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等),其电荷的多少取决于分子性质及其所在介质的pH和组成,由于混合物中各组分所带 电荷性质、电荷数量以及分子量的不同,在同一电场的作用下,各组分泳动的方向和速度也 各异,因此,在一定时间内,由于各组分移动距离的不同,从而达到分离鉴定各组分的目的。 设一带电分子在电场所受的力为F,F的大小取决于质点所带电荷Q和电场强度X 即 F=OX 根据Sok心氏定律,一球形的分子运动时所受的阻力F与分子运动的速度V、分子的 半径r、介质的粘度n的关系为: F'=6IrnV 当F=F'即达到动态平衡时:QX=6rnV移项得: Q (1) X 义表示电分子在单位电场强度下的运动速度,称为迁移率,也称为电泳速度,以 V表示,即: v-文68n (2) 由式(2)可见,一个带电分子的迁移率不仅取决于其本身所带的电荷,而且还与 电场强度,介质的pH、离子强度、粘度、电渗等因素有关。 二、影响电泳的主要因素 (一)电泳介质的州当介质的等于某种两性物质的等电点时,该物质处于等电状 态,即不向正极或负极移动:当介质叫小于其等电点时,则呈正离子状态,移向负极:反 之,介质pH大于其等电点时,则负离子状态,移向正极。因此,任何一种两性物质的混合 物电泳均受介质pH的影响,即决定两性物质的带电状态及其量,为了保持介质H稳定性, 常用一定pH的缓冲液,如分离血清蛋白质常用pH86的巴比妥或三羟甲基氨基甲烷(Ts) 缓冲液。 (二)缓冲液的离子强度离子强度对电泳的影响是:离子强度低,电泳速度快,分 离区带不易清晰:离子强度高,电泳速度慢,但区带分离清晰。如离子强度过低,缓冲液的 缓冲量小,不易维持pH恒定:离子强度过高,则降低蛋白质的带电量(压缩双电层)使电 泳速度减慢:所以常用离子强度为0.02-0.2之间。等),其电荷的多少取决于分子性质及其所在介质的 pH 和组成,由于混合物中各组分所带 电荷性质、电荷数量以及分子量的不同,在同一电场的作用下,各组分泳动的方向和速度也 各异,因此,在一定时间内,由于各组分移动距离的不同,从而达到分离鉴定各组分的目的。 设一带电分子在电场所受的力为 F,F 的大小取决于质点所带电荷 Q 和电场强度 X, 即 F = QX 根据 Stoke 氏定律,一球形的分子运动时所受的阻力 F´与分子运动的速度 V、分子的 半径 r、介质的粘度η的关系为: F´= 6πrηV 当 F=F´即达到动态平衡时:QX = 6πrηV 移项得: (1) 表示带电分子在单位电场强度下的运动速度,称为迁移率,也称为电泳速度,以 V 表示 ,即: (2) 由式(2)可见,一个带电分子的迁移率不仅取决于其本身所带的电荷,而且还与 电场强度,介质的 pH、离子强度、粘度、电渗等因素有关。 二、影响电泳的主要因素 (一)电泳介质的 pH 当介质的 pH 等于某种两性物质的等电点时,该物质处于等电状 态,即不向正极或负极移动;当介质 pH 小于其等电点时,则呈正离子状态,移向负极;反 之,介质 pH 大于其等电点时,则负离子状态,移向正极。因此,任何一种两性物质的混合 物电泳均受介质 pH 的影响,即决定两性物质的带电状态及其量,为了保持介质 pH 稳定性, 常用一定 pH 的缓冲液,如分离血清蛋白质常用 pH8.6 的巴比妥或三羟甲基氨基甲烷(Tris) 缓冲液。 (二)缓冲液的离子强度 离子强度对电泳的影响是:离子强度低,电泳速度快,分 离区带不易清晰;离子强度高,电泳速度慢,但区带分离清晰。如离子强度过低,缓冲液的 缓冲量小,不易维持 pH 恒定;离子强度过高,则降低蛋白质的带电量(压缩双电层)使电 泳速度减慢;所以常用离子强度为 0.02~0.2 之间。 V X V X V = Q 6πrη = Q 6πrη V X =
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