物和产物浓度变化对酶反应速度的影响,人们采用酶反应的初速度作为衡量的指标。 从理论上来说,作出反应时间对反应物变化量的曲线,从 近0处作曲线的切线,则切线的斜率代表初速度。但实际上切 线无法作准确。 实际使用的初速度测定方法有以下几种 531.1高底物浓度测定法 反应时间 高底物浓度测定法即零级反应近似法。它采用S]>10Km的条件,在V=mS 中,Km Kn +s 可以忽略不计,Ⅴ≈Vm,即与零级反应近似,V为一恒定值,此法必须在无高底物浓度抑制时 才适用,为了避免产物抑制,应在反应的初期测定。 53.1.2低底物浓度测定法 低底物浓度测定法即一级反应近似法。它采用[S]< Km的条件,在_Vn[S] 10 Kn+s 母中的S]可以忽略不计,V=m[S],在不同[S]时测定V,以V对S作图,直线部分的斜率 Kn°在直线部分,[S]乘以得V。 为 531.3使用不同酶量的测定法 反应时间(分钟 酶液量(u1) 在加不同酶量的情况下测 反应速度,作出产物生成量对反画3 0000 应时间的图,然后以酶量对反应 速度作图,此反应速度为反应了 反应时间〔分钟) 液量(1) 不同时间的速度平均值,以不同 的反应时间分别作曲线,在直线范围的酶量和反应时间对应的反应速度可看作初速度 532[]对反应速度的影响 在[S过量的情况下,V对[E成正比;而在[E一定时,(S]与V成双曲线关系4 物和产物浓度变化对酶反应速度的影响，人们采用酶反应的初速度作为衡量的指标。 从理论上来说，作出反应时间对反应物变化量的曲线，从 近 0 处作曲线的切线，则切线的斜率代表初速度。但实际上切 线无法作准确。 实际使用的初速度测定方法有以下几种： 5.3.1.1 高底物浓度测定法 高底物浓度测定法即零级反应近似法。它采用[S]＞10Km 的条件，在 [ ] [ ] K S V S V m m + = 中，Km 可以忽略不计，V≈Vm，即与零级反应近似，V 为一恒定值，此法必须在无高底物浓度抑制时 才适用，为了避免产物抑制，应在反应的初期测定。 5.3.1.2 低底物浓度测定法 低底物浓度测定法即一级反应近似法。它采用[S]＜ 10 1 Km 的条件，在 [ ] [ ] K S V S V m m + = 中，分 母中的[S]可以忽略不计， [S] K V V m m = ，在不同[S]时测定 V，以 V 对[S]作图，直线部分的斜率 为 m m K V 。在直线部分，[S]乘以 m m K V 得 V。 5.3.1.3 使用不同酶量的测定法 在加不同酶量的情况下测 反应速度，作出产物生成量对反 应时间的图，然后以酶量对反应 速度作图，此反应速度为反应了 不同时间的速度平均值，以不同 的反应时间分别作曲线，在直线范围的酶量和反应时间对应的反应速度可看作初速度。 5.3.2 [E]对反应速度的影响 在[S]过量的情况下，V 对[E]成正比；而在[E]一定时，[S]与 V 成双曲线关系