑩D与SMA的多重连接依赖性探针 扩增技术(MLPA)检测平台,提高患者诊断率和携带者检出率,并指导再生育。MPA 的应用不依赖患者信息,可有效对DⅧ/BⅧ、SMA致病基因拷贝数进行相对定量, 检出遗传缺陷携带者和提高患者诊断率。 四、MLPA的优缺点 MLPA结合了DNA探针杂交和PCR技术,具有以下优点 l.MLPA技术能用于检测许多不同的疾病,差别只是探针不同而已。 2MLPA是多重反应,一个反应提供了将近50个靶位点 3.MLPA反应费用较低 4.MLPA重复性好,简单易操作,可以同时检测多个样本。 5.MLPA敏感性高,仅需20ng人DNA,结果不受样品DNA量的影响。 6.MLPA能区分单个碱基的差异,能检测少量的拷贝数改变,如2个,3个拷贝数 改变。 7.MLPA可以检测单一外显子的缺失和插入突变。 8.所需仪器易得到。 MLPA虽然具有很大优点,但也有其局限性 1、需要精确测量DNA的浓度,样本容易被污染 2、不能用于单个细胞的检测。 3、MPA用于检测基因的缺失或重复,不适合检测未知的点突变类型 4、不能检测染色体的平衡易位。 总之,作为一种新的技术,随着医学与生物学的发展,MPA会日益完善,其应 用领域也会日益广泛。背 景 假 肥 大 型 进 行 性 肌 营 养 不 良 症 (Duchenne and Becker muscular dystrophy, DMD/BMD)、脊髓性肌肉萎缩症(Spinal muscular atrophy, SMA)都 是常见的的致死性单基因遗传病,目前暂无有效的治疗手段,所以检测患者致病 基因,开展携带者筛查和产前诊断以避免患儿的出生显得尤为重要。传统的 SMA 基因诊断方法为 PCR-酶切法,仅限于检测 SMN1 基因 7 号外显子纯合缺失,未能检 出携带者。基于上述方法的缺陷和临床需要,我们急需建立高效、准确、灵敏并 适用于临床大样本检测、不依赖患者信息的携带者筛查平台,完善 DMD/BMD、SMA 基因诊断体系。 目的建立单基因遗传病 DMD/BMD 与 SMA 的多重连接依赖性探针 扩增技术(MLPA)检测平台,提高患者诊断率和携带者检出率,并指导再生育。MLPA 的应用不依赖患者信息,可有效对 DMD/BMD、SMA 致病基因拷贝数进行相对定量, 检出遗传缺陷携带者和提高患者诊断率。 四、MLPA 的优缺点 MLPA 结合了 DNA 探针杂交和 PCR 技术，具有以下优点 1.MLPA 技术能用于检测许多不同的疾病，差别只是探针不同而已。 2.MLPA 是多重反应，一个反应提供了将近 50 个靶位点。 3.MLPA 反应费用较低。 4.MLPA 重复性好，简单易操作，可以同时检测多个样本。 5.MLPA 敏感性高，仅需 20 ng 人 DNA，结果不受样品 DNA 量的影响。 6.MLPA 能区分单个碱基的差异，能检测少量的拷贝数改变，如 2 个，3 个拷贝数 改变。 7.MLPA 可以检测单一外显子的缺失和插入突变。 8.所需仪器易得到。 MLPA 虽然具有很大优点，但也有其局限性 1、需要精确测量 DNA 的浓度，样本容易被污染。 2、不能用于单个细胞的检测。 3、MLPA 用于检测基因的缺失或重复，不适合检测未知的点突变类型。 4、不能检测染色体的平衡易位。 总之，作为一种新的技术，随着医学与生物学的发展，MLPA 会日益完善，其应 用领域也会日益广泛