十二、考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度 2．1 试剂 (1)标准蛋白质溶液 （500ml） 结晶牛血清白蛋白，预先经微量凯氏定氮法或按牛血清白蛋白 1% OD1cm =6.6 测定蛋白质含量，再用蒸 馏水配制成 1 mg/mL 蛋白溶液（缺货）。 0.56g 酪蛋白+20ml 10%NAOH 溶解后加 1N HCL 调节 PH7.0 约 50ML +0.15mol/l NaCL 至 250ml。 (2)考马斯亮蓝试剂 （8000ml） 考马斯亮蓝 G-250 100 mg 溶于 50 mL 95%乙醇中，加入 100 mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至 1000 mL， 滤纸过滤。最终试剂中含 0.01%(W/V)考马斯亮蓝 G-250，4.7%(W/V)乙醇，8.5%(W/V)磷酸。 0.8g 考马斯亮蓝 G-250+400ml 95%乙醇+800ml 85%磷酸+H2O 至 8000ml。 ((33))00. .1155mmool l / / l l NNaaCCl l((550000mml l)): :: 88. .7766ggNNaaCCl l++HH22OO至至11000000mml l。 (4)待测样品 未知蛋白质溶液，要求蛋白浓度范围为 0.1-0.6 mg/mL，若浓度过高时，需用 0.15 mol/L NaCl 溶液或 蒸馏水适当稀释。50ml 标准酪蛋白+0.15Mol/NaCL50ml 至 100ml 配成待测液。 十一、核酸水解及成份鉴定 1、 10%硫酸 （500ml）：50ml H2SO4 加水至 500ml 2、 1N 氨水：（200ml）15ml 加水至 200ml 3、 0.1N 硝酸银：4.38gAgNO3 加水至 250ml 4、 钼酸铵：8g 钼酸铵加 10%硫酸至 200ml 5、 二苯胺试剂：200ml 冰乙酸+11ml 浓硫酸 6、 地主酚试剂：0.15g 三氯化铁+150mlHCl 至 150ml 0.238g 甲基苯二酚至 50ml 十三、蔗糖密度梯度离心分离细胞器 1、 10%蔗糖：每组 8ml,10ml? 2、 20%蔗糖：每组 6 ml 3、 30%蔗糖：每组 6ml 4、 40%蔗糖：每组 12ml 5、 猫肝：每次 100g+100ml 水十二、考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度 2．1 试剂 (1)标准蛋白质溶液 （500ml） 结晶牛血清白蛋白，预先经微量凯氏定氮法或按牛血清白蛋白 1% OD1cm =6.6 测定蛋白质含量，再用蒸 馏水配制成 1 mg/mL 蛋白溶液（缺货）。 0.56g 酪蛋白+20ml 10%NAOH 溶解后加 1N HCL 调节 PH7.0 约 50ML +0.15mol/l NaCL 至 250ml。 (2)考马斯亮蓝试剂 （8000ml） 考马斯亮蓝 G-250 100 mg 溶于 50 mL 95%乙醇中，加入 100 mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至 1000 mL， 滤纸过滤。最终试剂中含 0.01%(W/V)考马斯亮蓝 G-250，4.7%(W/V)乙醇，8.5%(W/V)磷酸。 0.8g 考马斯亮蓝 G-250+400ml 95%乙醇+800ml 85%磷酸+H2O 至 8000ml。 ((33))00. .1155mmool l / / l l NNaaCCl l((550000mml l)): :: 88. .7766ggNNaaCCl l++HH22OO至至11000000mml l。 (4)待测样品 未知蛋白质溶液，要求蛋白浓度范围为 0.1-0.6 mg/mL，若浓度过高时，需用 0.15 mol/L NaCl 溶液或 蒸馏水适当稀释。50ml 标准酪蛋白+0.15Mol/NaCL50ml 至 100ml 配成待测液。 十一、核酸水解及成份鉴定 1、 10%硫酸 （500ml）：50ml H2SO4 加水至 500ml 2、 1N 氨水：（200ml）15ml 加水至 200ml 3、 0.1N 硝酸银：4.38gAgNO3 加水至 250ml 4、 钼酸铵：8g 钼酸铵加 10%硫酸至 200ml 5、 二苯胺试剂：200ml 冰乙酸+11ml 浓硫酸 6、 地主酚试剂：0.15g 三氯化铁+150mlHCl 至 150ml 0.238g 甲基苯二酚至 50ml 十三、蔗糖密度梯度离心分离细胞器 1、 10%蔗糖：每组 8ml,10ml? 2、 20%蔗糖：每组 6 ml 3、 30%蔗糖：每组 6ml 4、 40%蔗糖：每组 12ml 5、 猫肝：每次 100g+100ml 水