二、组织学研究方法 (一)一般光学显微镜术 应用一般光学显微镜（简称光镜）观察组织切片是组织学研究的最基本方法。取动物或人 体的新鲜组织块，先用固定剂(fixative)固定(fixation),使组织中的蛋白质迅速凝固，防 止细胞自溶和组织腐败。常用的固定剂如洒精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化锇等，一般常将 几种固定剂配制成混合固定液，以抵消或减弱单种固定剂对组织的收缩或膨胀等缺点，达到更 好固定效果。固定后的组织块（约3~5mm3大小）用石蜡、火棉胶或树脂等包埋 (embedding)成硬块，以切片机(microtome)切成5~l0μm厚的组织切片(tissue section)，切片贴在载玻片上经脱蜡等步骤后进行染色。组织块也可立即投入液氮(- 196℃)内快速冻结，用恒冷箱切片机(cryostat)制成冷冻切片(frozen section),这种方法 制片迅速，细胞内酶活性保存较好，常用于酶组织化学染色。血细胞和分离培养的细胞可直接 涂在玻片上，制成涂片(smear)。疏松结缔组织和肠系膜等软组织可撕成薄片铺在玻片上 (铺片)，牙和骨等坚硬组织可磨成薄片（磨片）。组织切片等标本经染色、透明后，以封固 剂和盖片封固，即可长期保存，镜下观察。 CH3:CH: CH:CH CH: 0,cH( )so OH c1- N(CH3): 亚甲蓝 图1·1坚牢绿（酸性染料）与亚甲蓝（碱性染料）的化学结构及其染色反应示意 染色(staining)是用染料使组织切片着色，便于镜下观察。天然和人工合成的染料甚多 它们都是含发色团的有机化合物，当染料具有助色团成为盐类物质，即可溶解于水并具电荷， 与组织有亲合力，使组织着色。含氨基（-NH2)、二甲氨基〔-N(CH3)2】等碱性助色团 的染料，称碱性染料(basic dye),它的盐溶液具阳电荷；含羧基(-C0OH)、羟基(- OH)或磺基(·SO3H)等酸性助色团的染料，称酸性染料(acid dye),它的溶液具阴电荷 (图1·)。组织的染色原理一般认为基于化学结合或物理吸附作用。细胞和组织的酸性物质 或结构与碱性染料亲合力强者，称嗜碱性(basophilia);而碱性物质或结构与酸性染料亲合 力强者，称嗜酸性(acidophilia);若与两种染料的亲合力均不强者，称中性(neutrophilia)。 组织的基本成分是蛋白质，构成蛋白质的氨基酸常是即有含氨基的，也有含羧基的，是两性电 解质。各种蛋白质的等电点因氨基酸成分的不同而异，其电荷性质又与溶液的H值相关，根据 研究目的选用合适的染色方法，调整好染液的H值，即可取得良好染色效果。常用的酸性染料 二、组织学研究方法 （一）一般光学显微镜术 应用一般光学显微镜（简称光镜）观察组织切片是组织学研究的最基本方法。取动物或人 体的新鲜组织块，先用固定剂（fixative）固定（fixation），使组织中的蛋白质迅速凝固，防 止细胞自溶和组织腐败。常用的固定剂如洒精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化锇等，一般常将 几种固定剂配制成混合固定液，以抵消或减弱单种固定剂对组织的收缩或膨胀等缺点，达到更 好 固 定 效 果 。 固 定 后 的 组 织 块 （ 约 3 ～ 5mm 3 大 小 ） 用 石 蜡 、 火 棉 胶 或 树 脂 等 包 埋 （ embedding ） 成 硬 块 ， 以 切 片 机 （ microtome ） 切 成 5 ～ 10μm 厚 的 组 织 切 片 （ tissue section），切片贴在载玻片上经脱蜡等步骤后进行染色。组织块也可立即投入液氮（－ 196℃）内快速冻结，用恒冷箱切片机（cryostat）制成冷冻切片（frozen section），这种方法 制片迅速，细胞内酶活性保存较好，常用于酶组织化学染色。血细胞和分离培养的细胞可直接 涂在玻片上，制成涂片（smear）。疏松结缔组织和肠系膜等软组织可撕成薄片铺在玻片上 （铺片），牙和骨等坚硬组织可磨成薄片（磨片）。组织切片等标本经染色、透明后，以封固 剂和盖片封固，即可长期保存，镜下观察。 图1－1 坚牢绿（酸性染料）与亚甲蓝（碱性染料）的化学结构及其染色反应示意 染色（staining）是用染料使组织切片着色，便于镜下观察。天然和人工合成的染料甚多, 它们都是含发色团的有机化合物，当染料具有助色团成为盐类物质，即可溶解于水并具电荷， 与组织有亲合力，使组织着色。含氨基（－NH2）、二甲氨基〔－N（CH3）2〕等碱性助色团 的染料，称碱性染料（basic dye），它的盐溶液具阳电荷；含羧基（－COOH）、羟基（－ OH）或磺基（－SO3H）等酸性助色团的染料，称酸性染料（acid dye），它的溶液具阴电荷 （图1－1）。组织的染色原理一般认为基于化学结合或物理吸附作用。细胞和组织的酸性物质 或结构与碱性染料亲合力强者，称嗜碱性（basophilia）；而碱性物质或结构与酸性染料亲合 力强者，称嗜酸性（acidophilia）；若与两种染料的亲合力均不强者，称中性(neutrophilia)。 组织的基本成分是蛋白质，构成蛋白质的氨基酸常是即有含氨基的，也有含羧基的，是两性电 解质。各种蛋白质的等电点因氨基酸成分的不同而异，其电荷性质又与溶液的pH值相关，根据 研究目的选用合适的染色方法，调整好染液的pH值，即可取得良好染色效果。常用的酸性染料