实验六叶绿体的分离与荧光观察 【实验目的】 1.了解叶绿体分离的一般原理和方法。 2熟悉应用荧光显微镜观察叶绿体的荧光现象。 【实验原理】 差速离心(difertifuio)是利用不同物质颗粒沉降系数的差别，由低速向高 速离心时，各种沉降系数不同的颗粒可先后分批沉淀下来，达到分离的目的。颗粒的沉降系 数取决于颗粒的大小、形状和密度，也同高心力以及悬浮介质的粘度有关。沉降系数差别在 一个或几个数量级的颗粒，可以用差速离心法分离，该方法简单，但分辨率不高，沉淀系数 在同一个数量级内的各种粒子不容易分开，常用于其他分离手段之前的粗制品提取。采用差 速离心方法，在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，可用于分离不同大小的细胞和细 胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、叶绿体、线粒体、溶酶体与过氧化物酶 体、内质网与高基体、最后为核蛋白体和大分子。通过差速离心可对叶绿体进行分离制备。 叶绿体(chloroplast)是绿色植物细胞所特有的能量转换细胞器。一般呈椭球形，长径 5~10um,短径2~4um,厚2-3um。有双层被膜与胞质分开，内有片层膜，含叶绿素，光合 作用就在片层膜上进行.高等植物的叶肉细胞一般含50~200个叶绿体，可占细胞质的40% 叶绿体的数目因物种细胞类型，生态环境，生理状态而有所不同。叶绿体由叶绿体外被 (chloroplast envelope)、类囊体(thylakoid)和基质(stroma)3部分组成。利用低速离心 机可以分离叶绿体，其分离在等渗溶液(0.35M氯化钠或0.4M蔗糖溶液)中进行，目的是 防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。 外膜 内膜 叶绿体基粒 类囊体 基质 图6叶绿体的结构模式图 荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其基本原理是利用一定波长的激发光对样 品进行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定实验六 叶绿体的分离与荧光观察 【实验目的】 1.了解叶绿体分离的一般原理和方法。 2.熟悉应用荧光显微镜观察叶绿体的荧光现象。 【实验原理】 差速离心(differential centrifugation) 是利用不同物质颗粒沉降系数的差别，由低速向高 速离心时，各种沉降系数不同的颗粒可先后分批沉淀下来，达到分离的目的。颗粒的沉降系 数取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。沉降系数差别在 一个或几个数量级的颗粒，可以用差速离心法分离，该方法简单，但分辨率不高，沉淀系数 在同一个数量级内的各种粒子不容易分开，常用于其他分离手段之前的粗制品提取。采用差 速离心方法，在密度均一的介质中由低速到高速逐级离心，可用于分离不同大小的细胞和细 胞器。在差速离心中细胞器沉降的顺序依次为：核、叶绿体、线粒体、溶酶体与过氧化物酶 体、内质网与高基体、最后为核蛋白体和大分子。通过差速离心可对叶绿体进行分离制备。 叶绿体（chloroplast）是绿色植物细胞所特有的能量转换细胞器。一般呈椭球形，长径 5~10um，短径 2~4um，厚 2~3um。有双层被膜与胞质分开，内有片层膜，含叶绿素，光合 作用就在片层膜上进行。高等植物的叶肉细胞一般含 50～200 个叶绿体，可占细胞质的 40%， 叶绿体的数目因物种细胞类型，生态环境，生理状态而有所不同。叶绿体由叶绿体外被 （chloroplast envelope）、类囊体（thylakoid）和基质（stroma）3 部分组成。 利用低速离心 机可以分离叶绿体，其分离在等渗溶液（0.35M 氯化钠或 0.4M 蔗糖溶液）中进行，目的是 防止渗透压的改变引起叶绿体的损伤。 图 6 叶绿体的结构模式图 荧光显微镜是一种较为常用的的光学显微镜，其基本原理是利用一定波长的激发光对样 品进行激发，使之产生一定波长的荧光，从而用于对样品结构或其组分进行定性、定位、定 14