第五章 鱼精的利用 主要内容 ⚫ ⚫ 自鱼精中提取 DNA-Na ⚫ ⚫ 鱼精蛋白 ⚫ ⚫ 目标要求 ⚫ ⚫ 掌握自鱼精中提取 DNA-Na 的工艺 ⚫ ⚫ 掌握鱼精蛋白的工艺 学时建议 2 学时 一|、自鱼精中提取 DNA-Na （一）、概述 DNA 及其钠盐（DNA-Na）是遗传工程研究的重要材料，也是常用的生化试剂和医药制品 的原料。由 DNA 降解而成的 5′—脱氧核甘酸，在遗传工程上可用来合成一级结构模拟药 物，在临床上能控制一些贵遗传复制失调的疾病；在医药学上，可作为类抗病毒物，能起到 调节细胞功能，对治疗急慢性肝炎、肾炎、肌肉萎缩、心血压计管病、血小板减少症和白血 球减少症均有一定疗效；还可作为一类抗癌新药畏助应用于临床。 DNA 的制备，在五十年代是 Zamenhoff 等用不同方法从生产牛肉膏的下脚料小牛胸腺中提 取的，后来牛肉膏被蛋白胨取而代之。人们开始不断地探寻新的生产原料和方法。/国外亲 从各种微生物中分离制取过 DNA，但由于原料来源不便，未能广泛采用。1972 年德国专利 报告了鲱鱼精巢 DNA 的制备。在我国，早在 1958 年，中国科学院、上海鱼品厂等就以黄 鱼精巢为原料制取了 DNA-Na。80 年代前后，浙江水产学院分别由鲐鱼、蓝圆、大黄鱼和 马面的精巢中提取了 DNA-Na，并对其制备工艺进行了成功的筛选研究。 （二）、原料 制备 DNA 的原料应该符合下列几个条件： 1、DNA 含量高而且不源方便； 2、原料内活性去氧化核糖核酸酶的含量应该低，否则在原料贮藏及制备过程中，引起 DNA 的解聚作用； 3、原料中其它杂质，如 RNA、杂蛋白质及碳水化合物等含量要少，否则使提纯过程延长； 4、DNA 与蛋白质之间的结合强度应该是较弱的，否则难以分离 DNA 与蛋白质，在用变性 剂去蛋白质时，往往要重复多次主能把蛋白除尽。多年来的实践证明，除了犊牛胸腺外，水 产品中，淡水鱼，鱼等精巢均是较理想的原料，其次为蓝圆、大黄鱼和马面鱼精巢。 根据上面四个原则，很自然地提出了对原料新鱼并的要求，因为新鲜的才不会被解聚。而要 想达到 DNA 含量高的要求，则必须在适当的生长时期采集，并且要设法抑制 Dnase 的解聚 活力。 很显然，保藏原料具有很重要的意义，在鱼汛季节拥有大量的新鱼鱼精必须用低温冷藏，或 将鱼精先加工成核精蛋白加以保存。 （三）、DNA-Na 提取工艺 制取 DNA-Na 的具体方法很多，但各种方法最根本的均可归结为下面几步： 第一步：借机械或化学的历代法把组织的细胞破坏，并从中分离出纯净的 DNA-蛋白质。 第二步：以 DNA-蛋白质为原烂漫，把它分成 DNA 与蛋白质两部分。 第三步：把 DNA 部分由离心分出（离心液），并对其重复纯化，去除蛋白质等杂质。 第四步：将 DNA 钠盐干燥。 酚与 CHCL3-5%SDS 复合法，是浙江水产学院在吸取国外各种方法长处的基础上，经筛选改 进而提出的适合工业化生产的制备工艺，它具有产率高，质量稳定，操作方便，周期短，成 本较低诸优点。 工艺流程 原料 → 匀浆 → 搅拌→ 酚法变性 → 静置 → 离心或过滤 → 用 5%SDS 与 CHCL3 作第 二次变性 → 离心或过滤 → 析出 DNANa 纤维 → 洗涤 →真空干燥 → 产品检验→ 成第五章 鱼精的利用 主要内容 ⚫ ⚫ 自鱼精中提取 DNA-Na ⚫ ⚫ 鱼精蛋白 ⚫ ⚫ 目标要求 ⚫ ⚫ 掌握自鱼精中提取 DNA-Na 的工艺 ⚫ ⚫ 掌握鱼精蛋白的工艺 学时建议 2 学时 一|、自鱼精中提取 DNA-Na （一）、概述 DNA 及其钠盐（DNA-Na）是遗传工程研究的重要材料，也是常用的生化试剂和医药制品 的原料。由 DNA 降解而成的 5′—脱氧核甘酸，在遗传工程上可用来合成一级结构模拟药 物，在临床上能控制一些贵遗传复制失调的疾病；在医药学上，可作为类抗病毒物，能起到 调节细胞功能，对治疗急慢性肝炎、肾炎、肌肉萎缩、心血压计管病、血小板减少症和白血 球减少症均有一定疗效；还可作为一类抗癌新药畏助应用于临床。 DNA 的制备，在五十年代是 Zamenhoff 等用不同方法从生产牛肉膏的下脚料小牛胸腺中提 取的，后来牛肉膏被蛋白胨取而代之。人们开始不断地探寻新的生产原料和方法。/国外亲 从各种微生物中分离制取过 DNA，但由于原料来源不便，未能广泛采用。1972 年德国专利 报告了鲱鱼精巢 DNA 的制备。在我国，早在 1958 年，中国科学院、上海鱼品厂等就以黄 鱼精巢为原料制取了 DNA-Na。80 年代前后，浙江水产学院分别由鲐鱼、蓝圆、大黄鱼和 马面的精巢中提取了 DNA-Na，并对其制备工艺进行了成功的筛选研究。 （二）、原料 制备 DNA 的原料应该符合下列几个条件： 1、DNA 含量高而且不源方便； 2、原料内活性去氧化核糖核酸酶的含量应该低，否则在原料贮藏及制备过程中，引起 DNA 的解聚作用； 3、原料中其它杂质，如 RNA、杂蛋白质及碳水化合物等含量要少，否则使提纯过程延长； 4、DNA 与蛋白质之间的结合强度应该是较弱的，否则难以分离 DNA 与蛋白质，在用变性 剂去蛋白质时，往往要重复多次主能把蛋白除尽。多年来的实践证明，除了犊牛胸腺外，水 产品中，淡水鱼，鱼等精巢均是较理想的原料，其次为蓝圆、大黄鱼和马面鱼精巢。 根据上面四个原则，很自然地提出了对原料新鱼并的要求，因为新鲜的才不会被解聚。而要 想达到 DNA 含量高的要求，则必须在适当的生长时期采集，并且要设法抑制 Dnase 的解聚 活力。 很显然，保藏原料具有很重要的意义，在鱼汛季节拥有大量的新鱼鱼精必须用低温冷藏，或 将鱼精先加工成核精蛋白加以保存。 （三）、DNA-Na 提取工艺 制取 DNA-Na 的具体方法很多，但各种方法最根本的均可归结为下面几步： 第一步：借机械或化学的历代法把组织的细胞破坏，并从中分离出纯净的 DNA-蛋白质。 第二步：以 DNA-蛋白质为原烂漫，把它分成 DNA 与蛋白质两部分。 第三步：把 DNA 部分由离心分出（离心液），并对其重复纯化，去除蛋白质等杂质。 第四步：将 DNA 钠盐干燥。 酚与 CHCL3-5%SDS 复合法，是浙江水产学院在吸取国外各种方法长处的基础上，经筛选改 进而提出的适合工业化生产的制备工艺，它具有产率高，质量稳定，操作方便，周期短，成 本较低诸优点。 工艺流程 原料 → 匀浆 → 搅拌→ 酚法变性 → 静置 → 离心或过滤 → 用 5%SDS 与 CHCL3 作第 二次变性 → 离心或过滤 → 析出 DNANa 纤维 → 洗涤 →真空干燥 → 产品检验→ 成