3 发酵菌种的筛选 专业基础 综合性实验 10 必修 4 乳酸的发酵 专业基础 综合性实验 10 必修 5 甜酒酿发酵 专业基础 综合性实验 4 必修 合计 48 五、实验内容及教学要求 《酶工程》部分： 实验一、酵母细胞蔗糖酶的分离纯化 (一)实验目的 学习酵母细胞的活化方法，细胞壁的破裂方法与原理，利用离心的方法分离自溶后的的粗酶液。 利用乙醇分级沉淀分级纯化酵母蔗糖酶的方法原理，利用透析袋除去小分子物质方法原理。并理解 酶的纯化过程中的如何防止酶的变形。学习用考马斯亮蓝G-250法测定酶分离纯化过程中总蛋白的 含量，并利用它会计算酶的比活力。学习3,5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶活力的原理及方法：理解 酶活力单位及酶活力的意义，并掌握酶活力和比活力的计算方法。 (二)实验仪器与材料 恒温震荡水浴锅，电子天平，高速冷冻离心机，722型分光光度计，制冰机，电磁炉，水浴锅： 酵母粉，透析袋。糖酶活力，并计算酶活力和比活力。 (三)实验内容 酵母细胞的活化后，再添加乙酸钠及甲苯自溶：利用低温冷冻离心机分离粗酶液，后除去甲苯， 收集粗酶液，并测定粗酶液的体积：蔗糖酶的纯化：(1)用10%乙酸调节粗酶抽提液的pH至4.5(2)32% 乙醇饱和度沉淀(347.5%的乙醇饱和度沉淀(4)透析(5)测量：测量透析后酶液体积。采用考 马斯亮蓝G250法测定粗酶液和透析后酶液中蛋白质含量：采用3,5-二硝基水杨酸法测定粗酶液和 透析后酶液中蔗 (四)实验教学建议 本实验实验时间长，环节多，要求学生提前预习，了解实验相关的原理，熟悉环节之间的关系 以及前后顺序。实验所用仪器多，学生需提前学习仪器使用规程以及注意事项，尤其是高速冷冻离 心机的使用。 实验二、 包埋法固定化枯草杆菌细胞 (一)实验目的 学习培养枯草杆菌的培养基配制方法、细胞培养及细胞收集方法。掌握包埋法固定化枯草杆菌 细胞的原理及操作方法。 (二)实验仪器与材料 恒温震荡水浴锅，电子天平，高压灭菌锅，超净工作台：枯草杆菌。 (三)实验内容 22 3 发酵菌种的筛选 专业基础 综合性实验 10 必修 4 乳酸的发酵 专业基础 综合性实验 10 必修 5 甜酒酿发酵 专业基础 综合性实验 4 必修 合计 48 五、实验内容及教学要求 《酶工程》部分： 实验一、 酵母细胞蔗糖酶的分离纯化 （一） 实验目的 学习酵母细胞的活化方法，细胞壁的破裂方法与原理，利用离心的方法分离自溶后的的粗酶液。 利用乙醇分级沉淀分级纯化酵母蔗糖酶的方法原理，利用透析袋除去小分子物质方法原理。并理解 酶的纯化过程中的如何防止酶的变形。学习用考马斯亮蓝 G-250 法测定酶分离纯化过程中总蛋白的 含量，并利用它会计算酶的比活力。学习 3，5-二硝基水杨酸法测定蔗糖酶活力的原理及方法；理解 酶活力单位及酶活力的意义，并掌握酶活力和比活力的计算方法。 （二）实验仪器与材料 恒温震荡水浴锅，电子天平，高速冷冻离心机，722 型分光光度计，制冰机，电磁炉，水浴锅； 酵母粉，透析袋。糖酶活力，并计算酶活力和比活力。 （三）实验内容 酵母细胞的活化后，再添加乙酸钠及甲苯自溶；利用低温冷冻离心机分离粗酶液，后除去甲苯， 收集粗酶液，并测定粗酶液的体积；蔗糖酶的纯化：(1)用 10%乙酸调节粗酶抽提液的 pH 至 4.5 (2)32％ 乙醇饱和度沉淀 (3)47.5％的乙醇饱和度沉淀 （4）透析 （5）测量：测量透析后酶液体积。采用考 马斯亮蓝 G250 法测定粗酶液和透析后酶液中蛋白质含量；采用 3，5-二硝基水杨酸法测定粗酶液和 透析后酶液中蔗 （四）实验教学建议 本实验实验时间长，环节多，要求学生提前预习，了解实验相关的原理，熟悉环节之间的关系 以及前后顺序。实验所用仪器多，学生需提前学习仪器使用规程以及注意事项，尤其是高速冷冻离 心机的使用。 实验二、 包埋法固定化枯草杆菌细胞 （一）实验目的 学习培养枯草杆菌的培养基配制方法、细胞培养及细胞收集方法。掌握包埋法固定化枯草杆菌 细胞的原理及操作方法。 （二）实验仪器与材料 恒温震荡水浴锅，电子天平，高压灭菌锅，超净工作台；枯草杆菌。 （三）实验内容