高2个数量级以上,是一种很有前景的基因转移方法 四.基因治疗的临床试验 目前临床基因治疗试验的方案已达9百多个,受治疗的患者已有数千例 表21-3可见当前临床基因治疗( gene therapy)或广义地称基因转移( gene transfer)试验, 有三种类型,即治疗性、基因标记及非治疗性试验。后者将腺病毒载体注射于健康自愿者的 体内,观察机体对腺病毒载体的反应。这些方案的临床试验期( trial phases)极大多数为Ⅰ期 临床试验,Ⅲ期者仅仅4个方案。说明基因治疗临床试验尚处于未成熟阶段 (一)基因标记 目前常用的基因标记方法是将含neoR基因的重组逆转录病毒载体在体外转导细胞,然后 回输至病人体内,可以很方便地跟踪这种标记细胞的命运,用来硏究许多其他方法不能回答 的体细胞移植的生物学问题 美国第一个被批准基因标记的临床研究计划是NIH的 Rosenberg等的肿瘤浸润淋巴细胞 ( tumor infiltrating lymphocytes,TIL)基因标记实验。他将恶性黑色素瘤组织或转移的淋巴结 制成单细胞悬液,在ⅡL-2的作用下淋巴细胞可成倍增殖而肿瘤细胞及其他类型细胞则死亡。 这种TL能特异杀伤肿瘤细胞。先在体外将含有neoR基因的逆转录病毒载体转导TL,该载 体能整合至TL的基因组,故子代的TL也含有neoR基因,能在含抗生素G418的培养液中 生长,便于筛选:也可用PCR检测neo基因是否存在,以跟踪回输体内的TL的去处。 将这种基因修饰过的TL注射于黑色素瘤患者,可以研究TL在体内各组织器官、血循 环细胞、淋巴结、肿瘤组织的分布情况;特别感兴趣的是观察TL是否能靶向肿瘤组织;同 时也可以研究TL在体内存活期的长短:以及了解这种体外基因修饰过的TLL是否会自主生 长和恶变?注射后对人体是否有害?这些问题的阐明可为基因治疗打基础。结果发现基因修 饰过的1L在体外不会自主增殖,说明没有恶变。在注射后的头3周,用PCR可测出外周血 存在着含有neoB基因的单核细胞,有的长至60d尚可测出。在注射后3d活检的肿瘤组织也可 测出有基因修饰过的TIL的存在。有人对其他细胞如骨髓细胞、肝细胞和细胞毒淋巴细胞等 进行标记研究。 (二)单基因疾病12 高２个数量级以上，是一种很有前景的基因转移方法。 四. 基因治疗的临床试验 目前临床基因治疗试验的方案已达 9 百多个，受治疗的患者已有数千例 表 21-3 可见当前临床基因治疗（gene therapy）或广义地称基因转移（gene transfer）试验， 有三种类型，即治疗性、基因标记及非治疗性试验。后者将腺病毒载体注射于健康自愿者的 体内，观察机体对腺病毒载体的反应。这些方案的临床试验期（trial phases）极大多数为Ｉ期 临床试验，Ⅲ期者仅仅４个方案。说明基因治疗临床试验尚处于未成熟阶段。 （一）基因标记 目前常用的基因标记方法是将含 neoR 基因的重组逆转录病毒载体在体外转导细胞，然后 回输至病人体内，可以很方便地跟踪这种标记细胞的命运，用来研究许多其他方法不能回答 的体细胞移植的生物学问题。 美国第一个被批准基因标记的临床研究计划是 NIH 的 Rosenberg 等的肿瘤浸润淋巴细胞 （tumor infiltrating lymphocytes, TIL）基因标记实验。他将恶性黑色素瘤组织或转移的淋巴结 制成单细胞悬液，在 IL-2 的作用下淋巴细胞可成倍增殖而肿瘤细胞及其他类型细胞则死亡。 这种 TIL 能特异杀伤肿瘤细胞。先在体外将含有 neoR基因的逆转录病毒载体转导 TIL，该载 体能整合至 TIL 的基因组，故子代的 TIL 也含有 neoR基因，能在含抗生素 G418 的培养液中 生长，便于筛选；也可用 PCR 检测 neoR基因是否存在，以跟踪回输体内的 TIL 的去处。 将这种基因修饰过的 TIL 注射于黑色素瘤患者，可以研究 TIL 在体内各组织器官、血循 环细胞、淋巴结、肿瘤组织的分布情况；特别感兴趣的是观察 TIL 是否能靶向肿瘤组织；同 时也可以研究 TIL 在体内存活期的长短；以及了解这种体外基因修饰过的 TIL 是否会自主生 长和恶变？注射后对人体是否有害？这些问题的阐明可为基因治疗打基础。结果发现基因修 饰过的 TIL 在体外不会自主增殖，说明没有恶变。在注射后的头 3 周，用 PCR 可测出外周血 存在着含有 neoR基因的单核细胞，有的长至 60d 尚可测出。在注射后 3d 活检的肿瘤组织也可 测出有基因修饰过的 TIL 的存在。有人对其他细胞如骨髓细胞、肝细胞和细胞毒淋巴细胞等 进行标记研究。 （二）单基因疾病