江大学网络教育精品资源共享课 液lml,摇匀;30秒钟內如显色,与水杨酸对照液(0.lmg/m)lml同法制得结果比较,不 得更深(0.1% 药物中游离水杨酸含量未知时,应取水杨酸系列对照液做标准曲线进行半定量,以求得 样品中游离水杨酸的含量范围,然后根据实际样品质量,参考药典限度要求,确定本产品中 游离水杨酸的限量 比色法为2005年版《中国药典》方法,其只能检查游离水杨酸的量,不能控制其他有 关物质的量。而且在样品溶解过程中,易发生水解反应,可能导致游离水杨酸含量偏高。2010 年版中国药典改用HPLC法检查 (2)HPLC法游离水杨酸和有关物质的检查 ①色谱条件初步选择:取合成原料、中间体、粗品、成品适量,分别用含1%冰醋酸的 甲醇溶解,配制成0.I~ Img/ml的溶液(注意:阿司匹林易水解,不能用含水流动相作溶剂)。 以ODS柱为分析柱,检测波长可考虑阿司匹林和水杨酸均有较大吸收的波长处,待流动相 条件基本确定后,最根据检测灵敏度要求进行调整。首先考察流动相中有机相种类,可从最 常用的甲醇开始选择,如有必要,改用乙腈、四氢呋喃,或几种有机溶剂合用。同时选择流 动相中有机相比例,对于极性较大的成分,可从50%的有机相开始,根据色谱峰的保留时 间,降低有机相比例或升高有机相比例。一般有机相比例宜从高到低进行选择,这样样品出 峰较快,可以在较短时间內获得较合适的有杋相比例。阿司匹林、水杨酸均具酸性,流动相 中宜添加1%~5%的冰醋酸(注意:若用缓冲盐,应添加到水相中,并测定pH值,常规 ODS柱使用pH为2~8)。取合成粗品,注入高效液相色谱仪,观察各成分峰形状、保留时 间、分离情况,调整流动相成分和比例,使柱效、分离度达到一定要求,保留时间适中。 ②杂质归属与方法专属性考察:取空白溶剂(配制样品溶液的溶剂)、合成原料、中间 体、粗品、成品溶液,在上述基本确定的色谱条件下进行分析,比较色谱图,确定样品溶剂 峰、水杨酸峰、其它有关杂质峰,必要时,可将有关杂质添加到样品液中,以确定杂质的归 属,同时将成品的色谱图与粗品色谱图进行比较,分析最后纯化精制工序的效果,如果杂质 峰较大,就有必要考虑合成工艺或精制方法的改进。在这步分析中应尽可能记录较长的层析 时间,以便确定合理的色谱图记录时间。 同时采用破坏试验,以产生可能的降解产物,考察方法的专属性。取成品,加适宜浓度 的酸、碱或过氧化氢溶液,放置一定时间或加热一定时间(视样品稳定性而异),或采用烘 箱烘烤、日光照射等,然后制成一定浓度溶液,进样分析,破坏程度以样品主峰分解20% 以内为宜。观察产生的杂质峰是否完全分离,并同时取破坏用空白试剂进样分析,以排除干浙江大学网络教育精品资源共享课 液 1ml，摇匀；30 秒钟内如显色，与水杨酸对照液（0.1mg/ml）1ml 同法制得结果比较，不 得更深（0.1%）。 药物中游离水杨酸含量未知时，应取水杨酸系列对照液做标准曲线进行半定量，以求得 样品中游离水杨酸的含量范围，然后根据实际样品质量，参考药典限度要求，确定本产品中 游离水杨酸的限量。 比色法为 2005 年版《中国药典》方法，其只能检查游离水杨酸的量，不能控制其他有 关物质的量。而且在样品溶解过程中，易发生水解反应，可能导致游离水杨酸含量偏高。2010 年版中国药典改用 HPLC 法检查。 （2）HPLC 法——游离水杨酸和有关物质的检查 ①色谱条件初步选择: 取合成原料、中间体、粗品、成品适量，分别用含 1%冰醋酸的 甲醇溶解，配制成 0.1～1mg/ml 的溶液（注意：阿司匹林易水解，不能用含水流动相作溶剂）。 以 ODS 柱为分析柱，检测波长可考虑阿司匹林和水杨酸均有较大吸收的波长处，待流动相 条件基本确定后，最根据检测灵敏度要求进行调整。首先考察流动相中有机相种类，可从最 常用的甲醇开始选择，如有必要，改用乙腈、四氢呋喃，或几种有机溶剂合用。同时选择流 动相中有机相比例，对于极性较大的成分，可从 50%的有机相开始，根据色谱峰的保留时 间，降低有机相比例或升高有机相比例。一般有机相比例宜从高到低进行选择，这样样品出 峰较快，可以在较短时间内获得较合适的有机相比例。阿司匹林、水杨酸均具酸性，流动相 中宜添加 1%～5%的冰醋酸（注意：若用缓冲盐，应添加到水相中，并测定 pH 值，常规 ODS 柱使用 pH 为 2～8）。取合成粗品，注入高效液相色谱仪，观察各成分峰形状、保留时 间、分离情况，调整流动相成分和比例，使柱效、分离度达到一定要求，保留时间适中。 ②杂质归属与方法专属性考察: 取空白溶剂（配制样品溶液的溶剂）、合成原料、中间 体、粗品、成品溶液，在上述基本确定的色谱条件下进行分析，比较色谱图，确定样品溶剂 峰、水杨酸峰、其它有关杂质峰，必要时，可将有关杂质添加到样品液中，以确定杂质的归 属，同时将成品的色谱图与粗品色谱图进行比较，分析最后纯化精制工序的效果，如果杂质 峰较大，就有必要考虑合成工艺或精制方法的改进。在这步分析中应尽可能记录较长的层析 时间，以便确定合理的色谱图记录时间。 同时采用破坏试验，以产生可能的降解产物，考察方法的专属性。取成品，加适宜浓度 的酸、碱或过氧化氢溶液，放置一定时间或加热一定时间（视样品稳定性而异），或采用烘 箱烘烤、日光照射等，然后制成一定浓度溶液，进样分析，破坏程度以样品主峰分解 20% 以内为宜。观察产生的杂质峰是否完全分离，并同时取破坏用空白试剂进样分析，以排除干