4.切除引物，填补缺口，连接修复 当新形成的冈崎片段延长至一定长度，其3'-OH端与前面一条老片段的5'端接过 时，即发生下列变化：在DNA聚合酶I的作用下，在引物RNA与DNA片段的连接处 切断：切去RNA引物后留下的空隙，由DNA聚合酶I催化合成一段DNA填补上：在 DNA连接酶的作用下，连接相邻的DNA链：修复卷入DNA链的错配碱基。这样以两条 亲代DNA链为模板，各自形成一条新的DNA互补链，结果是形成了两个DNA双股螺 旋分子 二、逆向转录 以RNA为模板，按照RNA中的核苷酸顺序合成DNA,这与通常转录过程中遗传信 息流从DNA到RNA的方向相反，故称为逆转录((reverse transcription).在六十年代Temi 根据有关的实验结果提出，由RNA肿瘤病毒逆向转录为DNA前病毒，然后由DNA前 病毒再转录为RNA肿瘤病毒的设想，但当时未得到重视。直至1970年，Temin和Baltimore 各自在鸟类劳氏肉瘤病毒和小鼠白血病病毒等NA肿瘤病毒中找到了逆转录酶，才证明 了逆向转录过程。现在人们已发现各种高等真核生物的RNA肿瘤病毒都有逆转录酶。鸟 类的劳氏肉 的逆转录酶具有 子形式，分别为a 1B和B2,其中 B是主 要形式。a亚基分子量为63000，B亚基分子量为94000，ā亚基是B亚基的水解产物 只有a亚基具有酵活性。哺乳动物的RNA肿瘤病毒的逆转录酶一般为单亚基结构。如小 鼠白血病病毒中的逆转录蒋是分子量为70000的单条多肽链。逆转录南需要以RNA(或 DNA)为模板，以四种NT为原料，要求短特RNA(或DNA)作为物.出外还需碧 适当浓度的 一价阳真子 Mg2和Mn2, 沿5'一3'方向合成DNA,形成RNA-DNA杂交分 子（或DNA双链分子）。以后，再以RNA-DNA杂交分子中的DNA链为模板，在寄主 细胞的DNA聚合酶作用下，可合成另一条DNA互补链，这样便形成新的双链DNA分 平。 逆转录酶是一种多功能酶，它除了具有以RNA为模板的DNA聚合酶和以DNA为 模板的DNA聚合酶活性外还兼有RNaseH、DNA内切酶、DNA拓扑异构酶、DNA解链 酶和RNA结合的活性 逆转 录酶 的发现 表明遗传信息也可以从RNA传递到DNA 从而丰富了分子遗传中心法则的内容。 几乎所有真核生物的mRNA分子的3'末端都有一段多聚腺苷酸。当加入寡聚dT作 引物时，mRNA就可以成为逆转录酶的模板，在体外合成与其互补的DNA,称为cDNA。 这种方法已成为生物技术和分子生物学研究中最常见的方法之一。使逆转录酶得到广泛 的应用 三、DNA突变 NA突变是指DNA的减其顺序发生突然而永久性的变化，从而影响DNA的复制 并使DNA的转录和翻译也跟者改变，因而表现出异常的遗传特征。DNA的突变可以有 306 306 4． 切除引物，填补缺口，连接修复 当新形成的冈崎片段延长至一定长度，其 3′-OH 端与前面一条老片段的 5′端接近 时，即发生下列变化：在 DNA 聚合酶Ⅰ的作用下，在引物 RNA 与 DNA 片段的连接处 切断；切去 RNA 引物后留下的空隙，由 DNA 聚合酶Ⅰ催化合成一段 DNA 填补上；在 DNA 连接酶的作用下，连接相邻的 DNA 链；修复掺入 DNA 链的错配碱基。这样以两条 亲代 DNA 链为模板，各自形成一条新的 DNA 互补链，结果是形成了两个 DNA 双股螺 旋分子。 二、逆向转录 以 RNA 为模板，按照 RNA 中的核苷酸顺序合成 DNA，这与通常转录过程中遗传信 息流从 DNA 到 RNA 的方向相反，故称为逆转录（reverse transcription）。在六十年代 Temin 根据有关的实验结果提出，由 RNA 肿瘤病毒逆向转录为 DNA 前病毒，然后由 DNA 前 病毒再转录为 RNA 肿瘤病毒的设想，但当时未得到重视。直至 1970 年，Temin 和 Baltimore 各自在鸟类劳氏肉瘤病毒和小鼠白血病病毒等 RNA 肿瘤病毒中找到了逆转录酶，才证明 了逆向转录过程。现在人们已发现各种高等真核生物的 RNA 肿瘤病毒都有逆转录酶。鸟 类的劳氏肉瘤病毒的逆转录酶具有三种分子形式，分别为α、αβ和β2，其中αβ是主 要形式。α亚基分子量为 63 000，β亚基分子量为 94 000，α亚基是β亚基的水解产物。 只有α亚基具有酶活性。哺乳动物的 RNA 肿瘤病毒的逆转录酶一般为单亚基结构。如小 鼠白血病病毒中的逆转录酶是分子量为 70 000 的单条多肽链。逆转录酶需要以 RNA（或 DNA）为模板，以四种 dNTP 为原料，要求短链 RNA（或 DNA）作为引物，此外还需要 适当浓度的二价阳离子 Mg 2+和 Mn 2+，沿 5′→3′方向合成 DNA，形成 RNA-DNA 杂交分 子（或 DNA 双链分子）。以后，再以 RNA-DNA 杂交分子中的 DNA 链为模板，在寄主 细胞的 DNA 聚合酶作用下，可合成另一条 DNA 互补链，这样便形成新的双链 DNA 分 子。 逆转录酶是一种多功能酶，它除了具有以 RNA 为模板的 DNA 聚合酶和以 DNA 为 模板的 DNA 聚合酶活性外还兼有 RNaseH、DNA 内切酶、DNA 拓扑异构酶、DNA 解链 酶和 tRNA 结合的活性。逆转录酶的发现，表明遗传信息也可以从 RNA 传递到 DNA， 从而丰富了分子遗传中心法则的内容。 几乎所有真核生物的 mRNA 分子的 3′末端都有一段多聚腺苷酸。当加入寡聚 dT 作 引物时，mRNA 就可以成为逆转录酶的模板，在体外合成与其互补的 DNA，称为 cDNA。 这种方法已成为生物技术和分子生物学研究中最常见的方法之一。使逆转录酶得到广泛 的应用。 三、DNA 突变 DNA 突变是指 DNA 的碱基顺序发生突然而永久性的变化，从而影响 DNA 的复制， 并使 DNA 的转录和翻译也跟着改变，因而表现出异常的遗传特征。DNA 的突变可以有