实验目的与要求 1. 掌握Feulgen反应的基本原理 2. 掌握PAS反应的基本原理 3. 熟悉传统细胞化学实验的基本实验技能
实验目的与要求 1. 掌握Feulgen反应的基本原理 2. 掌握PAS反应的基本原理 3. 熟悉传统细胞化学实验的基本实验技能
一、实验的基本原理 细胞内核酸、蛋白质、 酶、糖与脂类等的显示方法 原理:利用一些显色剂与所检测物质中一些 特殊基团特异性结合的特征,通过显 色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来 判断某种物质在细胞中的分布和含量
一、实验的基本原理 细胞内核酸、蛋白质、 酶、糖与脂类等的显示方法 原理:利用一些显色剂与所检测物质中一些 特殊基团特异性结合的特征,通过显 色剂在细胞中的定位及颜色的深浅来 判断某种物质在细胞中的分布和含量
Feulgen反应的基本原理: 稀HCl水解DNA,破坏嘌呤和 脱氧核糖间的配糖键,并在脱 氧核糖C1端形成游离的醛基, 醛基和Schiff试剂结合,形成 紫红色的化合物。因此在有 DNA的部位,就会呈现除紫 红色阳性反应
Feulgen反应的基本原理: 稀HCl水解DNA,破坏嘌呤和 脱氧核糖间的配糖键,并在脱 氧核糖C1端形成游离的醛基, 醛基和Schiff试剂结合,形成 紫红色的化合物。因此在有 DNA的部位,就会呈现除紫 红色阳性反应
PAS反应的基本原理: 利用强氧化剂使多糖产生游离的 醛基,醛基和Schiff试剂结合, 形成紫红色的化合物。因此在有 多糖的部位,就会呈现除紫红色 阳性反应
PAS反应的基本原理: 利用强氧化剂使多糖产生游离的 醛基,醛基和Schiff试剂结合, 形成紫红色的化合物。因此在有 多糖的部位,就会呈现除紫红色 阳性反应
二、试剂与器材 青蛙、鸭子 剪刀、载玻片、盖玻片、吸管、甲醇、1 mol/L 盐 酸、Schiff试剂、亚硫酸盐溶液、1%亮绿水溶液、 1%过碘酸、苏木精、甘油/PBS封片剂 普通光学显微镜
二、试剂与器材 青蛙、鸭子 剪刀、载玻片、盖玻片、吸管、甲醇、1 mol/L 盐 酸、Schiff试剂、亚硫酸盐溶液、1%亮绿水溶液、 1%过碘酸、苏木精、甘油/PBS封片剂 普通光学显微镜
核酸的显示——Feulgen反应 1. 取鸭血,血涂片,室温凉干,甲醇室温固定5 min,凉干; 2. 蒸馏水过一下; 3. 1 mol/L 盐酸(600C )水解8-10 min; 4. 1 mol/L 盐酸(室温)1 min; 5. 蒸馏水稍洗; 6. 置Schiff试剂中室温染色1小时左右; 7. 亚硫酸盐溶液洗3次,总时间为6 min; 8. 自来水流水冲洗5 min,蒸馏水过一下; 9. 用1%亮绿水溶液复染5-10秒; 10. 自来水流水冲洗2 min; 11. 蒸馏水稍洗; 12. 甘油/PBS封片剂封片;显微镜观察。 三、实验步骤
核酸的显示——Feulgen反应 1. 取鸭血,血涂片,室温凉干,甲醇室温固定5 min,凉干; 2. 蒸馏水过一下; 3. 1 mol/L 盐酸(600C )水解8-10 min; 4. 1 mol/L 盐酸(室温)1 min; 5. 蒸馏水稍洗; 6. 置Schiff试剂中室温染色1小时左右; 7. 亚硫酸盐溶液洗3次,总时间为6 min; 8. 自来水流水冲洗5 min,蒸馏水过一下; 9. 用1%亮绿水溶液复染5-10秒; 10. 自来水流水冲洗2 min; 11. 蒸馏水稍洗; 12. 甘油/PBS封片剂封片;显微镜观察。 三、实验步骤
糖类的显示——PAS反应 1. 取鸭血,血涂片,室温凉干,甲醇室温固定5 min,凉干; 2. 蒸馏水过一下; 3. 1%过碘酸水溶液浸泡2-5min; 4. 蒸馏水洗; 5. Schiff试剂浸泡15min; 6. 亚硫酸盐溶液浸泡3次,共6min; 7. 自来水冲洗5min; 8. 蒸馏水浸泡1min; 9. 苏木精复染细胞核10-15min; 10. 自来水流水冲洗2min; 11. 蒸馏水稍洗; 12. 甘油/PBS封片剂封片; 13. 显微镜观察
糖类的显示——PAS反应 1. 取鸭血,血涂片,室温凉干,甲醇室温固定5 min,凉干; 2. 蒸馏水过一下; 3. 1%过碘酸水溶液浸泡2-5min; 4. 蒸馏水洗; 5. Schiff试剂浸泡15min; 6. 亚硫酸盐溶液浸泡3次,共6min; 7. 自来水冲洗5min; 8. 蒸馏水浸泡1min; 9. 苏木精复染细胞核10-15min; 10. 自来水流水冲洗2min; 11. 蒸馏水稍洗; 12. 甘油/PBS封片剂封片; 13. 显微镜观察