厦门大学：《现代生物实验学》课程教学资源（教案讲义）生物化学实验实验准备

《生物化学实验》实验前准备：2005 年 5 月 一、实验内容、试剂和器材（160 人，80 组） (一)实验一、淀粉的提取 实验二、总糖和还原糖的测定(定性) 1． 试剂： （1） (白色 250ml)铜试剂（4000ml）：（A）26g 硫酸铜加水至于 2000ml (B)48g 酒石酸钾钠+80 克无水碳酸钠+100 克碳酸氢钠+72 克草酸钾+3.2 克碘酸钾 制备溶液 B 时，先用法 700ml 热水溶化前三种试剂，再加后两种至于 2000ml，最后将（A）、 （B）等量混合。 （2） (不分装)0.005N 硫代硫酸钠（20000ml）：24.8g 硫代硫酸钠+2g 碳酸钠+水配 20000ml 0.005N 溶液。 （3） （白色滴瓶）1%淀粉（500ml）：5g 可溶性淀粉溶于 500ml 饱和的 NaCL 溶液中煮沸。 （4） （棕色 60ml）2%碘化钾（2000ml）：40gKI+水至于 2000ml。（定性） （5） （强酸）（白色 60ml）2N 硫酸（1500ml）：166.6ml 母液溶于水至 1500ml。 （6） （白色 60ml）标准葡萄糖（1000ml 0.5mg/ml）：0.5g 葡萄糖+水至 1000ml。 （7） 地瓜或山芋 3Kg , 一组 20 克。 （8） （白色 60ml）待测还原糖：400ml 稀释 800ml。 2． 器材：（1） 菜刀 12 支（2）菜板 12 块（3）捣碎机 12 台（4）恒温水浴锅 12 台（5）滴定管 48 支（6） 子 铁架台+蝴蝶夹+铁圈 48 套。 （二）实验三、四、五、六淀粉酶性质的测定 1． 试剂： （1） （白色 125ml）1%蔗糖（2500ml）：25g 蔗糖+水至 2500ml 溶液。 （2） (白色 250ml)本尼迪克试剂（3000ml）：混合（A）、（B）。 （A）51.9g 硫酸铜+水至 450ml。 （B）519g 柠檬酸钠+300g 碳酸钠+水加热溶解至 2550ml，冷却。 （3） (白色 250ml)0.5%淀粉（6000ml）：30g 淀粉+水至 6000ml, 煮沸。 （4） (白色 250ml)含 0.3%NaCL 的 0.5%淀粉（4000ml）：20g 淀粉+12g NaCL+水至 4000ml，煮沸。 （5） （白棕色 60ml）1% NaCL (1000ml): 10g NaCL+水至 1000ml 溶液。 （6） （白棕色 60ml）0.1%CuSO4（1000ml）：15gCuSO4+H2O 至 1000ml 溶液。 （7） （手易着色）(棕色 60ml)碘—碘化钾溶液（1000ml）： （8） (棕色 250ml)0.2M 磷酸氢二钠（8000ml）：573.2g+水至 8000ml 溶液。 （9） （白色 60ml）(白色 125ml)0.1M 柠檬酸（2000ml）：42.0g+水至 2000ml 溶液。 2． 器材：（1） 恒温水浴锅 12 台（2） pH 计 4 台 (3)电子天平均数（4）电磁炉。 （三）实验七 米氏常数和最大反应速度（碱性磷酸酶反应动力学测定）。 1． 试剂： （1） (60ml 棕色)10mM PNPP（300ml）：1.113g+H2O 至 300ml 溶液。 （2） （白色 60ml）20mM MgCL2（1000ml）：4.07g+水至 1000ml 溶液。 （3） (白色 250ml)0.1M 碳酸钠—碳酸氢钠 PH 10.1 缓冲液（1500ml ,150 人要 3000ml）：0.1M 碳 酸钠 （ 21.2g 碳酸钠+水至 2000ml）； 0.1M 碳酸氢钠（ 8.4gNaHCO3+H2O 至 1000ml 溶液）。 1050ml Na2CO3+450ml NaHCO3 至 1500ml 缓冲液。 （4） （腐蚀性）(白色 250ml)0.1M NaOH（3000ml）：50ml 6M NaOH+H2O 至 3000ml 溶液。（150 人要 4000ml）。 （5） (不分装)酶液(3mg 碱性磷酸酶，旧的要 12mg +水至 500ml)。（缺货）

《生物化学实验》实验前准备：2005 年 5 月 一、实验内容、试剂和器材（160 人，80 组） (一)实验一、淀粉的提取 实验二、总糖和还原糖的测定(定性) 1． 试剂： （1） (白色 250ml)铜试剂（4000ml）：（A）26g 硫酸铜加水至于 2000ml (B)48g 酒石酸钾钠+80 克无水碳酸钠+100 克碳酸氢钠+72 克草酸钾+3.2 克碘酸钾 制备溶液 B 时，先用法 700ml 热水溶化前三种试剂，再加后两种至于 2000ml，最后将（A）、 （B）等量混合。 （2） (不分装)0.005N 硫代硫酸钠（20000ml）：24.8g 硫代硫酸钠+2g 碳酸钠+水配 20000ml 0.005N 溶液。 （3） （白色滴瓶）1%淀粉（500ml）：5g 可溶性淀粉溶于 500ml 饱和的 NaCL 溶液中煮沸。 （4） （棕色 60ml）2%碘化钾（2000ml）：40gKI+水至于 2000ml。（定性） （5） （强酸）（白色 60ml）2N 硫酸（1500ml）：166.6ml 母液溶于水至 1500ml。 （6） （白色 60ml）标准葡萄糖（1000ml 0.5mg/ml）：0.5g 葡萄糖+水至 1000ml。 （7） 地瓜或山芋 3Kg , 一组 20 克。 （8） （白色 60ml）待测还原糖：400ml 稀释 800ml。 2． 器材：（1） 菜刀 12 支（2）菜板 12 块（3）捣碎机 12 台（4）恒温水浴锅 12 台（5）滴定管 48 支（6） 子 铁架台+蝴蝶夹+铁圈 48 套。 （二）实验三、四、五、六淀粉酶性质的测定 1． 试剂： （1） （白色 125ml）1%蔗糖（2500ml）：25g 蔗糖+水至 2500ml 溶液。 （2） (白色 250ml)本尼迪克试剂（3000ml）：混合（A）、（B）。 （A）51.9g 硫酸铜+水至 450ml。 （B）519g 柠檬酸钠+300g 碳酸钠+水加热溶解至 2550ml，冷却。 （3） (白色 250ml)0.5%淀粉（6000ml）：30g 淀粉+水至 6000ml, 煮沸。 （4） (白色 250ml)含 0.3%NaCL 的 0.5%淀粉（4000ml）：20g 淀粉+12g NaCL+水至 4000ml，煮沸。 （5） （白棕色 60ml）1% NaCL (1000ml): 10g NaCL+水至 1000ml 溶液。 （6） （白棕色 60ml）0.1%CuSO4（1000ml）：15gCuSO4+H2O 至 1000ml 溶液。 （7） （手易着色）(棕色 60ml)碘—碘化钾溶液（1000ml）： （8） (棕色 250ml)0.2M 磷酸氢二钠（8000ml）：573.2g+水至 8000ml 溶液。 （9） （白色 60ml）(白色 125ml)0.1M 柠檬酸（2000ml）：42.0g+水至 2000ml 溶液。 2． 器材：（1） 恒温水浴锅 12 台（2） pH 计 4 台 (3)电子天平均数（4）电磁炉。 （三）实验七 米氏常数和最大反应速度（碱性磷酸酶反应动力学测定）。 1． 试剂： （1） (60ml 棕色)10mM PNPP（300ml）：1.113g+H2O 至 300ml 溶液。 （2） （白色 60ml）20mM MgCL2（1000ml）：4.07g+水至 1000ml 溶液。 （3） (白色 250ml)0.1M 碳酸钠—碳酸氢钠 PH 10.1 缓冲液（1500ml ,150 人要 3000ml）：0.1M 碳 酸钠 （ 21.2g 碳酸钠+水至 2000ml）； 0.1M 碳酸氢钠（ 8.4gNaHCO3+H2O 至 1000ml 溶液）。 1050ml Na2CO3+450ml NaHCO3 至 1500ml 缓冲液。 （4） （腐蚀性）(白色 250ml)0.1M NaOH（3000ml）：50ml 6M NaOH+H2O 至 3000ml 溶液。（150 人要 4000ml）。 （5） (不分装)酶液(3mg 碱性磷酸酶，旧的要 12mg +水至 500ml)。（缺货）

2． 器材：（1）恒温水浴锅 12 台（2）722 分光光度计 25 台 (四)实验十一、细胞色素 C 的制备试剂： 1．试剂： （1） 猪心：26 组×50g=1300g/班，两班共 2600g。每次（7-8 斤）5 斤（星期二、五上午）。 （2） （腐蚀性）(专用)10%NaOH（1000ml）：100gNaOH+H2O 至 1000ml 溶液，分 13 瓶。 （3） （腐蚀性）(白色 125ml)20%TCA（500ml）：100g 三氯醋酸+水至 500ml 溶液，分装 6 瓶。 （4） （腐蚀性）（白色 250ml）0.145mol/l TCA（3000ml）：71.1g+H2O 至 3000ml 溶液。 （5） 硫酸铵：6 瓶。 2．器材： （1）药匙 48 把（2）称量纸 1 袋（3）托盘天平 12 架（4）捣碎机 12 台。 （五）实验十二、凝胶层析法测定蛋白分子量 1．试剂： （1）(层析用)0.01mol/l Tris-HCl 缓冲液，PH7.5，含 0.2mol/l NaCl（10000ml）： 0.2mol/l Tris（1000ml），24.23g+H2O 至 1000ml 溶液； 1N HCl（200ml），17.7ml 浓 HCl+H2O 至 200ml 溶液； 117g NaCl+500ml 0.2mol/l Tris+40.3ml 1N HCl+H2O 至 10000ml 溶液。 2．药品： （1）分步收集仪 12 台（2）层析柱 12 支（3）核酸蛋白质检测仪 12 台（4）离心机 12 架（5）透析玻璃 纸 1 整张（6）记录仪 12 台。 （六）实验十五、凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点(盘状电泳槽) 1．试剂： （1） 凝胶贮备液（200ml）：56g 丙烯酰胺+1.6g 亚甲基双丙烯酰胺+水至 200ml 溶液。（缺货） （2） 10%四甲基乙二胺（100ml）：10ml 四甲基乙二胺+水至 100ml 溶液。 （3） 10%过硫酸铵（5ml）：0.5g 过硫酸铵+水至 5ml 溶液（当天配制）。 （4） 两性电解质载体 pH 3-10 （上海试剂二厂）。（缺货） （5） 电极溶液： （A）、5%H3PO4（10000ml）：588ml 85%H3PO4+H2O 至 10000ml 溶液。 （B）、2%NaOH（10000ml）：200g NaOH+H2O 至 10000ml 溶液。 （6） 40%蔗糖（100ml）：40g 蔗糖+水至 100ml 溶液。 （7） 考马斯亮兰 R250（500ml）：0.25g R250+50ml Hac+450ml H2O 至 500ml 溶液。 （8） 脱色液 7%醋酸（1000ml）：200ml HAc+H2O 至 1000ml 溶液。 （9） 10%TCA（1000ml）：100g 三氯乙酸+H2O 至 1000ml 溶液。（可能不配） 2．器材： （1） 12 个电泳槽（2）12 台电泳仪（3）12 长针头（4）200ul 加样器 48 把（5）刀片 12 片 （6）PH 试纸（3—10）12 套（7）细铜丝 180 条。 （七）实验十六、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白分子量（垂直电泳槽） 实验十七、聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白分子量（垂直电泳槽）（PAGE，把 SDS 换水，无巯基 乙醇） 1．试剂：

2． 器材：（1）恒温水浴锅 12 台（2）722 分光光度计 25 台 (四)实验十一、细胞色素 C 的制备试剂： 1．试剂： （1） 猪心：26 组×50g=1300g/班，两班共 2600g。每次（7-8 斤）5 斤（星期二、五上午）。 （2） （腐蚀性）(专用)10%NaOH（1000ml）：100gNaOH+H2O 至 1000ml 溶液，分 13 瓶。 （3） （腐蚀性）(白色 125ml)20%TCA（500ml）：100g 三氯醋酸+水至 500ml 溶液，分装 6 瓶。 （4） （腐蚀性）（白色 250ml）0.145mol/l TCA（3000ml）：71.1g+H2O 至 3000ml 溶液。 （5） 硫酸铵：6 瓶。 2．器材： （1）药匙 48 把（2）称量纸 1 袋（3）托盘天平 12 架（4）捣碎机 12 台。 （五）实验十二、凝胶层析法测定蛋白分子量 1．试剂： （1）(层析用)0.01mol/l Tris-HCl 缓冲液，PH7.5，含 0.2mol/l NaCl（10000ml）： 0.2mol/l Tris（1000ml），24.23g+H2O 至 1000ml 溶液； 1N HCl（200ml），17.7ml 浓 HCl+H2O 至 200ml 溶液； 117g NaCl+500ml 0.2mol/l Tris+40.3ml 1N HCl+H2O 至 10000ml 溶液。 2．药品： （1）分步收集仪 12 台（2）层析柱 12 支（3）核酸蛋白质检测仪 12 台（4）离心机 12 架（5）透析玻璃 纸 1 整张（6）记录仪 12 台。 （六）实验十五、凝胶等电聚焦法测定蛋白质等电点(盘状电泳槽) 1．试剂： （1） 凝胶贮备液（200ml）：56g 丙烯酰胺+1.6g 亚甲基双丙烯酰胺+水至 200ml 溶液。（缺货） （2） 10%四甲基乙二胺（100ml）：10ml 四甲基乙二胺+水至 100ml 溶液。 （3） 10%过硫酸铵（5ml）：0.5g 过硫酸铵+水至 5ml 溶液（当天配制）。 （4） 两性电解质载体 pH 3-10 （上海试剂二厂）。（缺货） （5） 电极溶液： （A）、5%H3PO4（10000ml）：588ml 85%H3PO4+H2O 至 10000ml 溶液。 （B）、2%NaOH（10000ml）：200g NaOH+H2O 至 10000ml 溶液。 （6） 40%蔗糖（100ml）：40g 蔗糖+水至 100ml 溶液。 （7） 考马斯亮兰 R250（500ml）：0.25g R250+50ml Hac+450ml H2O 至 500ml 溶液。 （8） 脱色液 7%醋酸（1000ml）：200ml HAc+H2O 至 1000ml 溶液。 （9） 10%TCA（1000ml）：100g 三氯乙酸+H2O 至 1000ml 溶液。（可能不配） 2．器材： （1） 12 个电泳槽（2）12 台电泳仪（3）12 长针头（4）200ul 加样器 48 把（5）刀片 12 片 （6）PH 试纸（3—10）12 套（7）细铜丝 180 条。 （七）实验十六、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白分子量（垂直电泳槽） 实验十七、聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定蛋白分子量（垂直电泳槽）（PAGE，把 SDS 换水，无巯基 乙醇） 1．试剂：

（1） 10%SDS(200ml)：20g 十二烷基硫酸钠+水至 200ml 溶液。 （2） （神经毒剂）（50ml 棕色）凝胶贮液（400ml）：115.2g+86.4g 丙烯酰胺+3.2g+2.4g 甲叉酰丙烯 酰胺+水至 400+150ml 溶液。 （3） （10ml 离心管）分离胶缓冲液（100ml）：1N HCl 63ml+Tris 54.9g+H2O 至 150ml 溶液，调 PH8.9。 （4） （10ml 离心管）浓缩胶缓冲液（100ml）：1N HCl 72ml+Tris 8.97g+H2O 至 150ml 溶液，调 PH6.7。 （5） （统分老师）10%过硫酸铵（5ml）：0.8g 过硫酸铵+H2O 至 8ml 溶液（当天配制）。 （6） （1.5ml 离心管）10%TEMED（100ml）：10ml TEMED+H2O 至 100ml 溶液。 （7） （边配）电极缓冲液 pH 8.3（7500ml）：Tris45g+Gly210g+10%SDS75ml+H2O 至 7500ml 溶液。 （8） 样品液（10ml）：浓缩胶缓冲液 0.2ml+10%SDS1ml+巯基乙醇 0.1ml+蔗糖 4g+溴酚蓝 2mg+H2O 至 10ml 溶液。 （9） （边配）染色液（500ml）：0.4g考马斯亮兰R250+100ml 冰乙酸+甲醇450ml+水450ml至1000ml 溶液。 （10） （边配统分）1.8%琼脂（500ml）：7.5g 琼脂加水溶解至 500ml 溶液。 2．器材： （1） 12 个电泳槽（2）12 台稳压稳流电泳仪（3）12 支长针头（4）200ul 加样器 12 把（5）刀片 12 片（6）pH 试纸（3—10）12 套（7）细铜丝 180 条。 （八）实验十三、考马斯亮兰测定蛋白浓度 1．试剂： (1) (白色 60ml)标准蛋白液 1mg/ml（400ml）：0.4g 牛血清蛋白+H2O 400ml 溶解。 (2) （手易着色）考马斯亮兰试剂（10000ml）：1.0g G250+500ml 95%乙醇+1000ml 85%H3PO4 溶解 +H2O。 (3) (白色 60ml)待测蛋白液：0.24g 牛血清蛋白+H2O 400ml 溶解。 2．器材：（1）722 分光光度计 25 台 (2)记号笔 12 支。 附：双缩脲法：蛋白质的定量分析 1．试剂： （10） 双缩脲试剂： 500ml ： 0.75gCuSO4·5H2O+3.0g 酒石酸钾钠 +H2O( 溶 解 )+ 150ml 10%NaOH+0.5gKI+H2O 至 500ml。 （11） 生理盐水（0.9% NaCl）：1000ml。 （12） 标准蛋白溶液（2mg/ml，BSA，150ml）：0.3gBSA+150ml 生理盐水（4 0C 保存）。 （13） 待测蛋白液： 1ml 卵清+100ml 生理盐水（4000rpm 离心 2 分钟），吸上清+生理盐水 100ml， （4 0C 保存）。 2．仪器：（1）722 分光光度计 10 台（2）水浴锅 3 台 （九）实验二十二、氨基酸的纸上层析法与酪蛋白氨基酸成分的研究 1． 试剂： （1） （手易着色）0.5%茚三酮（2000ml）：10g 茚三酮+95%乙醇至 2000ml 溶液。 （2） （强酸）0.01N HCl（500ml）：5ml 1N HCl+H2O 495ml。 （3） (10ml 离心管)标准氨基酸溶液：Lys、Ser、Pro、Val、Leu、五种混合物各 0.1g+50ml 0.01N HCl。 （4） 正丁醇 8 瓶，95%乙醇 3 瓶，88%甲酸 2 瓶。 2． 器材：

（1） 10%SDS(200ml)：20g 十二烷基硫酸钠+水至 200ml 溶液。 （2） （神经毒剂）（50ml 棕色）凝胶贮液（400ml）：115.2g+86.4g 丙烯酰胺+3.2g+2.4g 甲叉酰丙烯 酰胺+水至 400+150ml 溶液。 （3） （10ml 离心管）分离胶缓冲液（100ml）：1N HCl 63ml+Tris 54.9g+H2O 至 150ml 溶液，调 PH8.9。 （4） （10ml 离心管）浓缩胶缓冲液（100ml）：1N HCl 72ml+Tris 8.97g+H2O 至 150ml 溶液，调 PH6.7。 （5） （统分老师）10%过硫酸铵（5ml）：0.8g 过硫酸铵+H2O 至 8ml 溶液（当天配制）。 （6） （1.5ml 离心管）10%TEMED（100ml）：10ml TEMED+H2O 至 100ml 溶液。 （7） （边配）电极缓冲液 pH 8.3（7500ml）：Tris45g+Gly210g+10%SDS75ml+H2O 至 7500ml 溶液。 （8） 样品液（10ml）：浓缩胶缓冲液 0.2ml+10%SDS1ml+巯基乙醇 0.1ml+蔗糖 4g+溴酚蓝 2mg+H2O 至 10ml 溶液。 （9） （边配）染色液（500ml）：0.4g考马斯亮兰R250+100ml 冰乙酸+甲醇450ml+水450ml至1000ml 溶液。 （10） （边配统分）1.8%琼脂（500ml）：7.5g 琼脂加水溶解至 500ml 溶液。 2．器材： （1） 12 个电泳槽（2）12 台稳压稳流电泳仪（3）12 支长针头（4）200ul 加样器 12 把（5）刀片 12 片（6）pH 试纸（3—10）12 套（7）细铜丝 180 条。 （八）实验十三、考马斯亮兰测定蛋白浓度 1．试剂： (1) (白色 60ml)标准蛋白液 1mg/ml（400ml）：0.4g 牛血清蛋白+H2O 400ml 溶解。 (2) （手易着色）考马斯亮兰试剂（10000ml）：1.0g G250+500ml 95%乙醇+1000ml 85%H3PO4 溶解 +H2O。 (3) (白色 60ml)待测蛋白液：0.24g 牛血清蛋白+H2O 400ml 溶解。 2．器材：（1）722 分光光度计 25 台 (2)记号笔 12 支。 附：双缩脲法：蛋白质的定量分析 1．试剂： （10） 双缩脲试剂： 500ml ： 0.75gCuSO4·5H2O+3.0g 酒石酸钾钠 +H2O( 溶 解 )+ 150ml 10%NaOH+0.5gKI+H2O 至 500ml。 （11） 生理盐水（0.9% NaCl）：1000ml。 （12） 标准蛋白溶液（2mg/ml，BSA，150ml）：0.3gBSA+150ml 生理盐水（4 0C 保存）。 （13） 待测蛋白液： 1ml 卵清+100ml 生理盐水（4000rpm 离心 2 分钟），吸上清+生理盐水 100ml， （4 0C 保存）。 2．仪器：（1）722 分光光度计 10 台（2）水浴锅 3 台 （九）实验二十二、氨基酸的纸上层析法与酪蛋白氨基酸成分的研究 1． 试剂： （1） （手易着色）0.5%茚三酮（2000ml）：10g 茚三酮+95%乙醇至 2000ml 溶液。 （2） （强酸）0.01N HCl（500ml）：5ml 1N HCl+H2O 495ml。 （3） (10ml 离心管)标准氨基酸溶液：Lys、Ser、Pro、Val、Leu、五种混合物各 0.1g+50ml 0.01N HCl。 （4） 正丁醇 8 瓶，95%乙醇 3 瓶，88%甲酸 2 瓶。 2． 器材：

（1） 19×21cm 滤纸 48 张（2）层析缸 48 个（3）喷雾器 2 个（4）电吹风 48 把（5）毛细管 100 支 (6)针数支。 （十）实验十九、酪蛋白的制备 1．试剂： （1） (白色 60ml)牛乳（6000ml）：600g 牛奶加水至 6000ml 溶液。 （2） （白色 125ml）醋酸钠缓冲液压 0.2M pH4.6（4000ml）：980ml NaAc+1020ml HAc 0.2M NaAc：41g NaAc+H2O 至 2500ml 溶液。 0.2M Hac：30ml HAc+H2O 至 2500ml 溶液。 （（33）） 00. .1155MMNNaaCCl l（（220000mml l））：：11. .775555gg++HH22OO至至220000mml l 溶溶液液。 （4） 乙醇：6 瓶。 （5） 乙醚：5 瓶。 2．器材： （1）恒温水浴锅 12 台（2） 722 分光光度计 25 台 33））细细布布 2200ccmm××2200ccmm××2266块块（（44））布布氏氏漏漏斗斗++ 抽抽滤滤瓶瓶 44套套（5）PH 试纸 3.8—5.4 12 本（（66））酸酸度度计计44台台（7）台式离心机 12 台（8）铁架台+铁圈 48 套。 （十一）实验十、血清胆固醇的定量测定 1． 试剂： （1） P S Fe 试剂（500ml）：0.75g 三氯化铁+7.5ml 磷酸+492.5ml 硫酸。 （2） 胆固醇标准液（0.08mg/ml）：0.02g 胆固醇+250ml 无水乙醇溶解。 （3） 无水乙醇：2 瓶。 2． 器材：（1）722 分光光度计 25 台（2）台式离心机 12 台。 （十二）实验二十六、维生素 C 的测定 1．试剂： （1） 0.02M 的 I2-KI 溶液 10000ml。 (2) (白色 60ml)5mg/ml 的维生素 C 500ml：2.5g+H2O 至 500ml。 (3) （白色滴瓶）2%淀粉 500ml：10g+H2O 至 500ml。 (4) 弥猴桃 3 斤。 2．器材： （1）铁架台+蝴蝶夹 48 套（2）滴定管 48 支（3）捣碎机 12 台（4）小刀数把。 （十三）实验九、粗脂肪的测定 1、试剂：（1） 乙醚。 （2） 奶粉。 2、器材：（1） 脂肪测定仪 4 台。 （十四）实验十八、血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 1、试剂：（1） 新鲜血清。 （2） 巴比妥-巴比妥钠 buffer（pH8.6，0.07M，离子强度 0.075）：1.66g 巴比妥+12.76g 巴比 妥钠+ H2O 至 1000ml。 （3） （贝塞试剂瓶）染色液：0.5g 氨基黑 10B+40ml H2O +50ml 甲醇+10ml 冰醋酸，混匀。 （4） 透明液：25 ml 冰醋酸+75ml 95%乙醇

（1） 19×21cm 滤纸 48 张（2）层析缸 48 个（3）喷雾器 2 个（4）电吹风 48 把（5）毛细管 100 支 (6)针数支。 （十）实验十九、酪蛋白的制备 1．试剂： （1） (白色 60ml)牛乳（6000ml）：600g 牛奶加水至 6000ml 溶液。 （2） （白色 125ml）醋酸钠缓冲液压 0.2M pH4.6（4000ml）：980ml NaAc+1020ml HAc 0.2M NaAc：41g NaAc+H2O 至 2500ml 溶液。 0.2M Hac：30ml HAc+H2O 至 2500ml 溶液。 （（33）） 00. .1155MMNNaaCCl l（（220000mml l））：：11. .775555gg++HH22OO至至220000mml l 溶溶液液。 （4） 乙醇：6 瓶。 （5） 乙醚：5 瓶。 2．器材： （1）恒温水浴锅 12 台（2） 722 分光光度计 25 台 33））细细布布 2200ccmm××2200ccmm××2266块块（（44））布布氏氏漏漏斗斗++ 抽抽滤滤瓶瓶 44套套（5）PH 试纸 3.8—5.4 12 本（（66））酸酸度度计计44台台（7）台式离心机 12 台（8）铁架台+铁圈 48 套。 （十一）实验十、血清胆固醇的定量测定 1． 试剂： （1） P S Fe 试剂（500ml）：0.75g 三氯化铁+7.5ml 磷酸+492.5ml 硫酸。 （2） 胆固醇标准液（0.08mg/ml）：0.02g 胆固醇+250ml 无水乙醇溶解。 （3） 无水乙醇：2 瓶。 2． 器材：（1）722 分光光度计 25 台（2）台式离心机 12 台。 （十二）实验二十六、维生素 C 的测定 1．试剂： （1） 0.02M 的 I2-KI 溶液 10000ml。 (2) (白色 60ml)5mg/ml 的维生素 C 500ml：2.5g+H2O 至 500ml。 (3) （白色滴瓶）2%淀粉 500ml：10g+H2O 至 500ml。 (4) 弥猴桃 3 斤。 2．器材： （1）铁架台+蝴蝶夹 48 套（2）滴定管 48 支（3）捣碎机 12 台（4）小刀数把。 （十三）实验九、粗脂肪的测定 1、试剂：（1） 乙醚。 （2） 奶粉。 2、器材：（1） 脂肪测定仪 4 台。 （十四）实验十八、血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 1、试剂：（1） 新鲜血清。 （2） 巴比妥-巴比妥钠 buffer（pH8.6，0.07M，离子强度 0.075）：1.66g 巴比妥+12.76g 巴比 妥钠+ H2O 至 1000ml。 （3） （贝塞试剂瓶）染色液：0.5g 氨基黑 10B+40ml H2O +50ml 甲醇+10ml 冰醋酸，混匀。 （4） 透明液：25 ml 冰醋酸+75ml 95%乙醇

（5） 漂洗液：45ml 乙醇+5ml 冰醋酸+50ml H2O。 2、器材：（1） 平板电泳槽 4 台（2） 滤纸 12cm 1 盒（3）刀片 12 片。 （十五）分光光度法-高锰酸钾吸收曲线的绘制 1、试剂：（1）0.0125% KmnO4 (100ml) ：0.0125g KmnO4 加水至 100ml。 2、器材：（1）722 分光光度计 25 台。 （十六）实验二十五、核酸的含量测定 二苯胺显色法测定 DNA 的含量和地衣酚显色法测定 RNA 的含量（测试） 1．试剂： （1） DNA 标准液（1000ml，200μg/ml）：取 DNA 钠盐 0.2g 以 0.01N NaOH 溶解至 1000ml 溶液。 （2） 样品液：用 0.01N NaOH 冲稀或用 0.05gDNA 溶解至 500ml 溶液。 （3） 二苯胺试剂（4000ml，分 2 瓶）：40g 二苯胺+4000ml 冰乙酸+400ml 高氯酸； 先配 100ml 1.6%乙醛(1.6ml 原液加水至 100ml)，临用前 2000ml 加 20ml。 （4） RNA 标准液（1000ml）：取 0.1g 加水至 1000ml。 （5） RNA 样品液（500ml）：取 0.03g 加水至 500ml。 （6） 地衣酚试剂（2000ml，分 2 瓶）：2g 三氯化铁加浓盐酸至 2000ml 溶液。 临用前 1000ml 加 1g 地衣酚。 2．器材：（1）恒温水浴锅 12 台（2） 722 分光光度计 25 台（3）座标纸 48 张。 紫外吸收法测定核酸含量（RNA）(考试) 1．试剂： （1） 0.1N NaOH 100ml。 （2） 0.05N NaOH 100ml。 （3） （白色 250ml） RNA 空白液：0.1N NaOH 2ml +0.05N NaOH 4ml+H2O 至 3000ml。 （4） （白色 250ml）标准 RNA 液 50ug/ml：0.15g+0.1N NaOH 2ml+0.05N NaOH 4ml+H2O 至 3000ml。 （5） （白色 60ml 试剂瓶）待测液 20 种 RNA。 样品液 （50ml） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 标准液 （ml） 35 34 33 32 31 30 29 28 27 26 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 35 34 33 32 31 空白液 （ml） 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 15 16 17 18 19 非考试版 1、 待测液：5mgRNA 用 0.1N NaOH 2ml 使之溶解，再加 0.05N NaOH 4ml，然后用蒸馏水定容 250ml，分 装 6 瓶（待测 RNA）,(RNA 50ug/ml) 2、 空白对照液：0.1N NaOH 2ml + 0.05N NaOH 4ml +H2O 至 250ml，分装 6 瓶。 2．器材 （1）752 分光光度计 24 台

（5） 漂洗液：45ml 乙醇+5ml 冰醋酸+50ml H2O。 2、器材：（1） 平板电泳槽 4 台（2） 滤纸 12cm 1 盒（3）刀片 12 片。 （十五）分光光度法-高锰酸钾吸收曲线的绘制 1、试剂：（1）0.0125% KmnO4 (100ml) ：0.0125g KmnO4 加水至 100ml。 2、器材：（1）722 分光光度计 25 台。 （十六）实验二十五、核酸的含量测定 二苯胺显色法测定 DNA 的含量和地衣酚显色法测定 RNA 的含量（测试） 1．试剂： （1） DNA 标准液（1000ml，200μg/ml）：取 DNA 钠盐 0.2g 以 0.01N NaOH 溶解至 1000ml 溶液。 （2） 样品液：用 0.01N NaOH 冲稀或用 0.05gDNA 溶解至 500ml 溶液。 （3） 二苯胺试剂（4000ml，分 2 瓶）：40g 二苯胺+4000ml 冰乙酸+400ml 高氯酸； 先配 100ml 1.6%乙醛(1.6ml 原液加水至 100ml)，临用前 2000ml 加 20ml。 （4） RNA 标准液（1000ml）：取 0.1g 加水至 1000ml。 （5） RNA 样品液（500ml）：取 0.03g 加水至 500ml。 （6） 地衣酚试剂（2000ml，分 2 瓶）：2g 三氯化铁加浓盐酸至 2000ml 溶液。 临用前 1000ml 加 1g 地衣酚。 2．器材：（1）恒温水浴锅 12 台（2） 722 分光光度计 25 台（3）座标纸 48 张。 紫外吸收法测定核酸含量（RNA）(考试) 1．试剂： （1） 0.1N NaOH 100ml。 （2） 0.05N NaOH 100ml。 （3） （白色 250ml） RNA 空白液：0.1N NaOH 2ml +0.05N NaOH 4ml+H2O 至 3000ml。 （4） （白色 250ml）标准 RNA 液 50ug/ml：0.15g+0.1N NaOH 2ml+0.05N NaOH 4ml+H2O 至 3000ml。 （5） （白色 60ml 试剂瓶）待测液 20 种 RNA。 样品液 （50ml） 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 标准液 （ml） 35 34 33 32 31 30 29 28 27 26 25 24 23 22 21 20 19 18 17 16 35 34 33 32 31 空白液 （ml） 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 15 16 17 18 19 非考试版 1、 待测液：5mgRNA 用 0.1N NaOH 2ml 使之溶解，再加 0.05N NaOH 4ml，然后用蒸馏水定容 250ml，分 装 6 瓶（待测 RNA）,(RNA 50ug/ml) 2、 空白对照液：0.1N NaOH 2ml + 0.05N NaOH 4ml +H2O 至 250ml，分装 6 瓶。 2．器材 （1）752 分光光度计 24 台

十二、考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度 2．1 试剂 (1)标准蛋白质溶液 （500ml） 结晶牛血清白蛋白，预先经微量凯氏定氮法或按牛血清白蛋白 1% OD1cm =6.6 测定蛋白质含量，再用蒸 馏水配制成 1 mg/mL 蛋白溶液（缺货）。 0.56g 酪蛋白+20ml 10%NAOH 溶解后加 1N HCL 调节 PH7.0 约 50ML +0.15mol/l NaCL 至 250ml。 (2)考马斯亮蓝试剂 （8000ml） 考马斯亮蓝 G-250 100 mg 溶于 50 mL 95%乙醇中，加入 100 mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至 1000 mL， 滤纸过滤。最终试剂中含 0.01%(W/V)考马斯亮蓝 G-250，4.7%(W/V)乙醇，8.5%(W/V)磷酸。 0.8g 考马斯亮蓝 G-250+400ml 95%乙醇+800ml 85%磷酸+H2O 至 8000ml。 ((33))00. .1155mmool l / / l l NNaaCCl l((550000mml l)): :: 88. .7766ggNNaaCCl l++HH22OO至至11000000mml l。 (4)待测样品 未知蛋白质溶液，要求蛋白浓度范围为 0.1-0.6 mg/mL，若浓度过高时，需用 0.15 mol/L NaCl 溶液或 蒸馏水适当稀释。50ml 标准酪蛋白+0.15Mol/NaCL50ml 至 100ml 配成待测液。 十一、核酸水解及成份鉴定 1、 10%硫酸 （500ml）：50ml H2SO4 加水至 500ml 2、 1N 氨水：（200ml）15ml 加水至 200ml 3、 0.1N 硝酸银：4.38gAgNO3 加水至 250ml 4、 钼酸铵：8g 钼酸铵加 10%硫酸至 200ml 5、 二苯胺试剂：200ml 冰乙酸+11ml 浓硫酸 6、 地主酚试剂：0.15g 三氯化铁+150mlHCl 至 150ml 0.238g 甲基苯二酚至 50ml 十三、蔗糖密度梯度离心分离细胞器 1、 10%蔗糖：每组 8ml,10ml? 2、 20%蔗糖：每组 6 ml 3、 30%蔗糖：每组 6ml 4、 40%蔗糖：每组 12ml 5、 猫肝：每次 100g+100ml 水

十二、考马斯亮蓝染色法测定蛋白质浓度 2．1 试剂 (1)标准蛋白质溶液 （500ml） 结晶牛血清白蛋白，预先经微量凯氏定氮法或按牛血清白蛋白 1% OD1cm =6.6 测定蛋白质含量，再用蒸 馏水配制成 1 mg/mL 蛋白溶液（缺货）。 0.56g 酪蛋白+20ml 10%NAOH 溶解后加 1N HCL 调节 PH7.0 约 50ML +0.15mol/l NaCL 至 250ml。 (2)考马斯亮蓝试剂 （8000ml） 考马斯亮蓝 G-250 100 mg 溶于 50 mL 95%乙醇中，加入 100 mL 85%磷酸，用蒸馏水稀释至 1000 mL， 滤纸过滤。最终试剂中含 0.01%(W/V)考马斯亮蓝 G-250，4.7%(W/V)乙醇，8.5%(W/V)磷酸。 0.8g 考马斯亮蓝 G-250+400ml 95%乙醇+800ml 85%磷酸+H2O 至 8000ml。 ((33))00. .1155mmool l / / l l NNaaCCl l((550000mml l)): :: 88. .7766ggNNaaCCl l++HH22OO至至11000000mml l。 (4)待测样品 未知蛋白质溶液，要求蛋白浓度范围为 0.1-0.6 mg/mL，若浓度过高时，需用 0.15 mol/L NaCl 溶液或 蒸馏水适当稀释。50ml 标准酪蛋白+0.15Mol/NaCL50ml 至 100ml 配成待测液。 十一、核酸水解及成份鉴定 1、 10%硫酸 （500ml）：50ml H2SO4 加水至 500ml 2、 1N 氨水：（200ml）15ml 加水至 200ml 3、 0.1N 硝酸银：4.38gAgNO3 加水至 250ml 4、 钼酸铵：8g 钼酸铵加 10%硫酸至 200ml 5、 二苯胺试剂：200ml 冰乙酸+11ml 浓硫酸 6、 地主酚试剂：0.15g 三氯化铁+150mlHCl 至 150ml 0.238g 甲基苯二酚至 50ml 十三、蔗糖密度梯度离心分离细胞器 1、 10%蔗糖：每组 8ml,10ml? 2、 20%蔗糖：每组 6 ml 3、 30%蔗糖：每组 6ml 4、 40%蔗糖：每组 12ml 5、 猫肝：每次 100g+100ml 水