氮源浓度/gL1 生物量/gL 0.780.921.181.201.18 葡萄糖/ 15.711.85 8.2 透明质酸/gL1 0.160.220.260.240.23 透明质酸产率/gg10.00670.00770.00770.00710.0061 (二)种子培养基中碳源种类及浓度对透明质酸发酵的影响 碳源种类的确定 种子培养基中不同碳源对H23菌株发酵生产透明质酸的影响列于表62-4。采用葡萄糖为 种子培养基的碳源,接入发酵培养基后透明质酸产量最髙,其后依次是蔗糖和麦芽糖。而以 果糖、木糖、半乳糖为种子的碳源,效果较差。 表6-2-4种子培养基中的不同碳源组成对透明质酸发酵结果的影响 碳源种类 葡萄糖果糖蔗糖木糖半乳糖麦芽糖 透明质酸/gL10.220.120.200.110.150.19 2.葡萄糖浓度的确定 如表6-2-5所示,当葡萄糖的浓度为20gL时,种子液中细胞干重最高,但发酵后透明质 酸产量也最大。因此,采用葡萄糖为种子碳源,浓度为20gL。 表6-2-5种子培养基中不同葡萄糖浓度对发酵结果的影响 葡萄糖/gL 14 种子生物量/gL1 1.00 剩余葡萄糖/gL19.7 6.3 78 发酵透明质酸/gl 透明质酸产率/gg10.006300071 0.0069 0.0065 (三)种子培养基中金属离子及浓度对透明质酸发酵的影响 Mg2+的影响 对细胞来说,众多的金属离子当中,Mg2是最为重要的一种,它是许多酶活性中心不可 缺少的一部分。在EMP途径之中,磷酸烯醇式丙酮酸在丙酮酸激酶的催化下形成烯醇式丙酮 酸和ATP,是EMP途径的一个限速步骤,而Mg2+对于丙酮酸激酶来说是必不可少的。由于 链球菌缺乏一个完整的TCA循环,它的能量主要来自EMP途径,因此需要提供适量的Mg2, 保证H23菌株胞内EMP途径的酶高效运转,使菌体生长良好 表6-2-6MgSO47H2O浓度对发酵的影响 MgSO 7H2O/g L 1.0 2.0 种子 生物量/gLl 1.13 1.21 1.15 剩余葡萄糖/gL11.08 0.62 0.87 发酵 透明质酸/gL 透明质酸产率/ggl0.00740.00750.00830.0076 如表6-2-6所示,随着MgSO47HO添加量的增大,种子液中细胞干重逐渐增大,当 MgSO4ⅦH2O为2.0g/L时,种子液中细胞干重达到最大值,产透明质酸性能也最佳。 2.Mn2浓度的确定 与Mg2+作用相类似,Mm2也是一部分酶活性部位的组成成分。如表6-2-7所示9 氮源浓度 / gL -1 10 15 20 25 30 生物量 / gL -1 0.78 0.92 1.18 1.20 1.18 葡萄糖 / gL -1 15.7 11.8 5.5 6.2 8.2 透明质酸 / gL -1 0.16 0.22 0.26 0.24 0.23 透明质酸产率 / gg -1 0.0067 0.0077 0.0077 0.0071 0.0061 (二)种子培养基中碳源种类及浓度对透明质酸发酵的影响 1．碳源种类的确定 种子培养基中不同碳源对 H23 菌株发酵生产透明质酸的影响列于表 6-2-4。采用葡萄糖为 种子培养基的碳源，接入发酵培养基后透明质酸产量最高，其后依次是蔗糖和麦芽糖。而以 果糖、木糖、半乳糖为种子的碳源，效果较差。 表6-2-4 种子培养基中的不同碳源组成对透明质酸发酵结果的影响 碳源种类 葡萄糖 果糖 蔗糖 木糖 半乳糖 麦芽糖 透明质酸 / gL -1 0.22 0.12 0.20 0.11 0.15 0.19 2．葡萄糖浓度的确定 如表 6-2-5 所示，当葡萄糖的浓度为 20 g/L 时，种子液中细胞干重最高，但发酵后透明质 酸产量也最大。因此，采用葡萄糖为种子碳源，浓度为 20 g/L。 表 6-2-5 种子培养基中不同葡萄糖浓度对发酵结果的影响 葡萄糖 / gL -1 14 20 28 35 种子 生物量 / gL -1 1.00 1.25 1.02 1.15 发酵 剩余葡萄糖 / gL -1 9.7 6.3 7.8 12.8 透明质酸 / gL -1 0.19 0.24 0.22 0.18 透明质酸产率 / gg -1 0.0063 0.0071 0.0069 0.0065 (三)种子培养基中金属离子及浓度对透明质酸发酵的影响 1．Mg2+的影响 对细胞来说，众多的金属离子当中，Mg2+是最为重要的一种，它是许多酶活性中心不可 缺少的一部分。在 EMP 途径之中，磷酸烯醇式丙酮酸在丙酮酸激酶的催化下形成烯醇式丙酮 酸和 ATP，是 EMP 途径的一个限速步骤，而 Mg2+对于丙酮酸激酶来说是必不可少的。由于 链球菌缺乏一个完整的 TCA 循环，它的能量主要来自 EMP 途径，因此需要提供适量的 Mg2+， 保证 H23 菌株胞内 EMP 途径的酶高效运转，使菌体生长良好。 表 6-2-6 MgSO47H2O 浓度对发酵的影响 MgSO47H2O /gL -1 1.0 1.5 2.0 2.5 种子 生物量 /gL -1 1.02 1.13 1.21 1.15 发酵 剩余葡萄糖 /gL -1 1.08 0.75 0.62 0.87 透明质酸 /gL -1 0.22 0.24 0.28 0.24 透明质酸产率 /gg -1 0.0074 0.0075 0.0083 0.0076 如表 6-2-6 所示，随着 MgSO47H2O 添加量的增大，种子液中细胞干重逐渐增大，当 MgSO47H2O 为 2.0 g/L 时，种子液中细胞干重达到最大值，产透明质酸性能也最佳。 2．Mn2+浓度的确定 与 Mg2+作用相类似，Mn2+也是一部分酶活性部位的组成成分。如表 6-2-7 所示