石蜡切制片实验指导 目的要求：初步掌握以石蜡包埋软质材料后切制片的方法，以便进一步观察材料的 内部结构 选择实验材料、固定、脱水、透明、渗蜡、包理、切片、制片，用显微镜镜检、观察摄 影，根据实验结果写出实验报告。整个过程大约需要1个月时间，锻炼了学生独立解决问题 和分析问题的能力。 材 依研究方向选定根尖、茎端、叶片、胚胎（按授粉后不同时期取样）等材料 仪器、 用具及药品 染料 光学显微镜双目解剂显微镜恒温培养箱旋转式切片机水浴锅电炉温台 塑料盆粗天平软胶管指形玻璃管塑料网（网孔小于材料）橡胶圈烧杯(300、 1000毫升)镊子解剖针、刀指形瓶（或小药瓶）滴管胶带纸标签纸蜡勺熔 蜡锅熔蜡盅铝薄片活套盒铜网《网孔小于材料)白报纸道林纸玻璃片3毫米 5毫米) 温度计 石 桑皮纸漏斗 回形 量筒 三角架 培养 剪刀接蜡 台木毛笔小蜡 酒精灯双面刀片载玻片盖玻片滴瓶漏斗架蜡光纸载 玻片托板载玻片木盆洗耳球精支纱抹布滤纸立式染缸火柴石蜡蒸馏水 各级酒精纯氯仿二甲苯明胶1%苯胺番红（水或70%酒精配）1%苯胺固绿(95%酒 精配)1%醇溶曙红B石炭酸甘油中性树脂胶明胶粘贴剂Navashin'sⅢ式固定 四、操作步骤 1、取材：（每号中的数量酌情而定） (1)先萌发种子待根尖发生约0.5~1厘米长（示种子大小而定）用双面刀片截取根尖 约2~5毫米长（纵切）. (2)选取根系中较柔软的根部载取成约3一5亭米长小段（不过5亭米）（可织 横切) (3)取茎瑞剥去真叶及幼叶（纵切）。 (4)取叶片剪取叶主脉中部旁的叶片约3~5毫米3~5毫米小方块（叶主脉小于3毫 米者可连同主脉一起剪取)。 (5)取受精前与受精后刚开始发有的子房截取成3~5毫米小段（可纵、横切）。 2、固定：以上各号材料分别置aa5hnS式固定液中固定24小时以 3、冲洗：以上各号材料分别编号入冲洗笼中自来水冲洗一天后大烧杯中浸水过夜，最 后蒸馏水浸1小时。 4、脱水：采用15%、30%、50%、70%、85%、95%无水酒精，逐级脱水，每级可自 1~6小时不等，示材料性质、大小而定（必要时可在70%酒精中停留过夜或1~2天：脱水 至95%酒精时可在脱水烧杯中加入少量1%醇溶红色染液使材料稍有着色，以便包埋时易于 辨认) 5、透明：采用5级氯仿透明，每级停留0.5~6小时。材料脱水至无水酒精后细有等引 5分格标记的小指形瓶中，并浸于无水酒精至5格处，后逐级换入氯仿，即各次吸出1格， 加入1格氯仿，最后一级全部吸出，再换一次氯仿至2.5格处。（氯仿集中回收）。 6、浸蜡：材料继续在氯仿中加蜡渗透，可分三次加入，第一次加到3.5格处，第二次 加至4.5格处， 次加至5格处 ,每次加蜡相隔约 小时，前两次可在38℃ 40℃恒温 水浴锅中进行，每三次加蜡后可移入38℃~40℃恒温培养箱中过夜，并继续浸蜡2~3天。 然后将材料分别对号移至铜网活底的铝片活套浸蜡盒中，并将各号汇成一整体继续分级浸 蜡，分级浸蜡在恒温培养箱内进行，分别事先准备好7个蜡锅，锅外标明50%(50%石蜡、 石蜡切制片实验指导 一、目的要求：初步掌握以石蜡包埋软质材料后切制片的方法，以便进一步观察材料的 内部结构。 选择实验材料、固定、脱水、透明、渗蜡、包埋、切片、制片，用显微镜镜检、观察摄 影，根据实验结果写出实验报告。整个过程大约需要 1 个月时间，锻炼了学生独立解决问题 和分析问题的能力。 二、材料：依研究方向选定根尖、茎端、叶片、胚胎（按授粉后不同时期取样）等材料。 三、仪器、用具及药品、染料： 光学显微镜 双目解剖显微镜 恒温培养箱 旋转式切片机 水浴锅 电炉 温台 塑料盆 粗天平 软胶管 指形玻璃管 塑料网（网孔小于材料） 橡胶圈 烧杯（300、 1000 毫升） 镊子 解剖针、刀 指形瓶（或小药瓶） 滴管胶带纸 标签纸 蜡勺 熔 蜡锅 熔蜡盅 铝薄片活套盒 铜网（网孔小于材料） 白报纸 道林纸 玻璃片（3 毫米、 5 毫米） 温度计 石棉网 桑皮纸 漏斗 回形针 量筒 三角架 培养皿 剪刀 接蜡 台木 毛笔 小蜡铲 酒精灯 双面刀片 载玻片 盖玻片 滴瓶 漏斗架 蜡光纸 载 玻片托板 载玻片木盒 洗耳球 精支纱抹布 滤纸 立式染缸 火柴 石蜡 蒸馏水 各级酒精 纯氯仿 二甲苯 明胶 1%苯胺番红（水或 70%酒精配） 1%苯胺固绿（95%酒 精配） 1%醇溶曙红 B 石炭酸 甘油 中性树脂胶 明胶粘贴剂 Navashin’s Ⅲ式固定 液 四、操作步骤 1、取材：（每号中的数量酌情而定） （1）先萌发种子待根尖发生约 0.5～1 厘米长（示种子大小而定）用双面刀片截取根尖 约 2～5 毫米长（纵切）。 （2）选取根系中较柔软的根部截取成约 3～5 毫米长小段（宽不超过 5 毫米）（可纵、 横切）。 （3）取茎端剥去真叶及幼叶（纵切）。 （4）取叶片剪取叶主脉中部旁的叶片约 3～5 毫米*3～5 毫米小方块（叶主脉小于 3 毫 米者可连同主脉一起剪取）。 （5）取受精前与受精后刚开始发育的子房截取成 3～5 毫米小段（可纵、横切）。 2、固定：以上各号材料分别置 Navashin’sⅢ式固定液中固定 24 小时以上 3、冲洗：以上各号材料分别编号入冲洗笼中自来水冲洗一天后大烧杯中浸水过夜，最 后蒸馏水浸 1 小时。 4、脱水：采用 15％、30％、50％、70％、85％、95％无水酒精，逐级脱水，每级可自 1～6 小时不等，示材料性质、大小而定（必要时可在 70％酒精中停留过夜或 1～2 天; 脱水 至 95％酒精时可在脱水烧杯中加入少量 1％醇溶红色染液使材料稍有着色，以便包埋时易于 辨认）。 5、透明：采用 5 级氯仿透明，每级停留 0.5～6 小时。材料脱水至无水酒精后画有等距 5 分格标记的小指形瓶中，并浸于无水酒精至 5 格处，后逐级换入氯仿，即各次吸出 1 格， 加入 1 格氯仿，最后一级全部吸出，再换一次氯仿至 2.5 格处。（氯仿集中回收）。 6、浸蜡：材料继续在氯仿中加蜡渗透，可分三次加入，第一次加到 3.5 格处，第二次 加至 4.5 格处，第三次加至 5 格处，每次加蜡相隔约 1 小时，前两次可在 38℃～40℃恒温 水浴锅中进行，每三次加蜡后可移入 38℃～40℃恒温培养箱中过夜，并继续浸蜡 2～3 天。 然后将材料分别对号移至铜网活底的铝片活套浸蜡盒中，并将各号汇成一整体继续分级浸 蜡，分级浸蜡在恒温培养箱内进行，分别事先准备好 7 个蜡锅，锅外标明 50％（50％石蜡