4.7.2定量测定 ELSIA操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此 在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定 大分子量物质的夹心法LISA,标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近2.0，绘制时 常用半对数纸，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线 一般呈S形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。甲胎蛋白质LISA 测定的标准曲线示例见图4-1。 测定小分子量物质常用竞争法（参见2.2），其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准 曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。L,ISA测定的标准曲线示例见图4-2。注意图中横 坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达 生物谷讲座2：LISA技术中的抗原与抗体的反应 抗体 1.2.1抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig分五类，即Ig心、IgA、IgM、IgD 和1gE。与免疫测定有关的Ig主要为1sG和IgW。1g由两个轻链(L)和两个重链(H)的单体组成 Ig的轻链是相同的，有x(kappa)和入(Lambda)两种型别。五类Ig的重链结构不同，这决定 了它们的抗原性也不同。IgG和IgM的重链分别称为Y(gama)链和μ(mu)链。IgG的结构见图。 ①木瓜酶裂解部位②胃蛋白酶裂解部位 重链和轻链的N端的氨基酸排列顺序因各种抗体而异，称为可变区，分别用州和儿表示。两者构 成抗体的抗原结合部位，只与相应的抗原决定簇匹配，发生特异性结合（见图），是抗体专一性结合 抗原的结构基础， IgG可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片段(Fb)。每个Fab都保 存结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一 区段称Fc段，无抗体活性，但具有IgG特有的抗原性。 IgG可被胃蛋白酶分解为两个片段，一个Fab双体，称F(ab')2,能和两个相同的抗原结合：另 片段类似FC,随后被分解成小分子多肽，无生物活性。 Ig是由五个单体组成的五聚体，含10个重链和10个轻链，具有10个抗原结合价，由于空间位置 的影响，只表现为五个抗原结合价。IgM分子量约为900000，IgG分子量约为150000。 4.7.2 定量测定 ELSIA 操作步骤复杂，影响反应因素较多，特别是固相载体的包被难达到各个体之间的一致，因此 在定量测定中，每批测试均须用一系列不同浓度的参考标准品在相同的条件下制作标准曲线。测定 大分子量物质的夹心法 ELISA，标准曲线的范围一般较宽，曲线最高点的吸光度可接近 2.0，绘制时 常用半对数纸，以检测物的浓度为横坐标，以吸光度为纵坐标，将各浓度的值逐点连接，所得曲线 一般呈 S 形，其头、尾部曲线趋于平坦，中央较呈直线的部分是最理想的检测区域。甲胎蛋白质 ELISA 测定的标准曲线示例见图 4-1。 测定小分子量物质常用竞争法（参见 2.2），其标准曲线中吸光度与受检物质的浓度呈负相关。标准 曲线的形状因试剂盒所用模式的差别而略有不同。ELISA 测定的标准曲线示例见图 4-2。注意图中横 坐标为对数关系，这更有利于测定系统的表达 生物谷讲座 2：ELISA 技术中的抗原与抗体的反应 抗体 1.2.1 抗体的结构 抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)。Ig 分五类，即 IgG、IgA、IgM、IgD 和 IgE。与免疫测定有关的 Ig 主要为 IgG 和 IgM。Ig 由两个轻链（L）和两个重链（H）的单体组成。 Ig 的轻链是相同的，有 κ（kappa）和 λ（Lambda）两种型别。五类 Ig 的重链结构不同，这决定 了它们的抗原性也不同。IgG 和 IgM 的重链分别称为 γ（gamma）链和 μ（mu）链。IgG 的结构见图。 ① 木瓜酶裂解部位 ② 胃蛋白酶裂解部位 重链和轻链的 N 端的氨基酸排列顺序因各种抗体而异，称为可变区，分别用 VH 和 VL 表示。两者构 成抗体的抗原结合部位，只与相应的抗原决定簇匹配，发生特异性结合（见图），是抗体专一性结合 抗原的结构基础。 IgG 可被木瓜蛋白酶分解为三个区段，其中两个相同的区段称抗原结合片段（Fab）。每个 Fab 都保 存结合抗原的能力，但只有一个抗原结合位点，是单价的，与抗原结合后不出现凝集或沉淀。另一 区段称 Fc 段，无抗体活性，但具有 IgG 特有的抗原性。 IgG 可被胃蛋白酶分解为两个片段，一个 Fab 双体，称 F（ab'）2，能和两个相同的抗原结合；另一 片段类似 Fc，随后被分解成小分子多肽，无生物活性。 IgM 是由五个单体组成的五聚体，含 10 个重链和 10 个轻链，具有 10 个抗原结合价，由于空间位置 的影响，只表现为五个抗原结合价。IgM 分子量约为 900000，IgG 分子量约为 150000