酶分离纯化过程实验记录表格的各个项目为:实验步骤、溶液体积(mD、蛋白的 质量浓度(g/)、总蛋白量mg)、比活力μmol/( mInong]、总活力 umol/min)、纯化 倍数和回收率 离子交换柱层析的方法是:取约10mL湿的DE-32阴离子交换纤维素,抽干后在 0.5 mol/L NaCl-NaOH溶液中浸泡30min,水洗至中性,在0.5 mol/L HCI中浸泡30min, 水洗至中性,在0.5 mol/L NaOH中浸泡30min,水洗至中性抽干,用0.0 Imol/L pH80 Tris-HCl平衡缓冲液浸泡过夜。凸形梯度洗脱液体系为:C1(混合瓶):0.01moJ/LpH80 Tris-HCl,5omL,(此瓶塞不可漏气);C2(贮液瓶):0.04 mol/L pH8.0 Tris-Hcl, l50mL。洗脱速度:0.2~0.3 ml/min,收集体积:2~3ml/管。要从上样开始收集,洗脱 完毕,逐管测定A280,选择A28较大的管测活,绘制洗脱图。凸形梯度洗脱用在此处 的优点是在前几十管分离杂蛋白时,盐梯度增长很快,而后几十管洗脱兔肌肌酸激酶时, 盐梯度变化缓馒,有利于该酶与杂蛋白的分离。洗脱后还可以逐管测电导,画出凸形梯 度洗脱曲线,并换算出该酶洗脱下来时相应的 Tris-HCl缓冲液的盐浓度 层析系统装置图如下: 2.肌酸激酶动力学参数的测定260 酶分离纯化过程实验记录表格的各个项目为：实验步骤、溶液体积( ml)、 蛋白的 质量浓度(g/L) 、 总蛋白量(mg)、比活力[μmol／(min•mg)]、总活力(mol/min)、纯化 倍数和回收率。 离子交换柱层析的方法是：取约 10mL 湿的 DE-32 阴离子交换纤维素，抽干后在 0.5mol/L NaCl-NaOH 溶液中浸泡 30min ，水洗至中性，在 0.5mol/L HCl 中浸泡 30min， 水洗至中性，在 0.5mol/L NaOH 中浸泡 30min，水洗至中性抽干，用 0.01mol/L pH8.0 Tris-HCl 平衡缓冲液浸泡过夜。凸形梯度洗脱液体系为：C1（混合瓶）：0.01 mol/L pH8.0 Tris-HCl ，50mL，（此瓶塞不可漏气）；C2（贮液瓶）：0.04mol/L pH8.0 Tris-HCl ， 150mL。洗脱速度：0.2～0.3ml/min，收集体积：2～3ml/管。要从上样开始收集，洗脱 完毕，逐管测定 A280，选择 A280 较大的管测活，绘制洗脱图。凸形梯度洗脱用在此处 的优点是在前几十管分离杂蛋白时，盐梯度增长很快，而后几十管洗脱兔肌肌酸激酶时， 盐梯度变化缓馒，有利于该酶与杂蛋白的分离。洗脱后还可以逐管测电导，画出凸形梯 度洗脱曲线，并换算出该酶洗脱下来时相应的 Tris-HCl 缓冲液的盐浓度。 层析系统装置图如下： 2. 肌酸激酶动力学参数的测定：