6.用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提,取上清液移至干净管中, 7.加1倍体积异丙醇,颠倒混合,室温下静止10分钟,沉淀DNA。 8.用玻棒捞出DNA沉淀,π0%乙醇漂洗后,吸干溶解于1mTE,-20℃保存。 如DNA沉淀无法捞出,可500opm离心,使DNA沉淀。 9.如要除去其中的RNA,可以按本章第三节中操作步骤处理。 第五节基因组DNA的检测 上述方法得到的DNA一般可以用作 Southern,RFLP、PCR等分析。由于所 用材料的不同,得到的DNA产量及质量均不同有时DNA中含有酚类和多糖类物 质会影响酶切和PCR的效果。所以获得基因组DNA后均需检测DNA的产量 和质量。 1.DNA溶液稀释20-30倍后,测定OD260OD280比值,明确DNA的含量和 质量 2.取2-5p1在0.7% agarose胶上电泳,检测DNA的分子大小。 3.取2 ug dNA,用10单位( D)HindⅢ酶切过夜,0.7% agarose胶上电泳,检 测能否完全酶解(做 RFLP DNA必须完全酶解) 如果DNA中所含杂质多,不能完全酶切,或小分子DNA多,影响接续的分 析和操作可以用下列方法处理: (1)选用幼嫩植物组织,可减少淀粉类的含量。 (2)酚:氯仿抽提,去除蛋白质和多糖。 (3) Sepharose柱过滤,去除酚类、多糖和小分子DNA。 (4)CsCl梯度离心,去除杂质,分离大片段DNA(可用作文库构建)6. 用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 取上清液移至干净管中。 7. 加 1 倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止 10 分钟，沉淀 DNA。 8. 用玻棒捞出 DNA 沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于 1ml TE, -20℃保存。 如 DNA 沉淀无法捞出,可 5000rpm 离心, 使 DNA 沉淀。 9. 如要除去其中的 RNA, 可以按本章第三节中操作步骤处理。 第五节 基因组 DNA 的检测 上述方法得到的 DNA 一般可以用作 Southern, RFLP、PCR 等分析。由于所 用材料的不同,得到的 DNA 产量及质量均不同,有时 DNA 中含有酚类和多糖类物 质,会影响酶切和 PCR 的效果。所以获得基因组 DNA 后,均需检测 DNA 的产量 和质量。 1. DNA 溶液稀释 20-30 倍后,测定 OD260 /OD280 比值, 明确DNA 的含量和 质量。 2. 取 2-5μl 在 0.7% agarose 胶上电泳, 检测 DNA 的分子大小。 3. 取 2μg DNA, 用 10 单位(U)HindⅢ酶切过夜, 0.7% agarose 胶上电泳, 检 测能否完全酶解(做 RFLP, DNA 必须完全酶解)。 如果 DNA 中所含杂质多, 不能完全酶切, 或小分子 DNA 多, 影响接续的分 析和操作,可以用下列方法处理： （1）选用幼嫩植物组织，可减少淀粉类的含量。 （2） 酚:氯仿抽提, 去除蛋白质和多糖。 （3）Sepharose 柱过滤, 去除酚类、多糖和小分子 DNA。 （4）CsCl 梯度离心, 去除杂质, 分离大片段 DNA(可用作文库构建)