6.4微生物的菌种选育 6.4.3基因工程技术用于工业菌种改良 将某一生物体的遗传信息在细胞外与载体相连接，构建成一个新的重组DA分子， 然后将其转入另一些生物体细胞中，使引入的供体DNA片段成为受体遗传物质的一部分， 其所带的遗传信息得以表达或创建出一个新物种 特点：体外重组、远缘杂交、定向性 基因工程主要步骤（六步）：日的基因的狄得：载体的选择：含日的基因的DNA片 段克隆入载体中构成重组载体：将重组载体引入宿主细胞内进行复制、扩增：筛选出带有 重组日的基因的转化细胞：鉴定外源基因的表达产物。 一、目的基因分离的途径 1、从供体细胞的DNA中分离 (1)限制性内切酶切 (2)特异性DNA片段的PCR扩增：以DNA一条链为模板，在多聚酶催化下，通 过碱基配对使寡核甘酸引物向3'方向延长合成模板的互补链 整个程分一步：变性、退火、延伸 PCR引物是PCR过程中与模板DNA部分序列互补，并能引导模板DNA互补链合成 的 种脱氧核苷酸寡聚体，其3端必须具有游离的一O1基团。 聚合酶链式反应，英文Polymease Chain Reaction(PCR),是体外酶促合成特 异DNA片段的一种方法，由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个 周期，循环进行，使日的DNA得以迅速扩增，具有特异性强、灵敏度高、操作简 便、省时等特点。它不仅可用于基因分离、克降和核酸序列分析等基础研究，还 可用于矢病的诊断或仁何有DNA、RNA的地方。PCR又称无细跑分子克降或特 异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术。 2、构建cDNA文库(cDNA1 library)和基因组文库分离日的基因 DNA文库：某生物所转录的全部mRNA经反转录形成的cDNA片段，再复制成 双链cDNA,与合适的克隆载体连接，通过转导（转化）转入受体茵，这种包含某生物基 因组全部基因cDNA的受体菌群体称为cDNA文库。 基因文库(genomic DNA library):存在于转化细菌中、由克隆载体所携带的所有基 因组DNA的集合。涵盖基因组的全部基因信息，主要用于真核微生物、动植物中特定基 10