1.DNA模板:反应中DNA量在50ng~200 ng左右。且DNA纯度较高, 以增加反应特异性。 2.dNTP:反应体系中达100μM~200μM。 3.Mg2+:Mg2+是Taq酶的辅基浓度在2.0mM左右, 浓度太低Taq酶活力降低;太高反应特异性降低。 4.引物:根据目的基因两侧特定序列设计。引物约 20碱基左右;G+C含量在40 %-70%之间;引物内 部不能有回该序列;引物3’端不能互补。 5.Taq酶:它是从嗜热杆菌中提取的耐热性DNA聚 合酶,在95℃时30分钟还有50%活力。 1.DNA模板:反应中DNA量在50ng~200 ng左右。且DNA纯度较高, 以增加反应特异性。 2.dNTP:反应体系中达100μM~200μM。 3.Mg2+:Mg2+是Taq酶的辅基浓度在2.0mM左右, 浓度太低Taq酶活力降低;太高反应特异性降低。 4.引物:根据目的基因两侧特定序列设计。引物约 20碱基左右;G+C含量在40 %-70%之间;引物内 部不能有回该序列;引物3’端不能互补。 5.Taq酶:它是从嗜热杆菌中提取的耐热性DNA聚 合酶,在95℃时30分钟还有50%活力