1，原理 有机溶剂的沉淀作用主要是降低水溶液的介电常数，溶液的介电常数减少就意 味着溶质分子异性电荷库仑引力的增加从而使溶解度减少。 2，优点 分辨能力比盐析法高，即一种蛋白质或其他溶质只有在一个比较窄的有机溶剂 浓度范围内沉淀。 沉淀不用脱盐，过滤比较容易。 在生化制备中应用比盐析法广泛 3，缺点 容易引起蛋白质变性失活，操作常需在低温下进行。且有机溶剂易燃、易爆、 安全要求较高。 4，常用的有机溶剂 常用的有机溶剂有：乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇。 5，有机溶剂的选择 有机溶剂沉淀蛋白质的能力随蛋白质种类及有机溶剂的种类而异。对曲霉淀粉 酶而言，有机溶剂沉淀能力，依次为丙酮＞异丙醇＞乙醇＞甲醇。这个顺序还受温 度、pH、盐离子浓度的影响。丙酮沉淀能力最强，但挥发损失多，价格相对较高， 工业上一般采用乙醇。 6，有机溶剂沉淀的影响因素 影响有机溶剂沉淀的因素有：温度、蛋白的浓度、pH、金属离子、离子强度。 （1）温度对有机溶剂沉淀的影响 蛋白质在有机溶剂中对温度反应特别敏感，温度稍高即发生变性。因此，加入 的有机溶剂都必须预冷至较低温度，操作要在冰浴中进行，同时加入有机溶剂必须 缓慢而又不断搅拌以免溶剂局部过浓。温度的高低会影响到已沉淀的蛋白质复溶。 （2）蛋白质浓度对有机溶剂沉淀的影响 低浓度样品使用有机溶剂的量大但共沉作用小，利于提高分离的效果；高浓度 样品可以节省有机溶剂，减少变性危险，但共沉作用大，分离效果较差。 （3）pH 值对有机溶剂沉淀的影响 在蛋白质结构稳定范围下选择溶解度最低处的 pH 值，有利于提高沉淀效果。适宜 的 pH 值可大大提高分离的分辨能力 （4）金属离子对有机溶剂沉淀的影响 一些多价离子如 Zn2 +和Ca 2+在一定的 pH 值下能与呈阴离子状态的蛋白质形成复合 物，这种复合物在水中或有机溶剂中的溶解度都大大降低，而不影响蛋白质的活性。 （5）离子强度对有机溶剂沉淀的影响 离子强度是影响溶质在有机溶剂及水混合液中溶解度的一个重要因素，盐的浓 度大小或太大都对分离有不利影响，对于蛋白质，在有机溶剂中盐的浓度不超过 5% 比较合适，使用的乙醇量也以不超过二倍体积为宜。 7，有机溶剂沉淀应注意的问题 （1）降低温度，能增加收率和减少蛋白质的变性。 （2）所选择的溶剂必须能和水互溶，而和蛋白质不起作用。 （3）蛋白质的分子量越大，产生沉淀所需加入的有机溶剂量越少。1，原理 有机溶剂的沉淀作用主要是降低水溶液的介电常数，溶液的介电常数减少就意 味着溶质分子异性电荷库仑引力的增加从而使溶解度减少。 2，优点 分辨能力比盐析法高，即一种蛋白质或其他溶质只有在一个比较窄的有机溶剂 浓度范围内沉淀。 沉淀不用脱盐，过滤比较容易。 在生化制备中应用比盐析法广泛 3，缺点 容易引起蛋白质变性失活，操作常需在低温下进行。且有机溶剂易燃、易爆、 安全要求较高。 4，常用的有机溶剂 常用的有机溶剂有：乙醇、甲醇、丙酮、异丙醇。 5，有机溶剂的选择 有机溶剂沉淀蛋白质的能力随蛋白质种类及有机溶剂的种类而异。对曲霉淀粉 酶而言，有机溶剂沉淀能力，依次为丙酮＞异丙醇＞乙醇＞甲醇。这个顺序还受温 度、pH、盐离子浓度的影响。丙酮沉淀能力最强，但挥发损失多，价格相对较高， 工业上一般采用乙醇。 6，有机溶剂沉淀的影响因素 影响有机溶剂沉淀的因素有：温度、蛋白的浓度、pH、金属离子、离子强度。 （1）温度对有机溶剂沉淀的影响 蛋白质在有机溶剂中对温度反应特别敏感，温度稍高即发生变性。因此，加入 的有机溶剂都必须预冷至较低温度，操作要在冰浴中进行，同时加入有机溶剂必须 缓慢而又不断搅拌以免溶剂局部过浓。温度的高低会影响到已沉淀的蛋白质复溶。 （2）蛋白质浓度对有机溶剂沉淀的影响 低浓度样品使用有机溶剂的量大但共沉作用小，利于提高分离的效果；高浓度 样品可以节省有机溶剂，减少变性危险，但共沉作用大，分离效果较差。 （3）pH 值对有机溶剂沉淀的影响 在蛋白质结构稳定范围下选择溶解度最低处的 pH 值，有利于提高沉淀效果。适宜 的 pH 值可大大提高分离的分辨能力 （4）金属离子对有机溶剂沉淀的影响 一些多价离子如 Zn2 +和Ca 2+在一定的 pH 值下能与呈阴离子状态的蛋白质形成复合 物，这种复合物在水中或有机溶剂中的溶解度都大大降低，而不影响蛋白质的活性。 （5）离子强度对有机溶剂沉淀的影响 离子强度是影响溶质在有机溶剂及水混合液中溶解度的一个重要因素，盐的浓 度大小或太大都对分离有不利影响，对于蛋白质，在有机溶剂中盐的浓度不超过 5% 比较合适，使用的乙醇量也以不超过二倍体积为宜。 7，有机溶剂沉淀应注意的问题 （1）降低温度，能增加收率和减少蛋白质的变性。 （2）所选择的溶剂必须能和水互溶，而和蛋白质不起作用。 （3）蛋白质的分子量越大，产生沉淀所需加入的有机溶剂量越少