DNA的Tm值大小与下列因素有关: 1)DNA的均一性均一性愈高的样品,熔解过程愈是发生在一个很小的温度范围 2)G-C之含量GC含量越高,Tm值越高,成正比关系,如图4-15。这是G 一C对比AT对更为稳定的缘故。所以测定Tm值可推算出G-C对的含量。其经验公式 GC(%)=(Tm-69.3)×244 〔3〕介质中的离子强度一般说来,在离子强度较低的介质中,DNA的熔解温度较低, 熔解温度的范围也较窄。而在较高的离子强度的介质中,情况则相反。所以DNA制品应 保存在较高浓度的缓冲液中或溶液中,故常在1mol/L的NaCI中保存。 RNA分子中有局部的双螺旋区,所以RNA也可发生变性,但Tm值较低,变性曲线也 不那么陡 变性DNA在适当条件下,又可使两条彼此分开的链重新缔合成为双螺旋结构,这 过程称为复性。DNA复性后,许多物理化学性质又得到恢复,生物活性也可以得到部分恢 复。热变性DNA的两条互补单链,在缓慢冷却的条件下可重新结合恢复双螺旋结构,这 种复性又称为退火。 Poly d(A-T) 14100% DNA Poly d(G-C) 1.0}0 80Tm Tm 100 607080 图4-15DNA的Tm值与G-C含量关系 图4-14某些DNA的Tm值 DNA来源:1。草分枝杆菌:2。沙门氏杆菌:3。大肠 杆菌;4。鮭鱼精子:5。小牛胸腺:6。肺炎球菌:7 酵母:8噬菌体T6:9。多聚dA-T) 将不同来源的DNA放在试管里,经热变性后,慢慢冷却,让其复性,若这些异源DNA 之间在某些区域有相同的序列,则复性时,会形成杂交DNA分子。DNA与互补的RNA 之间也可以发生杂交。核酸的杂交在分子生物学和分子遗传学的研究中应用极广,许多重 大的分子遗传学问题都是用分子杂交来解决的 核酸杂交可以在液相或固相上进行。目前实验室中应用最广的是用硝酸纤维素膜作支 持物进行的杂交。英国的分子生物学家 E.M. Southern所发明的 Southern印迹法( Sonthern blotting)就是将凝胶上的DNA片段转移到硝酸纤维素膜上后,再进行杂交的。这里以－92－ DNA 的 Tm值大小与下列因素有关： （１）DNA的均一性 均一性愈高的样品，熔解过程愈是发生在一个很小的温度范围 内。 （２）G—C 之含量 G—C 含量越高，Tm值越高，成正比关系，如图 4-15。这是 G —C 对比 A—-T 对更为稳定的缘故。所以测定Tm值可推算出 G—C 对的含量。其经验公式 为： G—C（％）＝（Tm－69.3）×2.44 （３）介质中的离子强度一般说来，在离子强度较低的介质中，DNA 的熔解温度较低， 熔解温度的范围也较窄。而在较高的离子强度的介质中，情况则相反。所以 DNA 制品应 保存在较高浓度的缓冲液中或溶液中，故常在 1 mol／L 的 NaCl中保存。 RNA 分子中有局部的双螺旋区，所以 RNA 也可发生变性，但Tm值较低，变性曲线也 不那么陡。 变性 DNA 在适当条件下，又可使两条彼此分开的链重新缔合成为双螺旋结构，这一 过程称为复性。DNA 复性后，许多物理化学性质又得到恢复，生物活性也可以得到部分恢 复。热变性 DNA 的两条互补单链，在缓慢冷却的条件下可重新结合恢复双螺旋结构，这 种复性又称为退火。 将不同来源的 DNA放在试管里，经热变性后，慢慢冷却，让其复性，若这些异源 DNA 之间在某些区域有相同的序列，则复性时，会形成杂交 DNA 分子。DNA 与互补的 RNA 之间也可以发生杂交。核酸的杂交在分子生物学和分子遗传学的研究中应用极广，许多重 大的分子遗传学问题都是用分子杂交来解决的。 核酸杂交可以在液相或固相上进行。目前实验室中应用最广的是用硝酸纤维素膜作支 持物进行的杂交。英国的分子生物学家 E. M .Southern 所发明的 Southern 印迹法（Sonthern blotting）就是将凝胶上的 DNA 片段转移到硝酸纤维素膜上后，再进行杂交的。这里以 图 4-14 某些 DNA 的 Tm 值 图 4-15 DNA 的 Tm值与 G-C 含量关系 DNA 来源：1。草分枝杆菌; 2。沙门氏杆菌; 3。大肠 杆菌; 4。鲑鱼精子；5。小牛胸腺；6。肺炎球菌；7。 酵母；8 噬菌体 T6 ；9。多聚 d(A—T)