实验二 叶绿体的分离与观察和细胞大小的测量 一. 实验原理 1.组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。 一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度,也同离心 力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中,同一时间内,密度和大 小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间,就能够使非均 一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部,分批收集即 可获得各种亚细胞组分。 2. 应用显微镜的成像原理,同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺, 两尺配合使用,进行测量和运算,得出细胞的大小。 二.试剂与器械 1. 器材 : 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。烧杯2个, 250ml量筒1个, 滴管20支, 10ml刻度离心管20支, 试管架5个,纱布若干, 无荧光载片和盖片各4片。 2. 试剂: 0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙(acridine orange)
实验二 叶绿体的分离与观察和细胞大小的测量 一. 实验原理 1.组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心,是分离细胞器的常用方法。 一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度,也同离心 力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中,同一时间内,密度和大 小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间,就能够使非均 一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部,分批收集即 可获得各种亚细胞组分。 2. 应用显微镜的成像原理,同时借助显微镜的镜台测微尺和目镜测微尺, 两尺配合使用,进行测量和运算,得出细胞的大小。 二.试剂与器械 1. 器材 : 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。烧杯2个, 250ml量筒1个, 滴管20支, 10ml刻度离心管20支, 试管架5个,纱布若干, 无荧光载片和盖片各4片。 2. 试剂: 0.35mol/L氯化钠溶液,0.01%吖啶橙(acridine orange)
三. 实验步骤 (一)叶绿体的分离与观察 1.选取新鲜的嫩菠菜叶,洗净擦干后去除叶梗脉,称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中,装入组织捣碎机。 2. 利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀桨3-5min。 3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。 4. 取滤液4ml在1000r/min下离心2min,弃去沉淀。 5. 将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液,沉淀即是叶绿体 (混有部分细胞核)。 6. 将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。 7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上,加盖玻片后即可在显微镜下观察
三. 实验步骤 (一)叶绿体的分离与观察 1.选取新鲜的嫩菠菜叶,洗净擦干后去除叶梗脉,称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中,装入组织捣碎机。 2. 利用组织捣碎机低速(5000r/min)匀桨3-5min。 3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。 4. 取滤液4ml在1000r/min下离心2min,弃去沉淀。 5. 将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清液,沉淀即是叶绿体 (混有部分细胞核)。 6. 将沉淀用0.35mol/LNaCl溶液悬浮。 7. 取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上,加盖玻片后即可在显微镜下观察
目镜测微尺 基础知识
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奥林巴斯显微镜常用测微尺
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(二)测微尺的使用操作 1. 卸下目镜的上透镜,将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上, 再旋上目镜的上透镜。 2. 将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好,使测微尺刻度位 于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。 3. 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊,可转动 目镜上透镜进行调焦),使两尺左边的"0"点一直线重合,然后由左向右 找出两尺另一次重复的直线(图1-6)。 4·记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目 镜测微尺每格的长度等于多少µm 目镜测微尺每格的长度/ µm=镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数 (三) 鸭血细胞的观察测量 将已经制备好的鸭血涂片放在染色盘架上,滴数滴瑞氏-吉姆萨染液欲 涂片上,静置染色1分钟,滴加等量1/15mol/L磷酸缓冲液,用牙签轻轻 搅拌混匀,再静置染色5-10分钟,最后用清水缓缓冲洗1分钟,倾斜放 置,凉干后进行观察测量
(二)测微尺的使用操作 1. 卸下目镜的上透镜,将目镜测微尺有刻度一面向下装在目镜镜面上, 再旋上目镜的上透镜。 2. 将镜台测微尺有刻度一面朝上放在载物台上夹好,使测微尺刻度位 于视野中央。调焦至看清镜台测微尺的刻度。 3. 小心移动镜台测微尺和目镜测微尺(如目镜测微尺刻度模糊,可转动 目镜上透镜进行调焦),使两尺左边的"0"点一直线重合,然后由左向右 找出两尺另一次重复的直线(图1-6)。 4·记录两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目 镜测微尺每格的长度等于多少µm 目镜测微尺每格的长度/ µm=镜台测微尺的格数/目镜测微尺的格数 (三) 鸭血细胞的观察测量 将已经制备好的鸭血涂片放在染色盘架上,滴数滴瑞氏-吉姆萨染液欲 涂片上,静置染色1分钟,滴加等量1/15mol/L磷酸缓冲液,用牙签轻轻 搅拌混匀,再静置染色5-10分钟,最后用清水缓缓冲洗1分钟,倾斜放 置,凉干后进行观察测量
四. 注意事项 不同物镜下目镜测微尺代表的大小不同。 五. 实验结果 1. 普通光镜下,可看到叶绿体为绿色橄榄形,在高倍镜下可 看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒,即基粒。 2. 用目微尺和台微尺测量一下叶绿体的长轴和短轴,分别测 量5-10个叶绿体,求其平均值。 六. 思考题 1. 分别计算不同物镜放大倍数下测微尺的单位。 2. 鸭红细胞直径为多少微米
四. 注意事项 不同物镜下目镜测微尺代表的大小不同。 五. 实验结果 1. 普通光镜下,可看到叶绿体为绿色橄榄形,在高倍镜下可 看到叶绿体内部含有较深的绿色小颗粒,即基粒。 2. 用目微尺和台微尺测量一下叶绿体的长轴和短轴,分别测 量5-10个叶绿体,求其平均值。 六. 思考题 1. 分别计算不同物镜放大倍数下测微尺的单位。 2. 鸭红细胞直径为多少微米