上述病毒载体最大的特点是能高效转移外源目的基因,但是也存在着许多的局限性,特 别是免疫原性强和可能造成细胞突变危险。因此发展非病毒载体倍受基因治疗研究者的注 借助物理、化学方法或直接将外源基因导入宿主细胞内。 脂质体( liposome)主要是由天然磷脂和胆固醇类衍生物组成类似生物膜的脂质双分子层 包围水相形成的闭合囊泡。 脂质体有两类:一类为阳离子脂质体,表面带正电荷,由于DNA带负电,因此借正电荷 的作用,可以浓集和缩合DNA,形成脂质体DNA复合物( lipoplex)可携带的基因不受DNA 大小的限制,见图21-9。日前基因治疗所用的脂质体都是阳离子脂质体。另一类为带负电 脂质体,表面带负电,DNA或其他药物被包埋在内部水相中。 由于脂质体具有类似生物膜的性质,因此当脂质体DNA复合物与细胞膜接触后,通过胞 吞作用( endocytosis)而进入胞内 脂质体载体除上述介导外源基因转移不受大小限制外,最大的优点为无生物源性,无毒 性,更安全可靠。但是转染效率很低,而且是短暂表达。 (四)裸DNA 裸DNA( naked dNA),即将外源基因构建于真核表达质粒,借助物理的或机械方法直接 将其导入宿主组织细胞内。横纹肌和心肌摄取裸DNA的效率较高。若外源基因表达产物可激 发机体免疫反应,以防治某些疾病,可称为DNA疫苗( DNA vaccine),是一种非常有希望的 新型疫苗。 直接注射裸DNA转染效率不高,常借助一些物理方法。 基因枪( gene gun),通过高压放电产生强烈的冲击波( shock wave),作用于被金包埋的 DNA微粒,使DNA微粒加速运动,即颗粒轰击( particle bombardment)而穿透组织细胞,此 法不但可用于体外转移基因,而且已用于临床将表达ⅡL-12质粒导入浅表肿瘤组织 矩形波电穿孔仪( square electroporator)这种仪器能产生低电压的矩形波,使细胞穿孔 让DNA进入,因为产生的仅是使细胞穿孔的矩形波,可避免一般电穿孔仪产生的高电压造成 细胞损伤的缺点,电压的范围为5-500V,加压间隔为100毫秒1秒。这种仪器可用于体外基 因转移,也可用于体内组织器官的基因转移,据报道对肌肉组织的转移效率比直接注射DNA 1111 上述病毒载体最大的特点是能高效转移外源目的基因，但是也存在着许多的局限性，特 别是免疫原性强和可能造成细胞突变危险。因此发展非病毒载体倍受基因治疗研究者的注意。 借助物理、化学方法或直接将外源基因导入宿主细胞内。 脂质体（liposome）主要是由天然磷脂和胆固醇类衍生物组成类似生物膜的脂质双分子层 包围水相形成的闭合囊泡。 脂质体有两类：一类为阳离子脂质体，表面带正电荷，由于 DNA 带负电，因此借正电荷 的作用，可以浓集和缩合 DNA，形成脂质体 DNA 复合物（lipoplex）可携带的基因不受 DNA 大小的限制，见图２１－9。目前基因治疗所用的脂质体都是阳离子脂质体。另一类为带负电 脂质体，表面带负电，DNA 或其他药物被包埋在内部水相中。 由于脂质体具有类似生物膜的性质，因此当脂质体 DNA 复合物与细胞膜接触后，通过胞 吞作用（endocytosis）而进入胞内。 脂质体载体除上述介导外源基因转移不受大小限制外，最大的优点为无生物源性，无毒 性，更安全可靠。但是转染效率很低，而且是短暂表达。 （四）裸 DNA 裸 DNA（naked DNA），即将外源基因构建于真核表达质粒，借助物理的或机械方法直接 将其导入宿主组织细胞内。横纹肌和心肌摄取裸 DNA 的效率较高。若外源基因表达产物可激 发机体免疫反应，以防治某些疾病，可称为 DNA 疫苗（DNA vaccine），是一种非常有希望的 新型疫苗。 直接注射裸 DNA 转染效率不高，常借助一些物理方法。 基因枪（gene gun），通过高压放电产生强烈的冲击波（shock wave），作用于被金包埋的 DNA 微粒，使 DNA 微粒加速运动，即颗粒轰击（particle bombardment）而穿透组织细胞，此 法不但可用于体外转移基因，而且已用于临床将表达 IL-12 质粒导入浅表肿瘤组织。 矩形波电穿孔仪（square electroporator）这种仪器能产生低电压的矩形波，使细胞穿孔， 让 DNA 进入，因为产生的仅是使细胞穿孔的矩形波，可避免一般电穿孔仪产生的高电压造成 细胞损伤的缺点，电压的范围为 5-500Ｖ，加压间隔为 100 毫秒-1 秒。这种仪器可用于体外基 因转移，也可用于体内组织器官的基因转移，据报道对肌肉组织的转移效率比直接注射 DNA