第四章单克隆杭保 疫球蛋白（单克隆抗体）。随后，Nossal和edbers采用两种不同的抗原兔疫大白鼠，结果发 现，抗体生成细胞自始至终只能产生针对一个抗原的抗体，证明并支特了Bt的细胞系 选择学说。一个淋巴细胞只接受一个抗原决定族刺激及经刺激后扩增的淋巴细胞产生均一的 同质抗体，此即单克降抗体技术的理论基础。 制备单克隆抗体的基本过程是B细胞与骨髓瘤细胞的融合，在此基础上利用骨髓瘤细 胞的生化代谢缺陷在选择培养基中筛选培养，获得融合的杂交瘤细胞，因此，细胞融合和融 合细胞的筛选是杂交瘤抗体技术的基础，而理想的生化缺陷型骨髓瘤细胞系的建立是筛选融 合细胞的必需前提。一个浆细胞无限制增殖，导致产生一种均一的免疫球蛋白，称骨髓痴或 浆细胞瘤(plasmacytoma)。小鼠自发骨髓瘤极为罕见，需经人工诱导建立，1965年Sachs 等用矿物油刺激BALB/c小鼠诱生出骨髓瘤，并在体外培养成功，称为P3.1972年Milstein 等用8-杂氮鸟嘌呤(8-a2 guanine)对其进行诱导培养，从中筛选出缺乏次黄嘌吟.鸟嘌呤磷 酸核糖转移酶(hypoxanthine-guanine-,简称HGPRT)的新细胞系。 称为P3-X63-Ags。P3-X63-Ags因缺乏HGPRT而不能在HAT培养基中生长，但仍具分泌小 鼠1gGK轻链的能力，这显然不利于同B细胞融合后均一性抗体的产生。以后陆续诱导出的 一些新的突变株，如NS1,虽能合成K轻链，但无分泌能力，又如P3-X63-Ag8-653和SP20, 既不合成免疫球蛋白，也不分泌免疫球蛋白，从而保证了B细胞与骨髓瘤细胞融合后抗体 立生的均一性 细胞融合是杂交瘤抗体技术的基础。人们早就观察到在某些情况下或在体外培养中偶有 少数细胞可发生自发融合。早在1958年冈田等用高浓度的仙台病毒使小限艾氏腹水癌细胞 发生融合，其机制是病毒神经氨酸酶可降解细胞膜上的糖蛋白，使细胞膜局部凝集在病毒颗 粒的周用，在高pH及钙离子条件下，局部细胞质膜发生融合。1975年，Kao和Chavluk提 出用聚乙二醇作为细胞融合剂，其融合率较使用仙台病毒高出数百倍。目前己知的细胞融合 剂有数十种，而作为杂交瘤的融合剂主要是PG的行生物。EG是目前实验室制备杂交瘤 最常用的融合剂，其确切机制不清，可能因PEG的亲水性使细胞表面极性降低，导致脂双 层不稳定而引起细胞膜的融合。80年代末，Zimmermana报道了电融合技术，其原理是在电 场中沿电力线排列的细胞在高脉冲电场的作用下，细胞膜局部区域的双层脂分子结构遭到破 坏，出现微孔，细胞膜的通透性增加，继而产生相邻细胞的融合。电融合的融合率与PEG 相比有几何级数的增加，可减少B细胞的用量，如能利用一些亲和物质使B细胞与骨髓瘤 细胞在融合前配对接触，则可大大提高杂交细胞的产出率。 从上述不同技术及理论的发展历史可以看出，在20世纪70年代，免疫细胞的克隆选择 学说已被普遍接受，仙台病毒作为细胞融合剂已被成功使用，缺陷型小鼠骨髓瘤细胞系及融 合细胞的筛选方法均己建立，为单抗杂交瘤技术的出现奠定了理论及技术基础。1973年， Milstein等在研究抗体合成的遗传控制时，试图观察抗体合成的等位基因排斥规律能否在杂 交细胞上被打破。他们将大鼠的骨随瘤细胞和小鼠的骨随瘤细胞相融合，融合产生的杂交细 胞能分泌大鼠免疫球蛋白、小鼠免疫球蛋白和轻、重链分别来自大、小鼠两个亲代的杂交免 疫球蛋白，表明杂交细胞合成抗体不存在“等位基因排斥”现象，它们能共显地表达两个亲代 抗体信息。随后Kohler和Milstein用绵羊红细胞免疫小鼠，取脾淋巴细胞与小鼠骨随瘤细 胞P3-X63-Ag通过仙台病毒进行融合，然后于HAT培养基中选择培养，获得了能产生与绵 -50-第四章 单克隆抗体 - 50 - 疫球蛋白（单克隆抗体）。随后，Nossal 和 edbers 采用两种不同的抗原免疫大白鼠，结果发 现，抗体生成细胞自始至终只能产生针对一个抗原的抗体，证明并支持了 Burnet 的细胞系 选择学说。一个淋巴细胞只接受一个抗原决定簇刺激及经刺激后扩增的淋巴细胞产生均一的 同质抗体，此即单克隆抗体技术的理论基础。 制备单克隆抗体的基本过程是 B 细胞与骨髓瘤细胞的融合，在此基础上利用骨髓瘤细 胞的生化代谢缺陷在选择培养基中筛选培养，获得融合的杂交瘤细胞，因此，细胞融合和融 合细胞的筛选是杂交瘤抗体技术的基础，而理想的生化缺陷型骨髓瘤细胞系的建立是筛选融 合细胞的必需前提。一个浆细胞无限制增殖，导致产生一种均一的免疫球蛋白，称骨髓瘤或 浆细胞瘤 （plasmacytoma）。小鼠自发骨髓瘤极为罕见，需经人工诱导建立，1965 年 Sachs 等用矿物油刺激 BALB/c 小鼠诱生出骨髓瘤，并在体外培养成功，称为 P3。1972 年 Milstein 等用 8-杂氮鸟嘌呤（8-azaguanine）对其进行诱导培养，从中筛选出缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷 酸核糖转移酶（hypoxanthine-guanine-phosphoribosyl transferase，简称 HGPRT）的新细胞系， 称为 P3-X63-Ags。P3-X63-Ags 因缺乏 HGPRT 而不能在 HAT 培养基中生长，但仍具分泌小 鼠 IgGκ轻链的能力，这显然不利于同 B 细胞融合后均一性抗体的产生。以后陆续诱导出的 一些新的突变株，如 NS1，虽能合成κ轻链，但无分泌能力，又如 P3-X63-Ag8-653 和 SP2/0， 既不合成免疫球蛋白，也不分泌免疫球蛋白，从而保证了 B 细胞与骨髓瘤细胞融合后抗体 产生的均一性。 细胞融合是杂交瘤抗体技术的基础。人们早就观察到在某些情况下或在体外培养中偶有 少数细胞可发生自发融合。早在 1958 年冈田等用高浓度的仙台病毒使小鼠艾氏腹水癌细胞 发生融合，其机制是病毒神经氨酸酶可降解细胞膜上的糖蛋白，使细胞膜局部凝集在病毒颗 粒的周围，在高 pH 及钙离子条件下，局部细胞质膜发生融合。1975 年，Kao 和 Chayluk 提 出用聚乙二醇作为细胞融合剂，其融合率较使用仙台病毒高出数百倍。目前已知的细胞融合 剂有数十种，而作为杂交瘤的融合剂主要是 PEG 的衍生物。PEG 是目前实验室制备杂交瘤 最常用的融合剂，其确切机制不清，可能因 PEG 的亲水性使细胞表面极性降低，导致脂双 层不稳定而引起细胞膜的融合。80 年代末，Zimmermana 报道了电融合技术，其原理是在电 场中沿电力线排列的细胞在高脉冲电场的作用下，细胞膜局部区域的双层脂分子结构遭到破 坏，出现微孔，细胞膜的通透性增加，继而产生相邻细胞的融合。电融合的融合率与 PEG 相比有几何级数的增加，可减少 B 细胞的用量，如能利用一些亲和物质使 B 细胞与骨髓瘤 细胞在融合前配对接触，则可大大提高杂交细胞的产出率。 从上述不同技术及理论的发展历史可以看出，在 20 世纪 70 年代，免疫细胞的克隆选择 学说已被普遍接受，仙台病毒作为细胞融合剂已被成功使用，缺陷型小鼠骨髓瘤细胞系及融 合细胞的筛选方法均已建立，为单抗杂交瘤技术的出现奠定了理论及技术基础。1973 年， Milstein 等在研究抗体合成的遗传控制时，试图观察抗体合成的等位基因排斥规律能否在杂 交细胞上被打破。他们将大鼠的骨髓瘤细胞和小鼠的骨髓瘤细胞相融合，融合产生的杂交细 胞能分泌大鼠免疫球蛋白、小鼠免疫球蛋白和轻、重链分别来自大、小鼠两个亲代的杂交免 疫球蛋白，表明杂交细胞合成抗体不存在“等位基因排斥”现象，它们能共显地表达两个亲代 抗体信息。随后 Kohler 和 Milstein 用绵羊红细胞免疫小鼠，取脾淋巴细胞与小鼠骨髓瘤细 胞 P3-X63-Ags 通过仙台病毒进行融合，然后于 HAT 培养基中选择培养，获得了能产生与绵