(1)表观Km(ATP)和Vmax的测定 固定肌酸(Cr)的浓度,改变ATP的浓度 底物溶液:25m48 mmol/L Cr:0.25ml0.1 mol/L Me;0.5m0.1%百里酚蓝 025ml0.1mol/LGly- Naoh pH9.0:12/LATP加入量见表1: 表112g/LATP加入量表 试管号ATP终浓度(mo/L)ATP加入量(m 0 0.100 0.25 0.063 对以上试液调pH至90,最后用水调节体积至5Oml,分别测活。对上述数据进行 双倒数作图法处理,即用1/V对M/[ATP]作图(V=1.3×△As9),可求得表观Km(ATP) (2)表观Km(Cr)和Vma的测定 固定ATP浓度,改变肌酸(Cr)浓度 底物溶液:1.0mATP(12gL):0.25ml0.1 mol/L Mg;0.5ml0.1%百里酚蓝 025ml0.1mol/LGly- Naoh pHS.0;48 mmol/L Cr加入量见表2: 表248mmo/LCr加入量表261 ⑴ 表观 Km (ATP) 和 Vmax 的测定： 固定肌酸(Cr)的浓度，改变 ATP 的浓度 。 底物溶液：2.5ml 48mmol/L Cr ；0.25ml 0.1mol/L Mg++；0.5ml 0.1％ 百里酚蓝； 0.25ml 0.1mol/L Gly-NaOH pH9.0；12g/L ATP 加入量见表 1： 表 1 12g/L ATP 加入量表 试管号 ATP 终浓度( mol/L ) ATP 加入量(ml) 1 4.0 1.0 2 2.0 0.5 3 1.0 0.25 4 0.5 0.125 5 0.4 0.100 6 0.25 0.063 对以上试液调 pH 至 9.0，最后用水调节体积至 5.0ml，分别测活。对上述数据进行 双倒数作图法处理，即用 1/V 对 1/［ATP］作图(V=1.3×△A597)，可求得表观 Km (ATP) 和 Vmax。 ⑵ 表观 Km (Cr) 和 Vmax 的测定： 固定 ATP 浓度，改变肌酸(Cr)浓度。 底物溶液：1.0ml ATP(12g/L)；0.25ml 0.1mol/L Mg++；0.5ml 0.1％百里酚蓝； 0.25ml 0.1mol/L Gly-NaOH pH9.0；48mmol/L Cr 加入量见表 2： 表 2 48mmol/L Cr 加入量表