MnSO·4HO的浓度为0.10g/L时,种子液中细胞干重最大,增大浓度,细胞干重下降,说明 过高的MnSO44H2O浓度会抑制菌体生长。进行发酵试验,发现MnSO4HQO浓度为0.1g/L 的种子,其发酵生产性能也达到最佳状态,透明质酸的产量及产率系数也均为最高,无论增 加或是降低MnSO44H2O的浓度,发酵结果均有较大的下降 表6-2-7种子中MnSO44H2O浓度对发酵的影响 InSO4 4H2O/g L 0.10 Seed 生物量/gL1 0.9181.1310.8540.8490.790 葡萄糖/gL11.080.75093 发酵 透明质酸/gL10.1850.2710.2400.2030.162 透明质酸产率/gg0.00630.00830.00780.007200064 三、种子生长过程曲线和种龄的确定 种子质量的优劣不仅与培养基组成有关,还与种子的生理性状有关。当传代菌种接入种 子瓶(罐)中,要经过延滞期,对数生长期,静止期和死亡期。种龄太低的种子接入发酵罐中, 往往会出现前期生长缓慢、整个发酵周期延长、产物开始形成的时间推迟,甚至造成异常发 酵:种龄过长则会引起菌体过早自溶,导致产物生产能力下降。通常,种龄以菌体处于生命 力极为旺盛的对数生长期后期,且培养液中细胞干重还未达到最高峰时较为合适,这样既可 保持高的细胞活力,又可获得尽可能多的细胞干重 图621为Sz00 epidemicus H23在种子培养基的生长过程曲线。从图中可以看出,菌种 接入种子培养基3~4h后进入对数生长期,18h左右细胞干重达到最高峰,在此之后,细胞 干重开始下降。因此选择接种种龄为15~16h 05101520230 t/h 图6-2-1透明质酸生产菌株H23的种子生长曲线 四、发酵培养基组成对透明质酸发酵的影响 (一)不同氮源对透明质酸发酵的影响 如表6-2-8所示,当发酵培养基的氮源采用酵母粉时,菌体生长最好,透明质酸产量也最 高,接近03g/。酵母粉和蛋白胨的混合氮源及玉米浆居其次,其余均很低。不加氮源仅利用 种子中带入的氮源也可生长一定量菌体和合成一定的透明质酸。而采用无机氮源(NH4)SO时, 透明质酸产量和细胞干重都是实验组中最低的,说明(NH4)sO4对菌体的代谢有抑制。表6-28 还表明采用不同氮源时,细胞干重高,透明质酸产量也高。很多链球菌对营养要求比较高, 而酵母粉中还含有大量的生长因子,这也是 Streptococcus zooepidemicus H23以酵母粉为氮源时10 MnSO44H2O 的浓度为 0.10 g/L 时，种子液中细胞干重最大，增大浓度，细胞干重下降，说明 过高的 MnSO44H2O 浓度会抑制菌体生长。进行发酵试验，发现 MnSO44H2O 浓度为 0.1 g/L 的种子，其发酵生产性能也达到最佳状态，透明质酸的产量及产率系数也均为最高，无论增 加或是降低 MnSO44H2O 的浓度，发酵结果均有较大的下降。 表 6-2-7 种子中 MnSO44H2O 浓度对发酵的影响 MnSO44H2O /gL -1 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 Seed 生物量 /gL -1 0.918 1.131 0.854 0.849 0.790 发酵 葡萄糖 /gL -1 1.08 0.75 0.93 1.17 1.45 透明质酸 /gL -1 0.185 0.271 0.240 0.203 0.162 透明质酸产率 /gg -1 0.0063 0.0083 0.0078 0.0072 0.0064 三、种子生长过程曲线和种龄的确定 种子质量的优劣不仅与培养基组成有关，还与种子的生理性状有关。当传代菌种接入种 子瓶(罐)中，要经过延滞期，对数生长期，静止期和死亡期。种龄太低的种子接入发酵罐中， 往往会出现前期生长缓慢、整个发酵周期延长、产物开始形成的时间推迟，甚至造成异常发 酵；种龄过长则会引起菌体过早自溶，导致产物生产能力下降。通常，种龄以菌体处于生命 力极为旺盛的对数生长期后期，且培养液中细胞干重还未达到最高峰时较为合适，这样既可 保持高的细胞活力，又可获得尽可能多的细胞干重。 图 6-2-1 为 S. zooepidemicus H23 在种子培养基的生长过程曲线。从图中可以看出，菌种 接入种子培养基 3～4 h 后进入对数生长期，18 h 左右细胞干重达到最高峰，在此之后，细胞 干重开始下降。因此选择接种种龄为 15~16 h。 生物量 /gL-1 t /h 图 6-2-1 透明质酸生产菌株 H23 的种子生长曲线 四、发酵培养基组成对透明质酸发酵的影响 (一)不同氮源对透明质酸发酵的影响 如表6-2-8所示，当发酵培养基的氮源采用酵母粉时，菌体生长最好，透明质酸产量也最 高，接近0.3 g/L。酵母粉和蛋白胨的混合氮源及玉米浆居其次，其余均很低。不加氮源仅利用 种子中带入的氮源也可生长一定量菌体和合成一定的透明质酸。而采用无机氮源(NH4)2SO4时， 透明质酸产量和细胞干重都是实验组中最低的，说明(NH4)2SO4对菌体的代谢有抑制。表6-2-8 还表明采用不同氮源时，细胞干重高，透明质酸产量也高。很多链球菌对营养要求比较高， 而酵母粉中还含有大量的生长因子，这也是Streptococcus zooepidemicus H23以酵母粉为氮源时