量观察检测。荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件（如荧光光源、激发 滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。荧光是某些物质在一定短波长的光（如 紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，放射出的比照射光波长更长 的光（如可见光）。荧光物质都是吸收短波长的光而发出较长波长的光，比如DAPI吸收禁 色光发出蓝色荧光，绿色荧光蛋白、FTC吸收蓝色光发出绿色荧光，CY3、PI吸收绿色光 发出红色荧光，CY5吸收红色光发出波长为670纳米的红外线。荧光必须是在有激发光照 射的情况下才会有，若停止供能，荧光现象立即停止。荧光可分为直接荧光和间接荧光两种。 直接荧光：在生物的某些组织中，经紫外线照射后能直接发射出荧光，又称为自发荧光，如 植物组织中的叶绿素，经紫外线照射后，即可发出红色荧光。间接荧光：有些生物组织经紫 外线照射后，并不能发出荧光，但是当它吸收荧光染料后也可以产生荧光，又称为次生荧光 如吖啶橙，DAPI 吖啶橙(Acridine Orange,.AO)是一种荧光色素，其激发滤光片波长48Snm,阻断滤 光片波长S15nm。它与细胞中DNA和 RNA结合量存在差别，可发出不同颜 色的荧光（即着色特异性），这是由 于DNA是个高度聚合物，吸收荧光物 质的位置较少，发绿色荧光，而RNA 聚合度低，能和荧光物质结合的位置 多，故发红色荧光。用0.01%吖啶橙 荧光染料对叶绿体进行染色，于荧光 显微镜下观察，可观察到叶绿体发橙 红色荧光。 图7普通光学显微镜下观察到的叶绿体 【材料、器具与试剂】 (一)材料：菠莱叶片 (二)器具：普通离心机，组织坞碎机，天平，荧光显微镜，普通光学显微镜，载玻片，盖 玻片，镊子，培养皿，滤纸，试管，试管架，滴管，无荧光载片，移液器，1.5ml离心管。 量筒，烧杯。 (三)试剂： 1.蒸馏水 2.0.35M氯化钠溶液：取2048g氯化钠，用蒸馏水溶解，定容至1L。 3.0.1%吖啶橙(acridine orange:)称取0.1g吖啶橙，加蒸馏水100ml溶解，作为母液贮 棕色瓶中，放冰箱备用。 4.0.01%吖啶橙((acridine orange):临用前，取1ml0.1%吖啶橙母液，加9ml蒸馏水， 混匀。 【实验步骤】 量观察检测。荧光显微镜的基本构造是由普通光学显微镜加上一些附件(如荧光光源、激发 滤片、双色束分离器和阻断滤片等)的基础上组成的。荧光是某些物质在一定短波长的光（如 紫外光）的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，放射出的比照射光波长更长 的光（如可见光）。荧光物质都是吸收短波长的光而发出较长波长的光，比如 DAPI 吸收紫 色光发出蓝色荧光，绿色荧光蛋白、FITC 吸收蓝色光发出绿色荧光，CY3、PI 吸收绿色光 发出红色荧光，CY5 吸收红色光发出波长为 670 纳米的红外线。 荧光必须是在有激发光照 射的情况下才会有，若停止供能，荧光现象立即停止。荧光可分为直接荧光和间接荧光两种。 直接荧光：在生物的某些组织中，经紫外线照射后能直接发射出荧光，又称为自发荧光，如 植物组织中的叶绿素，经紫外线照射后，即可发出红色荧光。间接荧光：有些生物组织经紫 外线照射后，并不能发出荧光，但是当它吸收荧光染料后也可以产生荧光，又称为次生荧光， 如吖啶橙，DAPI。 吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一种荧光色素，其激发滤光片波长 488nm，阻断滤 光片波长 515nm。它与细胞中 DNA 和 RNA 结合量存在差别，可发出不同颜 色的荧光（即着色特异性），这是由 于 DNA 是个高度聚合物，吸收荧光物 质的位置较少，发绿色荧光，而 RNA 聚合度低，能和荧光物质结合的位置 多，故发红色荧光。用 0.01%吖啶橙 荧光染料对叶绿体进行染色，于荧光 显微镜下观察，可观察到叶绿体发橙 红色荧光。 图 7 普通光学显微镜下观察到的叶绿体 【材料、器具与试剂】 （一）材料：菠菜叶片 （二）器具：普通离心机，组织捣碎机，天平，荧光显微镜，普通光学显微镜，载玻片，盖 玻片，镊子，培养皿，滤纸，试管，试管架，滴管，无荧光载片，移液器，1.5 ml 离心管， 量筒，烧杯。 （三）试剂： 1. 蒸馏水 2. 0.35 M 氯化钠溶液：取 20.48 g 氯化钠，用蒸馏水溶解，定容至 1 L。 3. 0.1 %吖啶橙(acridine orange)：称取 0.1g吖啶橙，加蒸馏水 100 ml溶解，作为母液贮 棕色瓶中，放冰箱备用。 4. 0.01%吖啶橙(acridine orange)：临用前，取 1 ml 0.1 %吖啶橙母液，加 9 ml蒸馏水， 混匀。 【实验步骤】 15