同样可以得到: Ve=-b’ logMw+C 其中b’,C为常数。即ve与 logIn也成线性关系。我们可以通过在一凝胶柱 上分离多种已知分子量的蛋白质后,并根据上述的线性关系绘出标准曲线,然后用同 凝胶柱测出其它未知蛋白的分子量 、器材与试剂 (一)器材 1.玻璃层析柱((20mm×60cm) 2.恒流泵(或下口恒压贮液瓶) 3.自动部分收集器 4.紫外分光光度计 5.100m1试剂瓶 6.1000m1量筒 7.250ml烧杯 8.50ml、100ml烧杯 9.10m1(或5m1)刻度试管 (二)试剂 1.标准蛋白 (1)牛血清白蛋白:Mw=67,000(上海生化所) (2)鸡卵清清蛋白:Mw=45,000(美国 SIGMa公司) (3)胰凝乳蛋白酶原A:Mw=24,000(美国 SIGMA公司) (4)溶菌酶:Mw=14,300 2.未知蛋白质样品:由实验室准备 3.0.025MKCl-0. IM HAC(乙酸)(洗脱液1000m1) 4.蓝色葡聚糖一2000 四、实验操作 (一)凝胶的溶胀 称取7 g Sephadex G-75于250ml烧杯中加入洗脱液100ml,置室温溶胀2~3天, 反复倾泻去掉细颗粒,然后减压抽气去除凝胶孔隙中的空气,沸水浴中煮沸2~3小时 (可去除颗粒内部的空气及灭菌)。 (二)装柱 取洁净的的玻璃层析柱垂直固定在铁架台上 2.凝胶柱总体积(Vt)的测定 在距柱上端约5cm处作一记号,关闭柱出水口,加入去离子水,打开出水口,液 面降至柱记号处即关闭出水口,然后用量筒接收柱中去离子水(水面降至层析柱玻璃 筛板),读出的体积即为柱床总体积Vt。也可以最后走完未知蛋白后再测定Vt182 同样可以得到： Ve ＝－b'logMw + C' --------- (3) 其中 b', C'为常数。即 Ve 与 logMw 也成线性关系。我们可以通过在一凝胶柱 上分离多种已知分子量的蛋白质后，并根据上述的线性关系绘出标准曲线，然后用同 一凝胶柱测出其它未知蛋白的分子量。 三、器材与试剂 （一）器材 1. 玻璃层析柱（(20mm×60cm） 2. 恒流泵（或下口恒压贮液瓶） 3. 自动部分收集器 4. 紫外分光光度计 5. 100ml试剂瓶 6. 1000ml量筒 7. 250ml烧杯 8. 50ml、100ml烧杯 9. 10ml（或5ml）刻度试管 （二）试剂 1. 标准蛋白 （1）牛血清白蛋白：Mw=67,000（上海生化所） （2）鸡卵清清蛋白：Mw=45,000（美国SIGMA公司） （3）胰凝乳蛋白酶原A：Mw=24,000（美国SIGMA公司） （4）溶菌酶：Mw =14,300 2. 未知蛋白质样品：由实验室准备 3. 0.025M KCl－0.1M HAC(乙酸)（洗脱液1000ml） 4. 蓝色葡聚糖－2000 四、实验操作 （一）凝胶的溶胀 称取7g Sephadex G-75 于 250ml 烧杯中加入洗脱液100ml，置室温溶胀2～3天， 反复倾泻去掉细颗粒，然后减压抽气去除凝胶孔隙中的空气，沸水浴中煮沸2～3小时 （可去除颗粒内部的空气及灭菌）。 （二）装柱 1. 取洁净的的玻璃层析柱垂直固定在铁架台上。 2. 凝胶柱总体积（Vt）的测定： 在距柱上端约 5cm 处作一记号，关闭柱出水口，加入去离子水，打开出水口，液 面降至柱记号处即关闭出水口，然后用量筒接收柱中去离子水（水面降至层析柱玻璃 筛板），读出的体积即为柱床总体积Vt。也可以最后走完未知蛋白后再测定Vt